国家自然科学基金(30671081)
- 作品数：19 被引量：33H指数：5
- 相关作者：邵义祥刘春吴刘成管怀进殷小敏更多>>
- 相关机构：南通大学泰州市中医院南通大学附属海安医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠上皮细胞培养及其在EOB研究中的应用
- 2012年
- 小鼠眼睑发育需要表皮角质形成细胞的增殖、分化、凋亡及迁移的协调作用。表皮角质形成细胞是研究眼睑闭合不全机制重要的细胞模型。表皮角质形成细胞培养时,贴壁差,增殖力低,生活力弱,生长条件要求高,传代次数有限。对近年来表皮角质形成细胞的体外培养方法及其在遗传性眼睑闭合不全研究中的应用进行综述,以期为表皮角质形成细胞的长期培养和研究人类先天性眼睑发育缺陷机制提供参考。
- 卢泽艳邵义祥
- 关键词：皮肤角质形成细胞体外培养眼睑闭合不全
- B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4突变候选基因克隆及测序
- 2012年
- 目的对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoRE酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由c转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸（P）变成谷氨酰胺（Q）。结论Ddx4基因发生单碱基突变，表明该突变可能与B6－co小鼠的EOB表型相关，但是有待于进一步研究。
- 李瑶吴刘成卢泽艳郑良凤葛良玉邵义祥
- 关键词：角膜混浊
- SNP标记对角膜混浊小鼠突变相关基因的精细定位被引量：15
- 2010年
- 为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提取F2代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明:B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283～113 397 654bp之间,因该区间内有5个已知基因,其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关,提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。
- 蒋荧梅刘春吴刘成邵义祥
- 关键词：SNP突变基因基因定位
- B6-Co小鼠眼睑体外培养的形态学研究被引量：1
- 2011年
- 目的:通过体外组织培养,研究小鼠眼睑体外生长发育情况。方法:剖宫产取18.5dpc胎鼠,分别切取正常彼此融合的上下眼睑及开裂的眼睑,在琼脂小岛上做组织培养,动态观察眼睑外形变化,并作HE染色观察。结果:18.5dpc胎鼠正常眼睑经过14d的培养未发生分离,睑裂沟处的组织松散,细胞凋亡呈无序性;开裂眼睑上皮细胞增殖受阻,周皮与间质部位发生分离。结论:琼脂小岛法体外培养小鼠眼睑,其组织结构及细胞增殖与迁移都不能完全重现体内情况,可能还需要添加多种生长因子。
- 缪进王生存刘春邵义祥
- 关键词：眼睑多种生长因子小鼠
- C57BL/6小鼠葡萄球菌性角膜感染模型的建立及相关研究被引量：5
- 2010年
- 目的以乙基亚硝基脲(ENU)诱变技术建立小鼠葡萄球菌性角膜感染模型,探讨其主要条件致病菌的生物学特性。方法以ENU(150mg/kg)腹腔注射10周龄雄性C57BL/6小鼠,60d后与其同品系雌性小鼠配种,F1代小鼠中发现角膜混浊小鼠,以具有角膜混浊表型小鼠与C57BL/6小鼠回交的方式繁育。对角膜混浊小鼠角膜感染菌进行分离、培养、纯化、鉴定,并使用不同抗生素进行药物敏感试验。结果建立了稳定的小鼠葡萄球菌性角膜感染模型。从自发性角膜混浊(B6-Co)小鼠眼部成功分离纯化了松鼠葡萄球菌,筛选出了对该菌敏感及耐药的抗生素。对该菌敏感的抗生素有阿奇霉素、克林霉素、氯霉素、庆大霉素、利福平、四环素、阿米卡星、复方新诺明、米诺环素、左氟沙星、头孢噻吩、头孢噻肟、呋喃唑酮;对该菌耐药的抗生素有头孢西丁、青霉素、氨苄西林、新生霉素;属于中间态的抗生素为呋喃妥因。结论C57BL/6小鼠葡萄球菌性角膜感染模型为自发性动物模型,系凝固酶阴性葡萄球菌感染所致,以松鼠葡萄球菌为主。
