国家自然科学基金(81372922)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：医药卫生核科学技术生物学更多>>
- 原核pprI基因活体转染对BALB/c小鼠急性放射损伤保护作用的研究被引量：3
- 2015年
- 目的 研究耐辐射奇球菌pprI基因活体转染对小鼠急性放射损伤的防护作用.方法 采用SPF级纯品系BALB/c雄性小鼠,应用活体电转染技术,将pEGFP-c1空载质粒及pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转入小鼠股前肌肉.应用60Coγ射线进行全身照射,死亡率观察组吸收剂量为6 Gy,观察照后30 d内小鼠死亡率的变化;放射效应观察组吸收剂量为4 Gy,于照后1、7、14、28和35 d观察小鼠外周血象、胸腺、脾脏和骨髓细胞的凋亡率,并于照后第7和28天观察小鼠肺脏和睾丸组织的病理变化.结果 质粒注射剂量为50 μg/50μl,电场强度为200 V/cm时转染肌细胞的效率最高.pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠急性辐射死亡率为30％,显著低于单纯照射组（60.0％）和空载体组（63.3％）（x2=4.90、6.24,P＜0.05）.与单纯照射组、空载体组比较,pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠的外周血白细胞计数在照后1、7、14和28 d显著增高（F=16.26、8.10、6.37、10.74,P＜0.05）,血小板计数在照后第7和14天显著增高（F=7.36、5.71,P＜0.05）,淋巴细胞百分率在照后7d显著增高（F=18.43,P＜0.05）;胸腺和骨髓细胞凋亡率均在照后第1、7、14、28和35天显著降低（F=3.88、14.91、14.14、39.86、5.65,P＜0.05;F=53.70、11.75、21.78、41.40、4.54,P＜0.05）;脾脏细胞凋亡率在照后第1、7、14和28天显著降低（F=97.95、56.61、33.55、14.71,P＜0.05）.pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠肺脏和睾丸的放射病理损伤较轻并且恢复较快.结论 耐辐射奇球菌pprI基因活体电转染对BALB/c小鼠急性放射损伤具有显著的保护作用,为进一步临床应用奠定了实验基础.
- 施怡文玲任丽丽杨占山
- 关键词：耐辐射奇球菌BALB/C小鼠急性放射损伤
- 耐辐射奇球菌PprI蛋白质在毕赤酵母菌中的高效表达及纯化被引量：1
- 2016年
- 目的 利用真核毕赤酵母高效表达原核的耐辐射奇球菌pprI基因,建立高效表达及纯化PprI蛋白质的技术路线。方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性,改造耐辐射奇球菌pprI基因的编码序列,利用PCR技术全合成改造过的pprI基因,并在其N末端添加一个6×His标签。PCR产物经纯化后克隆到毕赤酵母表达载体pHBM-905A中,利用Cop I和Not I双酶切并回收线性化的目的片段后,转化毕赤酵母GS115菌株。将获得的毕赤酵母转化子诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和质谱检测培养上清液,用Ni-NTA柱纯化目的蛋白,BCA法测定蛋白浓度。结果 新合成的耐辐射奇球菌pprI基因编码序列正确,毕赤酵母转化菌株的培养上清液经SDS-PAGE和Western blot均可检测到相对分子质量为43000的目的蛋白条带,经质谱检测证实该目的蛋白为耐辐射奇球菌PprI蛋白。选用Ni-NTA柱获得了大量纯化的PprI蛋白,应用浓度为250 mmol/L的咪唑淋洗时,PprI蛋白洗脱率最高。BCA法测得纯化蛋白浓度为0.35 mg/ml。结论 建立了一种新的适于毕赤酵母表达的耐辐射奇球菌pprI基因,成功构建了分泌表达PprI蛋白质的重组毕赤酵母工程菌株,建立了高效表达目的蛋白的技术路线,并获得了高效表达和纯化的PprI蛋白。
- 任丽丽吴伟施怡岳凌杨占山
- 关键词：耐辐射奇球菌毕赤酵母纯化
- 耐辐射球菌pprI基因真核表达载体的构建及其抗辐射作用被引量：2
- 2014年
- 目的 研究耐辐射球菌pprI原核基因的真核表达载体的构建及其转染对离体真核细胞急性放射损伤的防护作用.方法 应用DNA重组技术构建pEGFP-c1-pprI质粒;采用脂质体转染技术分别将空载体质粒pEGFP-c1和重组质粒pEGFP-c1-pprI转入人肺上皮细胞系Beas-2B细胞,筛选稳定转染细胞系;应用集落形成实验检测受照转染细胞的生存能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;荧光显微镜观察受照细胞ROS荧光强度;免疫荧光实验观察受照细胞不同时间γ-H2AX焦点数目.结果 成功地构建了pprI原核基因的真核表达载体,并在Beas-2B细胞中表达了PprI融合蛋白,建立了稳定转染细胞系.与空白对照组和空载体组相比,细胞克隆生存曲线显示转染了pprI基因的Beas-2B细胞经不同剂量辐射,其存活分数SF增加,该曲线参数D0、Dq、N增高;转染了pprI基因的Beas-2B细胞受照后的ROS的荧光强度和不同时间（1、2、4 h） γ-H2AX的焦点数均显著减低（F=16.73、19.47、6.94,P＜0.05）;此外,该细胞G2期阻滞（F=139.73、237.92,P＜0.05）和凋亡率显著减低（F=626.02、2 052,P＜0.05）.结论 耐辐射球菌pprI原核基因可在离体真核细胞中稳定表达,并且显著提高受照真核细胞的辐射抗性.
