国家自然科学基金(30671091)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
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- 乙酰化肌细胞增强因子2D调节Nur77基因对T细胞凋亡的影响
- 2008年
- 目的:Nur77是介导T细胞凋亡的重要基因,它的激活需要第二信使钙离子,而Nur77基因启动子的钙反应元件是转录因子肌细胞增强因子2D的结合位点。探讨在Nur77诱导T细胞凋亡过程中肌细胞增强因子2D是否可以被乙酰化,以及通过调节Nur77基因乙酰化对T细胞凋亡的影响。方法:实验于2006-11/2007-09在吉林大学第一医院血液肿瘤科完成。①材料:大肠杆菌DH5α、pcDNA3质粒由吉林大学第一医院中心研究室保存。pET32M质粒、Flag-p300质粒、pSilencerTM-p300RNAi质粒由香港科技大学Zhengguo Wu博士馈赠。NFATp质粒由哈佛大学Yun Chen博士馈赠。Jurkat细胞由吉林大学第一医院血液肿瘤科提供。②实验方法:PCR法产生全长的Nur77和依赖Nur77的荧光报告基因被亚克隆到pcDNA质粒中,产生的肌细胞增强因子2D(1-514)、(1-121)、(1-300)、(301-514)各片段以及含4个赖氨酸(K245/K250/K267/K279)位点突变为精氨酸位点的肌细胞增强因子2D(4KR)突变体亚克隆到pcDNA后在氨基端含有Flag抗原簇,于细菌表达载体上进行质粒构建,验证正确的质粒使用脂质体DMRIE-C进行转染。③实验评估:将Nur77荧光报告基因与肌细胞增强因子2D、p300、NFATp共转染到Jurkat细胞中,检测p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77转录的影响。免疫沉淀法检测内源性肌细胞增强因子2D是否能够被乙酰化,以及阻滞p300表达后是否影响其乙酰化。体外乙酰化法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化位点。荧光素报告分析法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化功能缺失对Nur77转录活性的影响。采用流式细胞仪检测其功能缺陷对Nur77诱导T细胞凋亡的影响。结果:①肌细胞增强因子2D与NFATp的二聚体虽然不能促进Nur77的转录,但p300、NFAT、肌细胞增强因子2D的三聚体却能明显促进Nur77的转录,且p300与肌细胞增强因子2D的二聚体也明显促进Nur77的转录。②PMA/Iono活化钙信号传导通路后,肌�
- 杨艳萍王冠军马克威
- 关键词：细胞凋亡乙酰化
- 肌细胞增强子2的乙酰化功能缺陷后的功能变化
- 2007年
- 目的探讨肌细胞增强子2C(MEF2C)乙酰化功能缺陷后的功能改变。方法用荧光素酶报道分析检测MEF2C的乙酰化功能缺陷对其转录活性的影响,用电泳迁移率分析检测MEF2C的乙酰化缺陷对其DNA结合功能的影响,用免疫染色方法检测MEF2的乙酰化缺陷对其协同肌细胞生成素的作用,用免疫共沉淀的方法检测乙酰化缺失的MEF2突变体对肌肉分化的影响。结果MEF2乙酰化功能缺陷后对其本身的转录活影响较小,主要降低了它的DNA结合功能,降低了它对肌细胞生成素的协同作用,抑制了肌肉的分化。结论MEF2C的乙酰化功能缺陷影响其分子本身的生物活性,因此为进一步研究MEF2的分子机制奠定了基础。
- 杨艳萍李薇宋艳秋杜忠华许颖王冠军马克威
- 关键词：乙酰化转录
- 吉西他滨联合顺铂方案在非小细胞肺癌术后辅助化疗中的疗效及影响因素分析被引量：13
- 2013年
