国家杰出青年科学基金(39825111)
- 作品数：31 被引量：104H指数：5
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- 相关机构：军事医学科学院重庆医科大学第三军医大学更多>>
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- 造血因子基因修饰的基质细胞诱导造血细胞向巨核系细胞定向扩增的研究
- 2000年
- 目的 为诱导造血细胞在体外向巨核系细胞定向扩增 ,观察了促血小板生成素 (TPO)、白细胞介素 11(IL 11)基因修饰的成纤维样基质细胞 (HFCL)对纯化的脐血CD+34 造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响。方法 以未经造血因子修饰的HFCL支持的造血细胞体外扩增作为对照 ,采用流式细胞仪检测脐血CD+34 造血细胞在TPO基因修饰的HFCL(TPO/HFCL)、IL 11基因修饰的HFCL(IL 11/HFCL)以及TPO和IL 11基因共修饰的HFCL(TPO +IL 11/HFCL)的支持下 ,经过 7d的体外扩增后 ,扩增细胞中的CD+34 CD+4 1巨核系祖细胞和表型为CD+4 1CD+61较成熟的巨核系细胞的比例。结果 脐血CD+34 造血细胞经过 7d体外扩增后 ,CD+34 CD+4 1巨核系祖细胞在TPO/HFCL、IL 11/HFCL和TPO +IL11/HFCL支持的扩增细胞中的比例分别为 (13.7± 2 .0 ) %、(9.9± 1.1) %、(14.5± 2 .0 ) % ,高于HFCL的 (6 .5± 1.8) % (P <0 .0 1) ;并表现为TPO/HFCL支持的扩增细胞中巨核系祖细胞的比例高于IL 11/HFCL(P <0 .0 5 )。而表型为CD+4 1CD+61的巨核系细胞在扩增细胞中的比例分别为 (11.9±0 .7) %、(2 4.1± 3 .1) %、(17.6± 1.9) % ,其中IL 11/HFCL和TPO +IL 11/HFCL支持的扩增体系高于HFCL的 (10 .6± 1.5 ) % (P <0 .0 1) ;且IL 11/HFCL对CD+4
- 杨光周雅德裴雪涛李梁
- 关键词：造血细胞IL-11基因修饰
- 树突状细胞体外定向诱导扩增及其分离纯化被引量：10
- 2000年
- 目的 :探讨定向诱导及纯化树突状细胞 (DC)的方法 ,为进一步研究树突状细胞的功能、特性及临床应用提供技术方法。方法 :利用免疫磁珠法 (MACS)分离纯化脐血CD34 + 细胞 ,在液体培养体系中加入FL、GM CSF、TNF α、IL 4及SCF ,培养 12d后光镜检测细胞形态及流式细胞仪分析表面标志 (CDla、HLA DR及CD80 ) ;利用抗树突状细胞单克隆抗体 (X 11)及免疫磁珠分离纯化树突状细胞 ,流式细胞仪检测纯化后DC的纯度。结果 :经体外定向诱导扩增 ,可成功地将CD34 + 细胞定向诱导为树突状细胞 ,CDla+ 细胞的比例可升至 (2 7.18± 1.5 6 ) %〔对照为 (0 .6 5± 0 .38) % )〕 ,诱导出的DC具有典型的树枝状突起 ,有较高的CDla、HLA DR及CD80表达 ,经免疫磁珠分选 ,树突状细胞 (CDla+ )的纯度可达 (94.6 1± 2 .2 4) %以上。结论 :经特定细胞因子的组合 ,可将CD34 + 细胞定向诱导成DC ,并可通过免疫磁珠法分选出纯度达 90 %以上的DC。
- 白慈贤冯凯李梁裴雪涛
- 关键词：树突状细胞纯化体外定向诱导
- IL-11基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响被引量：9
- 2001年
- 目的 研究造血因子白介素 11(IL 11)基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响。方法 采用逆转录病毒载体将IL 11基因转入基质细胞HFCL ,用Northernblot检测基质细胞HFCLIL 11基因的表达 ,用流式细胞仪检测IL 11基因修饰的HFCL支持的脐血CD3 4 + 造血细胞体外扩增中表型为CD3 4 + CD3 8- 早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系定向祖细胞的比例。结果 基质细胞HFCL能够表达逆转录病毒介导的IL 11基因 ,并且在这种IL 11基因修饰的基质细胞支持下 ,脐血CD3 4 + 造血细胞经过7d扩增 ,扩增细胞中表型为CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞的比例分别为 (1.62± 0 .2 3 ) %、(9.9±1.1) % ,高于未转基因HFCL的 (0 .8± 0 .2 3 ) %、(6.5± 1.8) % ,而在相同条件下细胞因子支持的扩增细胞中则分别为 (0 .19±0 .14 ) %、(6.0± 1.1) %。结论 基质细胞能够表达经逆转录病毒载体介导的IL 11基因 ,而且经IL 11基因修饰的基质细胞能显著促进CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞扩增。
- 杨光周雅德裴雪涛李梁冯凯时维绢
- 关键词：造血细胞体外扩增基质细胞基因修饰
