广东省自然科学基金(U0932005)
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
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- 碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌缺血再灌注不同时间肌浆网钙泵活性的影响
- 2013年
- 碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide,F2）是我课题组合成的一个新化合物（专利号：ZL96119098．1）。以往一系列研究表明，F2可以改善心肌缺血再灌注（ischemia／reperfusion，I／R）造成的血流动力学变化和酶学变化、缩小心肌梗死面积、减轻再灌注心肌组织炎症，对心肌I/R损伤具有全面的保护作用。
- 张艳美王春燕李伟秋刘幸平郑燕珊徐涵郑付春
- 关键词：碘化N-正丁基氟哌啶醇钙泵活性HALOPERIDOL肌浆网血流动力学变化心肌梗死面积
- ERK介导的碘化N-正丁基氟哌啶醇非L-型钙通道依赖地保护缺氧复氧心肌细胞的研究
- 2015年
- 目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞无外钙(零钙液)缺氧/复氧(H/R)时环磷酸腺苷(c AMP)/蛋白激酶A(PKA)/细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路及细胞损伤的作用。方法建立新生大鼠心肌细胞零钙液H/R模型,于正常培养基、缺氧液和复氧液中加入F2(1×10-6 mol/L)。采用蛋白印迹法检测心肌细胞磷酸化ERK(p-ERK1/2)、总ERK1/2及PKA蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌细胞c AMP的水平;比色法检测培养细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Hoechst 33342染色法检测心肌细胞凋亡情况。结果零钙液H/R可激活心肌细胞ERK1/2,使心肌细胞培养液中LDH浓度升高,心肌细胞凋亡增加;F2和ERK1/2抑制剂U0126及PD98059可下调零钙液H/R所致p-ERK1/2蛋白高表达,抑制细胞LDH漏出,减少细胞凋亡;ERK1/2激动剂表皮生长因子(EGF)可拮抗F2对零钙液H/R心肌细胞p-ERK1/2高表达的抑制作用,进而拮抗F2的心肌保护作用。零钙液H/R对培养心肌细胞c AMP含量及PKA蛋白表达无影响,F2对零钙液H/R状态下心肌细胞c AMP含量及PKA蛋白表达无影响。结论 F2可通过非L-型钙通道依赖机制拮抗心肌细胞H/R损伤,这可能与其抑制非L型钙通道依赖的ERK1/2信号通路激活有关,但与c AMP/PKA信号通路无关。
- 郑付春陈高勇李振鹏李伟秋刘幸平徐涵石刚刚张艳美
- 关键词：碘化合物心肌缺氧细胞外信号调节MAP激酶类
- 维拉帕米对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用被引量：2
- 2013年
- 目的观察维拉帕米对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致损伤的作用及其机制。方法制作心肌细胞H/R损伤模型。倒置显微镜和透射电子显微镜下观察心肌细胞形态和结构的变化;双抗体夹心光化学法检测心肌细胞培养上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,cTnI)的浓度;ELISA方法检测上清液中TNF-α的含量;Western-blot及Northern-blot方法分别检测培养心肌细胞中早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)基因和蛋白的表达水平。结果缺氧及复氧过程中给予维拉帕米能改善H/R所致心肌细胞形态结构的损伤,减轻H/R所致cTnI和TNF-α的漏出或分泌,抑制H/R所致的心肌细胞Egr-1基因和蛋白过量表达。结论维拉帕米对培养心肌细胞H/R损伤具有多重保护作用,其机制与其抑制Egr-1基因及蛋白过量表达有关。
- 张艳美李伟秋郑燕珊徐涵刘幸平郑付春
- 关键词：维拉帕米心肌细胞缺氧复氧早期生长反应基因-1
- 巨噬细胞缺氧复氧模型的制作方法及其生物学意义被引量：3
- 2013年
- 目的:建立一种简单可行的巨噬细胞缺氧复氧(H/R)模型。方法:采用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法制造细胞缺氧环境。巨噬细胞系RAW264.7分为对照组、缺氧(30、60和120min)复氧(15或30min)组及H/R+不同剂量的依达拉奉(EDA)组,借助于倒置荧光显微镜及流式细胞仪观测巨噬细胞内活性氧(ROS)浓度的变化,作为评判H/R模型成功与否的标准。结果:与各自对照组比,缺氧60min复氧15 min组即可引起ROS浓度明显升高(P<0.05),随着H/R时间延长,ROS生成呈进行性增加趋势。ROS清除剂EDA能剂量-依赖地抑制H/R所致ROS的大量生成。结论:应用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法可成功建立巨噬细胞H/R模型,该模型适于不同脏器缺血再灌注损伤共同分子机制的探讨及寻找共同治疗策略的相关研究。
- 张艳美廖晗郑付春李伟秋郑燕珊徐涵刘幸平石刚刚
- 关键词：巨噬细胞缺氧复氧氧化应激
- 巨噬细胞移动抑制因子通过调控自噬抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤被引量：3
- 2018年
- 目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)过程中自噬的影响,并探讨其分子作用机制。方法:利用MIF特异性siRNA瞬时转染H9c2心肌细胞,建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,给予自噬经典抑制剂3-甲基嘌呤(3-MA),蛋白免疫印迹(Western blot)检测MIF、LC3、Cleaved caspase-3以及m TOR蛋白的表达。结果:干扰MIF后可抑制H/R诱导的心肌细胞自噬;自噬抑制剂3-MA抑制H/R诱导的心肌细胞自噬,减少细胞凋亡的发生;沉默MIF后可增加H/R过程中p-m TOR的表达。结论:MIF可通过抑制自噬减少H9c2心肌细胞H/R损伤,其作用机制可能与激活m TOR有关。
