高等学校科技创新工程重大项目(70S018)
- 作品数：23 被引量：54H指数：5
- 相关作者：李校堃李海燕刘秀明李洪志李营更多>>
- 相关机构：吉林农业大学温州医学院牡丹江医学院更多>>
- 发文基金：高等学校科技创新工程重大项目国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 叶绿体表达系统的研究进展被引量：1
- 2011年
- 综述了叶绿体表达系统的特点及其转化方法,重点阐述了其研究现状及应用。针对本实验室的研究情况对其存在的问题进行了分析,并提出展望。
- 杜美丽刘秀明江莺李巍朱海林李海燕李校堃
- 关键词：重组蛋白
- 油料种子在脂解途径中相关信号分子的研究进展
- 2010年
- 本文介绍了油体脂解途径中相关信号分子的研究进展。通过对信号分子进行荧光探针标记,利用荧光显微镜技术和共聚焦显微镜成像分析可以准确、迅速地对相关信号分子的定位和表达进行跟踪研究,从而揭示油体的生物学发生和分解机制。
- 柳月英薛萍杨晶刘秀明李营李海燕李校堃
- 关键词：种子萌发
- 农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究被引量：7
- 2009年
- [目的]利用植物转基因技术,生产药用蛋白。[方法]以带柄子叶作为转化受体,利用根癌农杆菌介导法将油菜油体基因与bFGF的融合基因转入油菜中,在获得潮霉素(Hyg)抗性植株的同时,对油菜的再生条件进行优化,并对获得的抗性苗进行PCR和Southern检测。[结果]油菜最佳转化再生条件为外植体预培养2 d,共培养3 d,菌液浓度OD值为0.3,侵染时间5 min。[结论]该研究中,融合基因已成功整合到油菜基因组中,为以后转基因植物种子的蛋白提取、分离和纯化奠定了基础。
- 徐岩肖艳双杜金霞汪洪郑伟李营庞实锋
- 关键词：植物生物反应器根癌农杆菌油菜
- 酸性成纤维细胞生长因子植物表达载体的构建及转化烟草的初步研究被引量：2
- 2010年
- 为了降低aFGF的生产成本,结合植物生物反应器的优点,就aFGF在转基因烟草中的表达进行了探索。将aFGF基因插入植物表达载体pBI121中,获得了含有aFGF基因的植物表达载体pBI121-TΩAB-aF,利用农杆菌介导法将基因转化烟草,转基因烟草在含有卡那霉素和头孢霉素的培养基培养,获得具有卡那抗性的转基因烟草植株,通过PCR检测、RT-PCR检测及Western blot检测证实外源基因已经在烟草中成功表达。为植物生物反应器生产aFGF提供了理论基础。
- 蒋世翠王义李校堃韩秀文张美萍
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子烟草植物生物反应器
- 利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)被引量：5
- 2011年
- 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。
- 付宏岐李海燕庞实锋杨晶李洪志薛萍刘秀明李营王艳芳李校堃
- 关键词：农杆菌生物反应器番茄
- 大豆24 kDa油体蛋白基因与aFGF融合转化红花的研究被引量：6
- 2013年