- 文玲施怡任丽丽丛瑛杨占山
- 关键词：耐辐射球菌急性放射损伤辐射抗性
- 耐辐射球菌PprI蛋白质对人脐静脉血管内皮细胞的毒性及辐射细胞增殖作用
- 2014年
- 耐辐射球菌（Deinococcus radiodurans）是迄今为止地球上发现抗辐射能力最强的生物之一[1-2].这种超强抗辐射能力主要被归结为3个方面的机制：保护、耐受和修复[3].而耐辐射球菌中的PprI蛋白在抗辐射损伤中起着十分重要的作用.研究表明,PprI蛋白具有抗辐射损伤药物开发的潜在应用价值.但目前对于PprI原核蛋白的毒性少见报道.本研究探讨了PprI蛋白对体外细胞增殖和毒性的影响,旨在为该蛋白进一步用于临床提供细胞学研究资料.
- 吴伟陈洁毕洁静施怡文玲杨占山
- 关键词：蛋白质细胞增殖作用毒性抗辐射损伤
- 壳聚糖温敏性水凝胶蛋白载体的制备及其性能研究被引量：3
- 2015年
- 为了增强蛋白类药物的活性和寿命,应用物理交联技术制备了壳聚糖（CS）/京尼平（GP）/明胶（G）/β-甘油磷酸钠（β-GP）共混的温敏性水凝胶,采用红外光谱（FT-IR）、透射电镜（SEM）及降解实验对壳聚糖水凝胶的理化性能进行了表征;并研究了其对牛血清蛋白（BSA）的释放规律.结果显示：壳聚糖温敏性水凝胶的凝胶时间较短,约为50-126s;透射电镜显示4种物质相互交联为互通的多孔网络,结构致密均一;壳聚糖水凝胶具有一定的降解能力;BSA释放时间长达170h,最终释放率为76%-88%,蛋白释放曲线符合药物释放模型.
- 楚立凯岳凌杨占山
- 关键词：温敏性水凝胶壳聚糖京尼平药物缓释牛血清蛋白
- 造血干细胞移植辐射预处理生物标志物的实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的研究小鼠受^60C0γ射线照射后血液和免疫系统的早期生物参数变化，为造血干细胞移植（HSCT）受者放疗预处理寻找灵敏可靠的生物剂量标志物。方法采用纯品系BALB／c雄性小鼠，随机分为1个对照组和3个照射组。应用^60C0γ射线全身照射，吸收剂量分别为0、2、4和6Gy。照射后24h，外周血白细胞计数及淋巴细胞百分率应用血常规计数测定；外周血和骨髓嗜多染红细胞微核（inn—PCE）应用Giemsa染色镜下计数观察；骨髓细胞、脾脏和胸腺早期凋亡率应用Annexin V／PI双染法流式细胞仪检测。结果与对照组比较，各照射组小鼠外周血白细胞计数及淋巴细胞百分率随辐射剂量增加而显著降低（P〈0．01），其回归方程分别为E=0．1750D^2-1．7440D＋5．2020和E=84．9390-3．4255D；外周血和骨髓mn．PCE随辐射剂量增加而显著增加（P〈0．01），骨髓mn—PCE与辐射剂量呈正相关，其回归方程为E=3．9725D＋2．9700；骨髓细胞、脾脏和胸腺早期凋亡率随辐射剂量增加而显著增高（P〈0．01），呈线性正相关，回归方程分别为E=3．42D＋8．36，E=3．0645D＋3．1840和E=2．5620D＋2．5090。结论外周血淋巴细胞计数和骨髓嗜多染红细胞微核率与辐射剂量呈线性相关，其回归方程可作为放射预处理剂量评估灵敏可靠的早期生物剂量标志物；骨髓细胞、脾脏和胸腺淋巴细胞早期凋亡率与辐射剂量呈线性正相关，其回归方程可用于HCST受者放射预处理免疫系统抑制程度的判定指标。
- 杨晶胡莉钧徐军杨淑琴
- 关键词：造血干细胞移植细胞凋亡微核
- 有机结合氚内污染对输血质量与健康影响的剂量研究
- 2015年
- 目的探讨有机结合氚内污染在生物体内的分布规律及其吸收剂量，为评价密切接触氚的献血者的血液质量和健康提供基础资料。方法氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）经动物尾静脉注入，应用均相液体闪烁示踪技术，测量不同时间各组织器官的放射性活度，估算其吸收剂量，并导出各器官吸收剂量转换因子。结果进入血液的3H-TdR可迅速分布于各组织器官，注后0．5～1d内器官吸收达高峰，然后迅速排除，各组织器官3H-TdR滞留曲线的回归方程为指数函数方程。注后1d，按单位组织器官质量的放射性活度（MBq／g）计，3H-TdR主要分布于脾脏、胸腺、股骨、肝脏和小肠；吸收剂量较大的组织器官为外周血、肾脏、肝脏、肺、睾丸、脑和心脏。注后16d，3H-TdR在各组织器官的滞留量均较低，而累积吸收剂量则增高，脾脏和胸腺的累积吸收剂量远大于其它组织器官，分别为9．9和813mGy。吸收剂量转换因子（Gy·Bq^-1·g）随时间延长不断增大。结论3H—TdR内污染早期外周血放射性活度和吸收剂量最大，随时间的延长脾脏和胸腺的吸收剂量达高峰，表明外周血和免疫器官是3H-TdR内污染作用的主要组织器官，为进一步研究其对献血者血液质量和健康的影响奠定了基础。
- 杨晶郭丽徐军杨淑琴
- 关键词：3H-TDR内污染
