国家自然科学基金(31171606)
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 相关作者：陈鹏吕宁李学俊王磊李蒙更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苦荞蔗糖合酶基因克隆及序列分析被引量：3
- 2015年
- 以苦荞基因组DNA为模板，根据已构建的苦荞eDNA文库中蔗糖合酶（Sucrose synthase，SuSy）的部分eDNA序列设计引物，PCR扩增SuSy基因的核心片段，结合Genomic walking技术获得SuSy基因的完整序列。生物信息学分析表明，该基因序列全长4428bp，含有12个外显子和11个内含子，剪接位点均符合经典GU—AG法则，ORF长度为2412bp，共编码803个氨基酸。其氨基酸序列与籽粒苋（Amaranthus hypo—chondriacus）、甜菜（Beta vulgaris）、红叶藜（Chenopodium rubrumL）和大豆（Glycine max）的相似性分别为86％、86％、85％和83％。保守结构域分析表明，SuSy含有1个GT1糖基化酶功能结构域（275～760）和4个ADP结合位点，能够催化果糖-6-磷酸和尿苷5L二磷酸葡萄糖形成蔗糖-6-磷酸。
- 燕雪芬李玉萍张海纳陈鹏
- 关键词：苦荞蔗糖合酶基因克隆生物信息学分析
- 苦荞类黄酮糖基转移酶的重组表达与酶学性质研究
- 黄酮类化合物是具有2-苯基色原酮结构的一类植物次生代谢物，它常以糖苷的形式存在于植物体内，参与着诸多生命活动。尿苷二磷酸依赖性糖基转移酶（UDP-glycosyltransferase，UGT）介导着黄酮类化合物的糖基化...
- 韩小韦
- 关键词：苦荞基因表达酶学性质
- 苦荞耐受和累积铅的分子机制
- 铅(Pb)是最具毒性的重金属持久性污染物之一。铅污染已成为世界范围内广泛关注的环境问题。土壤铅污染会严重影响植物(作物)种子的萌发、生长发育及结实等过程，进入食物链会严重损伤人的神经、免疫及生殖系统，且具有累积性。土壤重...
- 王磊
- 关键词：苦荞铅胁迫转录组
- 苦荞类黄酮糖基转移酶FtUFGT1的重组表达与酶学性质分析被引量：1
- 2021年
- 黄酮类化合物是苦荞重要的功能性成分,其糖基化修饰可改变生物体内黄酮类化合物的稳定性、可溶性及生物活性。该研究基于苦荞转录组数据并以苦荞叶片中提取的总RNA为材料,利用RT-PCR克隆了苦荞类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoidglycosyltransferase,UFGT)基因FtUFGT1,采用无缝克隆方式构建其重组表达载体并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态,采用GST-resin纯化重组表达的蛋白,采用高效液相色谱(HPLC)技术检测分析纯化后FtUFGT1的酶学性质。结果表明:(1)成功克隆的FtUFGT1编码区为1413 bp,其编码470个氨基酸,并成功构建了FtUFGT1的重组表达载体pGEX-6p-1-FtUFGT1。(2)经转化苦荞FtUFGT1基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到可溶性的表达,并通过GST亲和层析纯化得到高纯度的苦荞FtUFGT1蛋白。(3)HPLC分析显示,以槲皮素为底物,苦荞FtUFGT1可催化异槲皮素的合成,比活力为9.174 U/mg;重组FtUFGT1的最适温度为30℃,最适pH为7.0,5%(V/V)的甲醇和0.5%(V/V)的Triton X-100可以显著抑制其活性。研究结果为深入揭示FtUFGT1的生物学功能及体外催化黄酮类衍生物的合成奠定了基础。
- 李睿林韩小韦陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达酶学性质分析
- 苦荞FtPCS基因克隆、表达及酶活性初步分析
- 2017年
- 该研究以Pb^(2+)诱导的苦荞(Fagopyrum tataricum)叶片转录组数据为基础,通过RT-PCR克隆,获得苦荞植物络合素合酶(Phytochelatins,PCs)基因(FtPCS);采用无缝克隆构建原核表达载体pET28a-PCS,并通过反向-HPLC结合DTNB[5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)]柱后衍生的方法,对纯化的FtPCS重组蛋白在Pb^(2+)存在条件下的催化活性进行初步分析,为进一步揭示FtPCS基因在苦荞重金属富集和解毒过程中的机制奠定基础。结果表明:苦荞FtPCS基因组序列全长5 456bp,包括8个外显子和7个内含子;FtPCS基因ORF序列全长1 485bp,编码494个氨基酸,预测分子量为55.10kDa。可溶性分析表明,苦荞FtPCS基因在E.coli BL21Star(DE3)中以包涵体的形式表达,采用梯度透析复性并结合钴离子螯合层析的方法获得纯化的FtPCS重组蛋白,复性的FtPCS蛋白具有催化GSH生成PC化合物的活性,而且低浓度的Pb^(2+)对其催化活性具有激活作用。
- 袁勇陈鹏
- 关键词：苦荞催化活性
- 苦荞(Fagopyrum tartarirum)苯丙氨酸解氨酶(FtPAL)活性调控机制研究
- 苦荞苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine mmonia lyase，PAL，EC4.3.1.5），催化L-苯丙氨酸（L-Phe）上氨基的裂解从而反应生成反式肉桂酸（t-CA），是植物体内连接初级代谢和苯丙烷类物质次...