- 目的:利用红花表达酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF),为利用植物生物反应器规模化生产aFGF奠定基础。方法:将人源aFGF基因改造为植物偏好性的aFGF基因序列,通过PCR搭桥技术克隆植物偏好的aFGF基因,利用酶切连接方法构建植物油体表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌EHA105,利用农杆菌介导的方法转化到塔城红花中,对转化红花进行PCR,Southern杂交,RT-PCR分子检测。结果:扩增出植物偏好的aFGF基因的全长序列,并与大豆油体蛋白基因Doil基因融合,成功地插入到改造好的含有大豆油体蛋白启动子表达载体中,探索了进行红花遗传转化的最佳条件,成功获得单位点插入的3个独立转化红花植株,在转录水平都有大小一致的aFGF的表达。结论:该实验成功构建了含aFGF植物油体表达载体,并筛选出最佳的遗传转化条件,A为0.6,侵染时间为10 min,共培养3 d,获得了aFGF转录水平表达的转基因红花植株,这将红花油体蛋白本身的皮肤保护作用,与FGFs的创伤修复作用累加,快速开发出外用创伤药物奠定基础。
- 盖玉红王旺金潇王嘉琪李宏博王刚杨晶魏健
- 关键词：AFGF红花
- VEGF基因油体表达系统构建及对拟南芥的遗传转化
- 2010年
- 为研究油体系统在植物中表达外源蛋白的优势,以油菜总DNA为模板,通过PCR得到油菜油体(Ycoil)及启动子序列(Ycprm)。同时,将多对合成的寡核苷酸链,通过PCR方法拼接得到血管内皮生长因子全长基因(VEGF)。以此为基础,构建Ycoil、Ycprm、VEGF融合表达载体p1390Ycprm-Ycoil-VEGF。将重组质粒转入农杆菌GV3101,并用花浸染法对拟南芥进行浸染。在含潮霉素(20mg/L)的1/2MS培养基上筛选转基因拟南芥种子(T0),获得了T1代抗性植株,通过PCR检测、SDS-PAGE检测和Western blotting检测,结果表明油菜油体及血管内皮生长因子的融合基因已经转入拟南芥中,并成功得到表达,转化率约为0.1%。
- 李洪志庞实锋李海燕薛萍刘秀明李营李巍肖艳双李校堃
- 关键词：油体拟南芥植物生物反应器
- 角质细胞生长因子2基因(KGF2)的克隆及其对油菜的遗传转化
- 2010年
- 近年来,植物表达人源蛋白的研究逐渐增多。本研究以人角质细胞生长因子(KGF2)基因cDNA为基础,根据植物偏好密码子进行改造,并利用PCR方法合成KGF2基因全长cDNA。在此基础上构建了KGF2的植物油体系统表达载体p1390-YO-KGF2,并采用农杆菌介导法对甘蓝型油菜无菌苗的子叶进行转化。通过PCR、Southern杂交和Western blotting检测,证明外源基因KGF2已经转入油菜中并得到成功表达。
- 潘国庆张爽刘秀明李营张耀方李洪志李海燕李校堃
- 关键词：油菜转基因植株植物生物反应器角质细胞生长因子
- RNA干扰在疾病治疗上的应用被引量：1
- 2011年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种双链RNA分子在mRNA水平上引发的特异性基因沉默现象。RNAi在基因治疗方面表现出了光明的前景,已成功地应用于多种疾病的临床治疗。本文主要介绍了RNAi在疾病治疗上的应用及研究进展。
- 朱海林刘秀明李巍杜美丽江莺李海燕李校堃
- 关键词：RNA干扰
- aFGF植物表达载体构建及转化紫花苜蓿的初步研究被引量：4
- 2011年
- 主要将aFGF基因按照植物偏爱的密码子进行基因优化,同时加上信号肽、6-组氨酸标签及凝血酶切割因子,合成全基因,再将基因插入到改造的TΩ4AB质粒中,将aFGF基因和质粒上的增强子、启动子、Ω序列及ployA加尾序列双酶切,命名为TΩ4AB-aF,将TΩ4AB-aF插入到pBI121载体中命名为pBI121-TΩ4AB-aF。利用三亲融合法将pBI121-TΩ4AB-aF转入到农杆菌菌株LBA4404中,转化苜蓿。转基因苗用卡那霉素进行筛选;并对抗性苗进行PCR、RT-PCR、Western Blot检测。结果表明,aFGF在苜蓿中得到表达。为苜蓿作为植物生物反应器奠定理论基础。
- 蒋世翠王义孙春玉王艳芳李校堃张美萍
- 关键词：AFGF植物生物反应器紫花苜蓿