- 目的:观察术后接受吉西他滨联合顺铂(GP)方案辅助化疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的近期疗效,探讨影响疗效的因素并分析其不良反应。方法:回顾性分析68例NSCLC术后且行GP方案辅助化疗患者的临床资料。采用Kaplan-Meier法绘制无病生存曲线,不同亚组间用Log-rank时序检验;单因素、多因素分析采用COX比例风险回归模型。结果:本组患者整体中位无复发生存时间为33.7个月,随访1年以上的患者56例,1年无病生存率为83.9%,随访2年以上的患者25例,2年无病生存率为72.0%。单因素分析,临床分期(P<0.05)、病理类型(P<0.05)、分化程度(P<0.05)是影响近期疗效的因素;多因素分析,临床分期(P<0.05)、分化程度(P<0.05)是影响近期疗效的独立因素。主要的不良反应为Ⅲ-Ⅳ度骨髓抑制[包括粒细胞减少(33.9%),白细胞减少(20.6%),贫血(4.4%),血小板减少(4.4%)]和Ⅲ-Ⅳ度恶心及呕吐(10.3%)。结论:GP方案在NSCLC患者术后辅助化疗中的1、2年疾病控制率高,不良反应轻;其中临床分期及分化程度是NSCLC患者术后接受GP方案辅助化疗近期疗效的影响因素。
- 李恩喜尹威民王旭马克威
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案吉西他滨顺铂无病生存率
- 三氧化二砷抑制NB4细胞增殖机制的探讨被引量：2
- 2009年
- 目的通过检测NB4细胞活化JAK1蛋白水平探讨三氧化二砷（As2O3）对其增殖抑制的分子生物学机制。方法利用Westernblot检测NB4细胞JAKl蛋白表达及磷酸化水平；用小分子RNA（siRNA）干扰NB4细胞JAKl蛋白的表达及转染JAK1质粒使NB4细胞内JAK1过表达；应用MTT法及锥虫蓝拒染法观察在JAK1基因沉默或过表达的状态下，As2O3抑制NB4细胞增殖的变化情况；在此基础上利用Westernblot方法进一步检测磷酸化JAK1蛋白（p-JAK1）及细胞周期抑制蛋白P21的变化。结果NB4细胞内可检测到JAKJ蛋白稳定表达，但未检测到其磷酸化；As2O3作用NB4细胞后，JAK1磷酸化水平增强；JAK1siRNA转染NIM细胞后JAK1蛋白表达水平明显低于非特异性siRNA转染组（即laminsiRNA转染组）及空白对照组；且在JAK1siRNA转染组As2O3抑制NIM细胞增殖作用减弱，4μmol／LAs2O3对JAK1siRNA转染组NB4细胞增殖抑制率为49．12％，较非特异性siRNA组（74．58％）及空白对照组（72．33％）明显下降；JAKl质粒转染NB4细胞后野生型及突变型JAK1质粒组较空质粒组JAK1蛋白表达水平显著升高，且在野生型JAK1质粒转染组，As2O3抑制NB4细胞增殖作用增强，4μmol／L As2O3对野生型JAK1质粒转染组NIM细胞增殖抑制率为69．53％，较突变型JAKl质粒组（37．26％）及空质粒组（39．61％）明显升高；As2O3作用NIM细胞后P21蛋白的表达水平上调。结论JAK1蛋白在NB4细胞内稳定表达但没有活性；As2O3通过激活JAK1蛋白抑制NB4细胞增殖；As2O3激活JAK1蛋白后通过上调P21的表达而抑制NB4细胞增殖。
- 杨国姿李薇马克威杜忠华李玲
- 关键词：三氧化二砷JAK1细胞系NB4
- 小鼠骨骼肌干细胞蛋白标志JAK的发现
- 2012年
- 目的通过骨骼肌卫星细胞的体外培养,探讨骨骼肌干细胞蛋白表达标志Pax7,发现新的与骨骼肌干细胞的生长、分化密切相关的表达蛋白。方法采用两种小鼠骨骼肌干细胞分离、纯化及培养方法,一种是采取成年小鼠的趾短屈肌(FDB)分离切割后,体外培养出单个骨骼肌干细胞;另一种是取成年小鼠FDB,分离出单个肌纤维丝(fiber)并体外培养。应用免疫荧光染色法对骨骼肌干细胞进行鉴定。运用RNAi技术将JAK1蛋白敲除。结果发现Pax7表达阳性的细胞质内有JAK1蛋白表达,并运用RNAi技术将JAK1蛋白敲除,结果显示骨骼肌干细胞迅速分化。结论 FDB肌纤维的体外培养是一个良好的体内肌肉状态的模型,同时发现了一种新的与骨骼肌增殖分化有关的骨骼肌干细胞蛋白标志JAK1。
- 蒋荣娜盛辉杨波辛维娜乔青闫瑞华
- 关键词：骨骼肌干细胞卫星细胞JAK1
