四川省杰出青年学科带头人基金(2012JQ0005)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：刘聪楼江燕王思郭莲娣王小军更多>>
- 相关机构：四川大学西南民族大学山西医科大学更多>>
- 发文基金：四川省杰出青年学科带头人基金四川省应用基础研究计划项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- DNA损伤应答靶向抑制剂对卵巢癌细胞的化疗增敏作用被引量：3
- 2016年
- 目的观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物(顺铂等)在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀伤能力。MTT法检测不同药物作用后OVCAR-8的增殖抑制情况;免疫荧光法检测OVCAR-8中磷酸化组蛋白2A变体(γH2AX)和p53结合蛋白1(53BP1)的表达,观察二者在DNA损伤位点的募集和形成灶点的能力。结果毛细血管扩张共济失调突变蛋白(ATM)/ATM和Rad 3相关蛋白(ATR)抑制剂与顺铂联用能抑制损伤修复机制的活化,明显减弱OVCAR-8细胞的增殖活力(P<0.01),促进其凋亡;在羟基脲和Wortmannin联合处理时,OVCAR-8细胞的ATR转导信号(如γH2AX)减弱,细胞生存率明显降低(P<0.05);多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂与顺铂联合处理OVCAR-8细胞未发现明显的增敏作用(P>0.05)。结论适当的DNA损伤应答抑制剂有潜力提高常规化疗药物的抗肿瘤效果,以达到快速清除肿瘤细胞和防止产生耐药性的效果。
- 蔡思源唐子执曾鸣王小军楼江燕刘聪陈杰
- 关键词：卵巢肿瘤顺铂耐药抑制剂
- DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能及其在人卵巢癌中的突变研究被引量：2
- 2016年
- 目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型和突变体,通过免疫印迹和免疫荧光等方法研究该基因在DNA损伤后的亚细胞定位和DNA损伤信号通路中的作用;此外,抽提1例正常卵巢组织和16例卵巢癌标本的mRNA进行半定量RT-PCR扩增,对这些标本中的WDR70基因进行测序分析。结果 WDR70基因沉默和过表达其突变体导致同源重组功能蛋白——DNA复制蛋白A(RPA32)磷酸化修饰水平降低和重组酶——重组蛋白A(RAD51)向DNA损伤位点招募的能力减低;WDR70的功能障碍还导致染色体的断裂增多;同时,卵巢癌样本中发现多例WDR70突变型别。结论在体外系统中,WDR70参与DNA损伤修复过程,沉默或过表达其突变体将导致同源重组修复缺陷和染色体结构的不稳定;在卵巢癌基因组中,WDR70基因频繁出现突变,可能导致相应的DNA修复缺陷和基因组不稳定性的发生。因此,WDR70是一个潜在的卵巢癌抗癌基因。
- 郭莲娣王丹杨帆梁语珈杨雪琴覃意扬任来峰曾鸣唐子执王小军王思刘聪楼江燕陈杰
- 关键词：卵巢癌
- 上皮性卵巢癌细胞原代培养及放化疗相关的DNA损伤应答机制的研究被引量：6
- 2014年
- 目的通过上皮性卵巢癌组织细胞原代培养,检测DNA损伤应答过程中相关蛋白细胞定位的动态变化。方法选取临床新鲜卵巢上皮性肿瘤标本28例(交界性浆液囊腺瘤6例,高分化浆液腺癌5例,中分化浆液腺癌6例,低分化浆液腺癌11例),组织块经胶原酶A消化后培养,比较不同培养基(MCDB/M199培养基、原代细胞专用培养基、DMEM培养基)对原代肿瘤细胞正常形态维持、增殖潜力及纤维化的影响。离子射线(X光)、喜树碱(CPT)处理诱导细胞DNA损伤,间接免疫荧光法检测ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路中DNA损伤(双链断裂)应答相关蛋白〔p53结合蛋白1(53BP1),磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)〕的应答特征。结果 MCDB/M199培养基有利于卵巢上皮性肿瘤细胞维持正常形态并减缓纤维化。未经处理前各级别卵巢肿瘤原代细胞中均存在不同程度的内源性损伤(53BP1、γ-H2AX灶点),且随着肿瘤细胞恶性程度的增加,53BP1、γ-H2AX灶点逐渐增多(P<0.05)。X光、CPT可以在卵巢癌原代细胞中诱导大量DNA损伤,提示原代培养的细胞有经典的DNA损伤应答反应。结论成功建立了卵巢上皮性肿瘤直接分离培养方法,在卵巢上皮性肿瘤发展过程中,ATM转导通路检验点信号可被内源性损伤激活,CPT、X线处理会造成上皮性卵巢癌原代细胞中ATM通路的进一步激活来抑制肿瘤增殖,阻止肿瘤进展。
- 王思郭莲娣贾月改杨娟王鑫刘聪楼江燕
- 关键词：卵巢肿瘤原代细胞培养DNA损伤