- Lin^-CD_(34)^-与Lin^-CD_(34)^+细胞差异表达基因的鉴定
- 2003年
- 目的 克隆并鉴定Lin-CD3 4-细胞区别于Lin-CD3 4+细胞的可能与其性状相关的基因。方法 以Lin-CD3 4-细胞作为检测对象 ,Lin-CD3 4+细胞作为驱动细胞 ,应用抑制消减杂交技术构建Lin-CD3 4-细胞的cDNA消减文库。选取部分克隆测序 ,测序结果与GenBank进行同源性比较和功能分析。结果 共获得 593个含有插入片段的克隆 ,片段的长度为 30 0～ 50 0bp。随机选取 53条EST进行测序 ,其中 37条EST代表了 1 0个已知基因 ,其余 1 6条EST代表了 4个未知序列。结论 利用抑制消减杂交技术鉴定出部分Lin-CD3 4-细胞特异表达的基因 ,可能与Lin-CD3
- 王冬梅杨莉李梁冯凯白慈贤陈琳裴雪涛
- 关键词：造血干细胞抑制消减杂交技术差异表达基因
- Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法对SCID小鼠辐射防护的初步探讨
- 2002年
- 目的 探讨辐射诱导启动子调控的造血因子基因表达对照射后造血保护的作用。方法 将构建的携带有Egr 1启动子的Flt3配基 (FL)cDNA和增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)cDNA双顺反子表达载体导入基质细胞后 ,联合人CD34 +细胞输入经亚致死剂量照射的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内 ,观察外周血象动态改变和人造血细胞及其基质细胞植入的变化。结果 实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻 ,恢复加快 ,骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞 ,而各组间骨髓中CD45 +细胞、CD34 +细胞、CFU GM及骨髓有核细胞计数差异无显著性。结论 Egr
- 杜楠裴雪涛罗成基粟永萍程天民
- 关键词：EGR-1启动子造血因子基因疗法辐射防护
- γ射线诱导癌细胞凋亡致敏树突状细胞后的免疫应答被引量：2
- 2002年
- 目的 观察树突状细胞 (DCs)从γ射线诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后 ,抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法 用粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)加白介素 4 (IL 4 )从人外周血分化、诱导DCs ,γ射线在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡 ,将DCs、T淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞共培养 ,同时设计不同类型肿瘤细胞 (坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞 )作对照 ,7d后 ,分离、富集DCs、T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果 与凋亡胆管癌细胞共培养之DCs可以有效提呈胆管癌细胞抗原 ,有强烈的免疫应答 ,刺激的细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)特异性地杀伤胆管癌细胞。结论 γ射线诱导癌细胞凋亡可以致敏rhGM CSF加rhIL 4从人外周血单核细胞诱导、扩增出的DCs并产生显著的杀伤胆管癌细胞的免疫反应 ,可望成为特异性免疫治疗肿瘤的一条新途径。
- 吴刚顾红光韩本立裴雪涛
- 关键词：Γ射线树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素4癌细胞凋亡细胞毒T淋巴细胞
- Egr-1启动子序列调控造血生长因子表达的实验研究被引量：4
- 2000年
- 目的探索辐射诱导基因调控元件启动的造血生长因子表达及其对造血恢复的作用。方法该实验将携带Egr 1调控序列启动的FLT3配基(FL)和GM CSF双顺反子表达载体(Egr FG)导入骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EFG)。采用RT PCR、ELISA及细胞增殖法观察FL和GM CSFcDNA在转染细胞中的表达及保护造血作用。结果构建了Egr 1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(Egr FG) ;在HFCL/E FG细胞中证实有外源性FL和GM CSF基因的整合和表达 ,在辐照后16h的HFCL/EFG细胞培养上清液中 ,FL和GM CSF含量较照射前明显增高(P<0.01) ;同时证实辐射后HFCL/EFG培养上清液对造血祖细胞有明显扩增作用 ;共培养的骨髓有核细胞和HFCL/EFG经照射后7d计数非粘附细胞 ,HFCL/EFG组较对照组明显增加(P<0.05)。结论辐射诱导基因Egr 1调控序列启动的造血生长因子基因表达载体在辐射后表达明显增高 ,在体外对辐射后的造血细胞具有保护作用。
