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荧光定量PCR法在重组逆转录病毒pLXSN-BDNF滴度测定中的应用被引量：2: 2007年; 目的制备含大鼠脑源性神经营养因子（BDNF）基因的逆转录病毒，建立荧光定量PCR测定滴度的方法。方法扩增BDNF基因，构建重组质粒pLXSN-BDNF，将其转染包装细胞，经G418筛选、病毒浓缩后用荧光定量PCR法和克隆形成法测定滴度。结果经PCR、酶切和测序鉴定，BDNF基因成功插入逆转录病毒载体中，筛选得到稳定的分泌重组病毒细胞系。重组病毒100倍浓缩后经荧光定量PCR法和克隆形成法测定的滴度分别为6．92×10^6拷贝/ml和3．2×10^5CFU/ml，两种方法测得的结果差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功扩增BDNF基因，制备了重组病毒pLX—SN-BDNF，建立了荧光定量PCR检测滴度的方法，为基因治疗青光眼性视神经损伤的实验研究提供重要参考指标。; 周欣荣原慧萍李鸿翼邵正波王雅; 关键词：逆转录病毒

pLXSN—BDNF体外转染神经干细胞及其外源基因的表达: 2009年; 目的建立体外稳定表达脑源性神经生长因子（BDNF）的神经干细胞（NSCs）。方法采用有限稀释法纯化体外培养的NSCs。用重组和空白逆转录病毒感染NSCs，分别采用荧光定量PCR法和ELISA法检测3组（pLXSN．BDNF病毒感染组、pLXSN病毒感染组、空白对照组）NSCs中外源基因的表达水平。结果荧光定量PCR法测定pLXSN-BDNF组BDNF原始模板拷贝数为（19．57±0．65）×10^3 copies／μl，与其余两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；ELISA法测定pLXSN-BDNF组NSCs细胞上清中BDNF含量最高，与其余两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论用携带BDNF的重组逆转录病毒能成功地将外源基因导入NSCs中，为NSCs眼内移植研究，也为基因治疗视神经损伤的量化研究提供实验依据。; 周雪美原慧萍吴东来王雅王卓; 关键词：重组逆转录病毒荧光定量PCR法 ELISA法

免疫磁珠法分离纯化SD大鼠神经干细胞被引量：5: 2009年; 目的应用微小免疫磁珠分离提纯SD胎鼠大脑皮层组织中的神经干细胞并进行培养,为研究神经干细胞的特性与神经干细胞的培养和移植研究创造有利条件。方法取SD胎鼠的大脑皮层组织制成单细胞悬液,用微小磁珠(平均直径≤50 nm)分选出神经巢蛋白(nestin)阳性的细胞群,以流式细胞术检测阳性细胞纯度,以台盼蓝染色法检测细胞活性。结果分离的神经干细胞流式细胞仪检测细胞nestin阳性表达率为(88.5±3.6)%,细胞存活率为(96.3±1.8)%。结论微小免疫磁珠法分离胎鼠脑神经干细胞群落简便、有效,可以为神经干细胞的细胞培养和移植提供细胞来源。; 王雅曲巍周欣荣邵正波原慧萍; 关键词：神经干细胞免疫磁珠神经巢蛋白

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黑龙江省教育厅资助项目(10551187)