广东省自然科学基金(04021019)
- 作品数：6 被引量：10H指数：1
- 相关作者：邓列华胡云峰郭秀枝林泽赵永铿更多>>
- 相关机构：暨南大学附属第一医院陕西省人民医院福建医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达
- 2011年
- 目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6bLI）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有HPV6bLI的细胞模型。方法表达质粒pEGFP—HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接，酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞（NIH3T3），荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达，RT—PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成。结果成功构建含HPV6bL1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP。重组体成功转染进NIH3T3细胞，并用G418筛选。同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达。进一步进行RT—PCR，检测到HPV6bL1mRNA的生成。结论成功构建携带HPV6bL1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞。经荧光倒置显微镜观察及RT—PCR方法检测证明HPV6bLI在NIH3T3细胞内成功表达。
- 邓列华殷董胡云峰田静计雄飞范洪涛郭秀枝林泽赵永铿
- 关键词：细胞内表达哺乳动物NIH3T3细胞绿色荧光蛋白真核表达质粒
- 垂直传播新生儿性病的诊治及预防被引量：1
- 2012年
- 性传播疾病不仅对患者的身体、生活、工作等方面带来许多不利影响，还可通过垂直传播方式影响患者下一代的健康，从而对家庭、下一代造成严重后果。新生儿对性病病原体的抵抗力弱，容易造成不良预后，其中以梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒、淋球菌、沙眼衣原体及人乳头瘤病毒感染最常见。
- 邓列华
- 关键词：新生儿人乳头瘤病毒感染单纯疱疹病毒性传播疾病性病病原体
- HPV6bL1短发夹shRNA表达质粒的构建及鉴定
- 2006年
- 目的用pSilencer2.1质粒载体构建人类乳头瘤病毒6b型L1衣壳蛋白HPV6bL1短发夹shRNA质粒重组体,并进行序列分析,为探索尖锐湿疣基因抗体防治研究治疗的新途径打好基础。方法用DNA重组技术将针对人HPV6bL1基因的不同部位所设计的3对设计有小发夹结构的2对DNA序列。经退火成互补双链,再克隆至pSilencer2.1-U6 neo质粒载体中构建重组体,转化DH5а菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。结果成功构建了HPV6bL1shRNA质粒重组体。结论HPV6bL1 shRNA质粒重组体的成功构建为研究尖锐湿疣基因靶向抗体打下基础。
- 邓列华田静郭秀枝范洪涛
- 关键词：RNA干扰质粒载体
- 尖锐湿疣组织中生存素、环氧合酶-2和血管内皮生长因子的表达及其与血管生成的关系被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨生存素、环氧合酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）在尖锐湿疣组织中的表达及其与尖锐湿疣血管生成的关系.方法 应用免疫组化PowerVision法对60例尖锐湿疣组织、21例正常包皮组织中生存素、COX-2、VEGF蛋白进行检测,根据CD105阳性的血管内皮细胞计数来测定尖锐湿疣组织微血管密度（MVD）.结果 生存素在尖锐湿疣组织中阳性表达率为56.67%,正常包皮组织中为9.52%;COX-2在尖锐湿疣组织中阳性表达率为63.33%,正常包皮组织中为0;两组比较,差异均有统计学意义（P值均〈0.05）.生存素、COX-2在两组的阳性表达强度比较差异均有统计学意义（P值均〈0.05）.VEGF在尖锐湿疣组织、正常包皮组织中阳性表达率均为100%,但两组阳性表达强度比较差异有统计学意义（P〈0.05）.尖锐湿疣组织的MVD值（16.38±5.46）明显高于正常包皮组（0.62±0.44）,差异有统计学意义（P〈0.05）.在尖锐湿疣组织中,生存素、COX-2与VEGF蛋白表达两两之间,生存素与MVD,COX-2与MVD均呈显著正相关.结论 生存素、COX-2、VEGF在尖锐湿疣组织中表达程度均高于对照组.
- 邓列华李璟蓉胡云峰许向前吴焱徐瑾郭秀枝刘洁范洪涛林泽赵永铿
- 关键词：尖锐湿疣生存素环氧合酶2
- 广州地区复发尖锐湿疣患者HPVL1基因原核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建广州地区复发尖锐湿疣患者人类乳头瘤病毒晚期基因L1的原核表达质粒,为进一步表达L1蛋白奠定基础。方法应用定向克隆策略,将尖锐湿疣患者病变组织中人类乳头瘤病毒L1晚期基因克隆到原核表达载体PQE40。结果通过酶切及测序鉴定出重组子HPV6bL1-PQE40。结论HPV6bL1的原核表达质粒构建成功。
- 胡云峰邓列华李姝赵刚郭秀枝范洪涛
- 关键词：原核表达质粒L1基因复发L1蛋白定向克隆重组子
- 人乳头瘤病毒6b型L1基因的克隆及表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)6b型晚期基因L1(HPV6bL1)在真核细胞内的表达。方法 PCR技术扩增原核重组质粒PQE40-HPV6bL1中L1基因,酶切后与真核表达质粒PEGFP-C1连接,转化入感受态大肠埃希菌DH5α,经扩增后酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序。以重组质粒PEGFP-HPV6bL1转染COS-7细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达,RT-PCR检测HPV6bL1 mRNA的表达。结果双酶切及测序鉴定显示,重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,PEGFP-HPV6bL1构建成功。重组体成功转染进COS-7细胞,在荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测到HPV6bL1 mRNA的表达。结论建立了HPV6bL1绿色荧光真核表达系统,为研究该蛋白质的功能奠定了基础。
- 邓列华计雄飞胡云峰殷董田静郭秀枝LIU JieFAN Hong-tao林泽赵永铿
- 关键词：转染基因表达
