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国家自然科学基金(30471155)

作品数:13 被引量:100H指数:5
相关作者:刘媛刘贤进张晓张存政余向阳更多>>
相关机构:江苏省农业科学院南京师范大学江南大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划更多>>
相关领域:农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 13篇中文期刊文章

领域

  • 5篇农业科学
  • 3篇生物学
  • 3篇医药卫生
  • 2篇轻工技术与工...

主题

  • 6篇酶联
  • 6篇酶联免疫
  • 4篇酶联免疫吸附
  • 4篇免疫吸附
  • 4篇抗体
  • 4篇ELISA
  • 3篇免疫
  • 2篇玉米赤霉醇
  • 2篇噬菌体
  • 2篇噬菌体展示
  • 2篇噬菌体展示技...
  • 2篇农药
  • 2篇酶联免疫吸附...
  • 2篇酶联免疫吸附...
  • 2篇菌体
  • 2篇抗原
  • 2篇克隆
  • 2篇半抗原
  • 1篇单链
  • 1篇单链抗体

机构

  • 8篇江苏省农业科...
  • 4篇南京师范大学
  • 3篇江南大学
  • 1篇常熟理工学院
  • 1篇上海交通大学
  • 1篇盐城工学院

作者

  • 8篇刘贤进
  • 8篇刘媛
  • 5篇张晓
  • 4篇余向阳
  • 4篇张存政
  • 3篇张晴晴
  • 3篇程罗根
  • 3篇齐斌
  • 2篇谷文英
  • 1篇龚振明
  • 1篇刘蓉蓉
  • 1篇唐敏
  • 1篇张心明
  • 1篇陈育如
  • 1篇颜春荣
  • 1篇梁颖
  • 1篇谢岩黎
  • 1篇周惠明
  • 1篇李顺玲
  • 1篇王立梅