- 吴今人
- 关键词：苦荞苯丙氨酸解氨酶次生代谢物泛素化修饰
- 文献传递
- 抗自溶烟草蚀纹病毒蛋白酶的原核表达和纯化及活性分析
- 2011年
- 利用QuikChangeSite-Directed Mutagenesis Kit将自溶性烟草蚀纹病毒蛋白酶(tobacco etch virus Protease,TEVP)219位的Ser(S)突变为Val(V),经测序验证的S219V突变质粒pMAL-TEVPS219V电转化大肠杆菌BL21Star(DE3),并优化异丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、温度、时间对TEVP表达的影响。结果表明,突变的TEVP表达最适条件为24℃,0.75mmol/L IPTG诱导11h。经金属离子螯合层析纯化得到高纯度,高活性的突变TEVP蛋白酶,比活力为1 048U/mg。每升菌液可纯化17.2mg目标蛋白。
- 陈鹏石小青
- 关键词：原核表达定点突变
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花青素合成途径的关键酶。该研究以苦荞种子灌浆期cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆苦荞DFR编码基因,并将其连接到表达载体pET47b上,转化获得苦荞DFR编码基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物,用亲和层析方法纯化蛋白,制备苦荞DFR多克隆抗体。RT-PCR技术获得了苦荞DFR编码基因的开放阅读框,重组表达载体经PCR和测序鉴定,表明表达载体构建成功,SDS-PAGE分析表达产物分别以可溶和不可溶的形式高效表达,亲和层析纯化得到融合蛋白,Western blotting显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的苦荞DFR蛋白在苦荞种子灌浆期中大量表达。苦荞DFR编码基因的原核表达与多克隆抗体的制备,为进一步开展DFR编码基因功能的研究奠定了基础。
- 李蒙陈芳霞吕宁陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达多克隆抗体
- 苦荞TBW16重组表达及靶向结合蛋白的初步分析被引量：3
- 2014年
- 苦荞16kD过敏蛋白(Tartary buckwheat 16kD allergen,TBW16)是定位于种子胚中的过敏蛋白,其生物学功能未知。该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得苦荞过敏原TBW16基因的序列为基础,构建TBW16成熟蛋白的原核表达载体pET47b-TBW16,实现了其在大肠杆菌BL21Star(DE3)中的高效表达。结果表明:该过敏原以包涵体的形式表达,经包涵体复性及金属离子螯合层析纯化了目标蛋白;以1,4丁二醇二缩水甘油醚环氧基介导的蛋白偶联技术固定化TBW16于Sepharose CL 6B上,采用亲和层析分离与TBW16靶向结合的蛋白,MALDI-TOF质谱鉴定显示,苦荞TBW16过敏原靶向结合蛋白与细菌膜孔蛋白高度同源,该研究结果为分析苦荞TBW16生物学功能奠定了基础。
- 陈姣张学宾王磊陈鹏
- 关键词：苦荞
- 苦荞具Kelch基序的F-box蛋白在次生代谢调控中的功能探究
- 苦荞具Kelch基序的F-box（KFB）蛋白是E3泛素连接酶家族成员SCF（Skp1-Cullin-F-box）复合物的组分之一，其通过特异性识别靶蛋白使其泛素化降解，从而调节细胞活动。研究报道KFB蛋白通过控制次生代...
- 朱燕
- 关键词：苦荞次生代谢
- 文献传递