- 杜楠裴雪涛罗成基李梁邹仲敏冯凯白慈贤孙兵
- 关键词：造血生长因子EGR-1启动子
- 丝裂霉素诱导的肝癌细胞凋亡致敏树突状细胞(英文)被引量：2
- 2006年
- 目的:建立丝裂霉素诱导癌细胞凋亡致敏从人外周血诱导扩增的树突状细胞的方法。设计:以癌细胞凋亡致敏树突状细胞为观察对象的随机对照实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所,解放军军事医学科学院放射医学研究所。材料:实验于1998-04/1999-05在解放军军事医学科学院放射医学研究所完成。细胞株为QBC939胆管癌细胞株,药物为抗肿瘤药物丝裂霉素。方法:从正常人外周血分离获得单核细胞,加入50μg/L重组人粒细胞集落刺激因子,1000U/mL白细胞介素4,隔天一次,共4次,培养第3天,加入丝裂霉素诱导凋亡的胆管癌细胞,再继续体外培养4d后,用树突细胞富集柱收集树突状细胞。主要观察指标:①培养的树突状细胞的鉴定。②树突状细胞和坏死胆管癌细胞以及正常培养的胆管癌细胞共培养,观察其吞噬凋亡小体负载抗原。③检测不同密度的树突状细胞(1×103/孔,5×103/孔,1×104/孔)的免疫刺激活性及负载抗原后的免疫刺激活性,以单核细胞作对照组。结果:①培养、扩增得到的树突状细胞高表达共刺激分子B7和CDla,表面具有典型不规则突起。②丝裂霉素诱导癌细胞凋亡形成的凋亡小体被树突状细胞捕捉、吞噬。③负载抗原的树突状细胞其激发同种异体T淋巴细胞增殖的能力进一步增强。结论:丝裂霉素诱导癌细胞凋亡可以致敏重组人粒细胞集落刺激因子加重组人白细胞介素4从人外周血单核细胞诱导、扩增出的树突状细胞,树突状细胞可以有效提呈凋亡胆管癌细胞的抗原,可望成为有效的肿瘤抗原致敏树突状细胞的新途径。
- 吴刚韩本立裴雪涛
- 关键词：丝裂霉素树突细胞单核细胞粒细胞巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素4细胞凋亡
- 造血干/祖细胞体外定向诱导分化为粒细胞的研究被引量：1
- 2002年
- 为探讨利用人造血干 /祖细胞体外定向诱导分化的人粒细胞应用于临床大剂量放、化疗后预防感染的可行性 ,利用源自人胎盘脐带血的CD34+ 细胞及SCF ,IL 3 ,IL 6和G CSF的细胞因子组合的培养条件 ,体外进行向粒细胞的诱导分化。结果表明 ,在该体系条件下可诱导分化出约 1 0 0 0倍数量的细胞 ,流式细胞仪检测诱导效率可达 60 %以上 ,且诱导分化的细胞染色体未出现异常 ,裸鼠致瘤实验表明该细胞不具致瘤性 ,细胞体外生长 1 4 - 2 1天为高峰 ,33天后细胞不再增殖 ,且诱导分化出的细胞具有吞噬细菌的功能。结论 :利用细胞工程的方法体外“生产”出的粒细胞具有应用安全性 ,且具备生理状态下产生的此种细胞应具备的基本功能 。
- 冯凯初飞南雪袁红丰王冬梅张锐白慈贤陈琳裴雪涛
- 关键词：CD34^+细胞体外定向诱导分化粒细胞
- TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用被引量：1
- 2001年
- 目的 研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+ 造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响。方法 将TPOcDNA构建到pBabe pura中 ,通过“乒乓转染法”获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞 ;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL ,用Northernblot检测细胞中TPO基因的表达 ,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性 ;以未转基因的HFCL为对照 ,将CD34+ 造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增 ,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+ CD41+ 和表型为CD41+ CD6 1+ 细胞的比例。结果 基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因 ,在HFCL TPO培养上清中有 0 75ng ml水平的TPO活性 ;并且在HFCL TPO支持下 ,CD34+ 造血细胞经过 7d扩增后 ,CD34+ CD41+ 细胞的比例为 (13 7± 2 0 ) % ,HFCL为 (6 5± 1 8) % (P <0 0 1) ;CD41+ CD6 1+ 细胞的比例为 (11 9± 0 7) % ,略高于HFCL的 (10 6± 1 5 ) % (P >0 0 5 )。结论 基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白 ,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+ CD41+ 巨核祖细胞的扩增 ,但对较成熟的CD41+ CD6 1+
- 杨光裴雪涛李梁周雅德冯凯白慈贤
- 关键词：造血细胞巨核系细胞基质细胞血小板生成素造血干细胞移植