传媒

  • 3篇江苏农业学报
  • 2篇免疫学杂志
  • 2篇食品与生物技...
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇分析科学学报
  • 1篇吉林农业大学...
  • 1篇农药学学报
  • 1篇Agricu...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2009
  • 5篇2008
  • 3篇2007
  • 2篇2006
  • 1篇2005
13 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
酶联免疫吸附法检测黄精皂苷被引量:2
2006年
利用效价为1:12800(方阵滴定法测得)的兔抗薯蓣皂苷多克隆抗体,建立黄精皂苷酶联免疫吸附(ELISA)检测方法。抗体的最佳稀释度为1:3000,包被抗原的最佳稀释度为1:10000;回归方程I=32.021 logC+189.02,相关系数R^2=0.9974,最低检测下限I10为2.468×10^-3μg/mL。回收率为80.33%~103.88%,与人参皂苷和强心苷的交叉反应率分别为3.24%和7.48%。测得黄精总皂苷质量分数为0.1366%。
齐斌谷文英谢岩黎
关键词:ELISA
玉米赤霉醇酶标抗原的制备及其直接和间接竞争ELISA检测方法的建立与比较被引量:7
2008年
采用活性酯法将半抗原玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与辣根过氧化物酶连接,制备了三种结合比的酶标抗原。通过紫外吸收法和直接非竞争ELISA法对酶标抗原的偶联结果和抗原性进行鉴定。最终选择结合比为1.3∶1的酶标抗原建立直接竞争ELISA检测方法。并对建立的直接竞争ELISA(DC-ELISA)与间接竞争ELISA(IC-ELISA)方法在检出限、检测线性范围、检测时间和二抗的使用方面进行了比较。
刘媛刘贤进余向阳张存政张晓刘蓉蓉龚振明
关键词:玉米赤霉醇
采用噬菌体展示技术筛选玉米赤霉醇的单链抗体被引量:2
2009年
目的从噬菌体单链抗体库中筛选玉米赤霉醇(ZER)的阳性克隆。方法人工抗原ZER-BSA作为包被原,采用负筛选,经过连续3轮固相"亲和-洗脱-富集"筛选,富集了噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,同时采用Trypsin和ZER竞争洗脱2种洗脱方法。ELISA鉴定阳性克隆,运用SDS-PAGE方法对大肠杆菌分泌蛋白进行了时间条件的摸索。结果随着淘洗轮数的增加,特异性噬菌体抗体得到了高度富集,从6个96孔板的克隆中筛选到10株阳性克隆(阳性大于阴性3倍视为阳性克隆),将菌株转换成功的5株测序发现有4株不同的阳性克隆,对一株进行了原核系统的表达,SDS-PAGE确定了目的条带的存在,相对分子质量为Mr28000。结论为在天然噬菌体抗体库中制备玉米赤霉醇的抗体奠定了基础。
张晴晴张晓程罗根刘媛唐敏刘贤进
关键词:噬菌体抗体库单链抗体玉米赤霉醇
Application of Current Hapten in the Production of Broad Specificity Antibodies Against Organophosphorus Pesticides被引量:2
2008年
Diethylphosphono acetic acid (DPA) was used as a current hapten to generate broad specificity polycolonal antibodies against a group of organophosphorus pesticides. Six New Zealand white rabbits were immunized with immunogens synthesized by the active ester method (AEM) or 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodimide method (EDC). The titers of antisera reached 25 600 by AEM and 6 400 by EDC, respectively. Polyclonal antibodies raised against DPA were screened and selected for the competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA). A CI-ELISA for DPA was developed with a detection limit of 3.536 ng mL^-1and an I50 value of 0.182 μg mL^-1. The assay specificity was evaluated by obtaining competitive curves for several structurally related compounds as competitors. The antiserum showed high affinities to chlorpyrifos, diazinon, omethoate, parathion-ethyl and profenofos with I50 of 0.12, 0.15, 0.21, 0.88, 0.97 and 2.5 μg mL^-1, respectively. The results indicate that the assay could be a screening tool for quantitation and semiquantitation determination of the above former five organophosphorus pesticides.
LIU Xian-jin YAN Chun-rong LIU Yuan YU Xiang-yang ZHANG Cun-zheng
Milbemycin Oxime半抗原设计及其抗体制备被引量:22
2005年
通过milbemycin oxime A4、A3(MILO)肟羟基与琥珀酸酐反应,合成了半抗原MILO-5-琥珀酰半酯,采用碳化二亚胺法将其与载体蛋白BSA偶联制备人工抗原.以此人工抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,抗体效价达1:12 800;用此抗体建立的间接竞争酶联免疫吸附(CI-ELISA)检测方法,线性范围在16.00~4 394.18 ng/mL,最低检测限(I10)为6.28 ng/mL.
刘媛刘贤进余向阳张存政陈育如
关键词:OXIME半抗原
有机磷杀虫剂通用结构半抗原的设计及广谱特异性抗体的制备被引量:26
2008年
【目的】制备针对有机磷农药的广谱特异性抗体,用于有机磷农药的免疫快速筛选检测。【方法】设计采用二乙基膦酸乙酸作为通用结构半抗原,用NHS-DCC法和EDC法合成两种人工抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】NHS-DCC法所制得抗血清的最高滴度为25600,EDC法合成的抗原制得的抗血清滴度最高为6400,均获得免疫应答。以二乙基膦酸乙酸为对象建立的间接竞争ELISA检测方法对二乙基膦酸乙酸最低检测浓度0.0035μg·ml-1,抑制中浓度I50为0.182μg·ml-1。经对12种常见磷酸酯类有机磷农药特异性检测反应试验,结果发现:所得抗体对毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷、辛硫磷等农药有特异性反应,I50分别为0.12、0.21、0.24、0.78、0.97、3.8μg·ml-1。【结论】该检测技术可用于毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷等药剂的快速定性或半定量检测。
刘贤进颜春荣刘媛余向阳张存政
关键词:有机磷杀虫剂
抗黄精皂苷多克隆抗体的制备被引量:4
2006年
首先将薯蓣皂苷通过3-羟基位的改造,制成3-琥珀酰薯蓣皂苷,再通过碳二亚胺将其与牛血清白蛋白和卵清蛋白偶联制成免疫原和包被原,免疫新西兰大白兔制备出多克隆抗体,抗体效价为1∶12800,为进一步建立黄精皂苷ELISA方法打下基础。
齐斌谷文英
关键词:薯蓣皂苷多克隆抗体
Development and evaluation of immunoassay for zeranol in bovine urine被引量:2
2007年
基于抗体的酶连接了的高亲密关系 polyclonal 免疫吸着剂试金(ELISA ) 在牛的尿为 zeranol 的数量化离子被开发。根据尿矩阵研究,生产不足道的矩阵干扰的优化冲淡因素在预告的处理作为 1:5 被选择。在改进 ELISA,线性反应范围在 0.02 之间;1 μ g /ml,;察觉限制是为试金的 0.02 μ g /ml。全面恢复;变化(CV ) 的系数在 82%~ 1 的范围 27% ;3.5%~ 8 .8% 分别地。与 zeranol 刺的 36 件牛的尿样品(从 0.2 ~ 10 μ g /ml ) 被 ELISA 检测;液相色层分析法(LC ) 方法,;好关联在二个方法之间被获得(R [2 ]=0.9643 ) 。我们断定这改进 ELISA 是为屏蔽的集体 zeranol 的合适的工具;能是为为在牛的尿的 zeranol 的常规 LC 方法的一种选择。
LIU YuanZHANG Cun-zhenYU Xiang-yangZHANG Zhi-yongZHANG XiaoLIU Rong-rongLIU Xian-jinGONG Zhen-ming
关键词:尿液酶联免疫测定
米尔比霉素肟化物ScFv噬菌体展示抗体库的构建被引量:3
2008年
目的构建具16元大环内酯共性结构小分子物质的特异性抗体库。方法免疫原MILO-BSA免疫小鼠后从脾细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增得到全套抗体重链可变区基因(VH)及轻链可变区基因(VL),SOE-PCR将VH、VL片段拼接扩增得到单链抗体可变区基因片段(ScFv)。将ScFv基因克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化感受态大肠杆菌,辅助噬菌体超感染得到上清液即为噬菌体抗体库。结果RT-PCR扩增出长360bp左右的抗体重链可变区基因(VH)及340bp左右的轻链可变区基因(VL),SOE-PCR扩增得到750bp左右的ScFv基因片段,成功构建了库容量为2.4×106,滴度为2.0×1012pfu/mL的噬菌体单链抗体库。结论构建的抗体库目的片段连接率较高,多样性较好,为下一步16元大环内酯类小分子物质高特异性抗体的筛选奠了基础。
张晓张晴晴温爽刘媛刘贤进
关键词:单链可变区抗体
农药广谱特异性抗体制备技术研究进展被引量:6
2009年
基于抗原-抗体特异性结合反应的农药免疫学检测技术的发展已经日趋成熟,能够帮助实现农药多残留免疫检测的广谱特异性抗体制备技术成为研究热点之一。本文介绍了农药广谱特异性抗体的原理及其常用的3种制备途径,包括选择共性结构半抗原制备抗体,独特型抗体和重组抗体。并对有机磷、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯三大类农药的广谱特异性抗体制备及免疫多残留分析技术的研究现状作一综述。
刘媛余向阳梁颖祝金凤李顺玲张存政刘贤进
关键词:农药
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