- 刘春袁志云杨菲菲管怀进邵义祥
- 关键词：C57BL/6小鼠角膜混浊抗生素
- B6-Co小鼠角膜病的细菌学因素探讨被引量：4
- 2008年
- 目的探讨B6-Co小鼠角膜浑浊形成的细菌学因素。方法以正常B6和B6-Co小鼠为研究对象,从不同日龄组的小鼠眼部取角膜分泌物或角膜刮片,分别接种到血平板和营养肉汤上,恒温培养24h。挑取菌落或肉汤管内的悬浮液涂片,革兰氏氏染色,镜检,记录结果。将纯化培养获得的细菌进行鉴定。结果正常B6小鼠与角膜浑浊小鼠存在角膜细菌学差异。结论B6-Co小鼠角膜混浊与微生物感染有关。
- 邵义祥殷小敏王春中蒋荧梅管怀进
- 关键词：角膜病细菌学发病机制
- 遗传缺陷性小鼠角膜炎模型的超微病理观察被引量：5
- 2008年
- 目的观察不同时段遗传缺陷性小鼠角膜炎模型角膜组织的形态学变化。方法应用ENU诱变技术建立小鼠角膜炎模型;用透射电镜观察在不同时期角膜感染部位的超微结构改变,并辅以光镜观察。结果成功建立小鼠模型;在模型小鼠出生后的不同时段中,电镜下小鼠角膜基质内可见有细菌感染、炎症细胞浸润、成纤维细胞及新生毛细血管增生等炎症改变。结论透射电镜和光镜研究手段能有效地在组织和超微结构水平研究角膜感染时的动态变化,为研究该疾病提供可靠的形态学依据。
- 唐建忠朱昌来邵义祥管怀进林琳张天一
- 关键词：细菌性角膜炎透射电子显微镜小鼠
- 角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析被引量：4
- 2011年
- 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。
- 吴刘成刘春蒋荧梅王生存邵义祥
- 关键词：PCR扩增
- B6-Co突变系小鼠眼睑组织差异表达蛋白筛选
- 2018年
- 为从蛋白质水平上探讨B6-Co突变系小鼠眼睑发育缺陷的发生机制,利用蛋白质组学技术分析B6-Co突变系小鼠和B6小鼠眼睑组织蛋白质组,以寻找B6-Co突变系小鼠眼睑组织的差异表达蛋白。取胚胎期16.5dB6-Co小鼠与B6小鼠眼睑组织,提取眼睑组织总蛋白,通过双向凝胶电泳技术检测,共筛选出29个差异蛋白点,其中7个蛋白点表达上调,22个蛋白点表达下调;再利用质谱分析结合数据库检索,共鉴定出6个表达上调蛋白,18个表达下调蛋白。研究结果表明,B6-Co小鼠胚胎期差异蛋白表达与该突变系小鼠的眼睑发育缺陷密切相关,但其相关机制有待深入研究。
- 侯小凡宋鸿雁杨纤纤宋添铖邵义祥
- 关键词：眼睑双向凝胶电泳差异蛋白质谱
- 遗传性角膜病小鼠生物学特性观察被引量：3
- 2009年
- 目的:研究通过ENU诱变手段获得的遗传性角膜病小鼠B6-Co的生物学特性。方法:观察比较遗传性角膜病小鼠与正常B6小鼠的繁殖学指标、生长发育参数,B6-Co不同表型间脏器重量、脏器指数、血常规、尿常规以及行为学方面的异同。结果:B6-Co小鼠不育率22%、平均产仔数5.62±2.55只、离乳成活率56.59±41.22显著低于正常的B6小鼠,而胎间隔29.50±10.50天比正常B6小鼠短。B6-Co小鼠出生后2周内生长发育与正常B6小鼠基本一致,2周后,其生长发育慢于正常B6小鼠。B6-Co小鼠雌雄间的眼球、肺、胸腺、肾上腺的脏器指数差异有统计学意义。B6-Co表型异常小鼠与B6-Co表型正常小鼠相比,肺、肾上腺、子宫、睾丸的脏器系数差异有统计学意义。B6-Co小鼠表型异常小鼠在血红蛋白和红细胞数量上异于B6-Co表型正常小鼠。平衡木的成绩得分:B6-Co表型正常小鼠3.50±0.69、B6-Co单眼小鼠2.17±0.78、B6-Co双眼小鼠1.87±0.80依次降低,且与角膜病变的程度呈负相关。在抓绳和筑巢实验中,三组成绩差异无统计学意义。结论:由于基因突变导致遗传性角膜病小鼠的繁殖性能下降,生长发育受到影响。B6-Co小鼠各表型间脏器系数有差异,血常规的多项指标有差异。B6-Co表型异常小鼠运动协调能力、探索能力受到一定的影响。
- 朱顺星孙丽刘春邵义祥
- 关键词：小鼠行为学测试生物学特性