- 李金玉黄丹梅张艳美石刚刚汪彬
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子H9C2心肌细胞自噬
- 心脏微血管内皮细胞缺氧复氧时氧化应激时效研究被引量：1
- 2014年
- 目的：研究不同缺氧复氧（H/R）时程下,心脏微血管内皮细胞内氧化应激的时效变化。方法：原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞。采用制备缺氧液与氮气饱和相结合方法制造细胞缺氧模型,复氧换用无血清DMEM培养基。培养的心脏微血管内皮细胞分为对照组和H∶1～4/R∶1 h组。用荧光显微镜、流式细胞仪定性或定量观测细胞内活性氧（ROS）水平。TBA法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA）产量。噻唑蓝法检测细胞生存率。结果：在H1～3 h内（R均为1 h）,细胞内ROS、MDA生成逐渐增加,H∶3 h/R∶1 h组ROS、MDA浓度最高,H∶4 h/R∶1 h组较H∶3 h/R∶1 h组ROS浓度降低（P〈0.05）,与对照组比,ROS、MDA浓度仍显著增加（P〈0.05）。细胞存活率随H/R时间延长逐渐降低。结论：H/R可造成心脏微血管内皮细胞内氧化应激水平增加,且在一定时程内呈进行性加重。
- 鲁诗史郑付春李振鹏李伟秋徐涵张艳美
- 关键词：心脏微血管内皮细胞缺氧复氧氧化应激活性氧
- 碘化N-正丁基氟哌啶醇通过抑制线粒体凋亡通路抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤
- 2017年
- 目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中线粒体凋亡通路的影响,并探讨其分子作用机制。方法建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,将H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、F_2低、中、高剂量组。流式细胞术分析测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞色素C(Cyto C)、Bcl-2、和Bax蛋白表达变化;比色法测定caspase-3的活性。结果与H/R组相比,F_2低、中、高剂量组可明显降低H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞凋亡率;提高Bcl-2/Bax比值;抑制线粒体中Cyto C的释放;减少caspase-3的活性。结论 F_2能够降低H/R后H9c2心肌细胞凋亡率,其机制可能与抑制线粒体通路的细胞凋亡有关。
- 汪彬黄丹梅王远航周巧玲林泓张艳美石刚刚郑付春
- 关键词：碘化N-正丁基氟哌啶醇H9C2心肌细胞细胞色素C
- 钙拮抗剂通过PKCα/ERK1/2通路拮抗心肌细胞缺氧复氧损伤被引量：2
- 2015年
- 目的:观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F2)及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法:建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺氧液和复氧液中加入F2(1×10-6mol/L)及维拉帕米(2×10-6mol/L)。采用Western Blot方法检测心肌细胞磷酸化PKCα(pPKCα)、总PKCα、磷酸化ERK(p-ERK1/2)和总ERK1/2蛋白表达的变化;双抗体夹心光化学测定法检测培养细胞上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,c Tn I)的含量,Hoechst 33342染色法检测心肌细胞早中期凋亡情况,Cell Counting Kit-8比色法检测心肌细胞存活率。结果:H/R激活培养心肌细胞PKCα和ERK1/2,使细胞c Tn I浓度升高,早中期凋亡增加,存活率下降;PKCα抑制剂可下调H/R所致的PKCα和ERK1/2活化程度;ERK1/2抑制剂可抑制H/R所致心肌细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;F2及维拉帕米能够下调H/R所致PKCα和ERK1/2的活化程度,抑制细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;PKCα激动剂和ERK激动剂可拮抗F2对H/R心肌细胞PKCα和ERK1/2激活的抑制作用及对心肌细胞损伤的保护作用。结论:H/R可引起心肌细胞PKCα/ERK1/2通路激活,F2和维拉帕米均可通过调节PKCα/ERK1/2信号通路拮抗心肌细胞H/R损伤。
- 郑付春陈高勇李振鹏李伟秋郑燕珊徐涵石刚刚张艳美
- 关键词：碘化N-正丁基氟哌啶醇心肌细胞缺氧复氧
- 碘化N-正丁基氟哌啶醇通过非外钙机制抗心肌细胞缺氧复氧损伤
- 2013年
- 目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞无外钙缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法建立无外钙(零钙液)的心肌细胞H/R模型,于缺氧液及复氧液中加入1×10-6mol/L的F2。倒置显微镜下观察细胞形态结构及搏动的变化;采用蛋白印迹法检测心肌细胞磷酸化ERK(p-ERK1/2)、总ERK1/2蛋白表达的变化。结果零钙液H/R可引起培养心肌细胞形态结构呈损伤性改变,包括胞体收缩、伪足减少和搏动无力;零钙液H/R可引起培养心肌细胞p-ERK1/2表达增加,但不影响总ERK表达,即可激活培养心肌细胞ERK1/2;F2可以改善零钙液H/R状态下心肌细胞形态结构的损伤。F2对零钙液H/R心肌细胞p-ERK1/2高表达具有抑制作用,但不影响总ERK的表达。结论 F2可通过非外钙依赖机制拮抗心肌细胞H/R损伤,这可能与其抑制零钙液H/R状态下ERK1/2的激活密切相关。
- 张艳美陈高勇李伟秋徐涵郑燕珊刘幸平郑付春
- 关键词：氟哌啶醇缺氧复氧
