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应用CRISPR/Cas9技术在杨树中高效敲除多个靶基因被引量：26: 2015年; CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术。本课题组在前期工作中利用该系统在毛白杨(Populus tomentosa Carr.)中率先实现了对内源基因—八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene dehydrogenase,PDS)基因的定点敲除。为研究靶点的设计和选择对该系统介导的杨树内源基因敲除效率的影响,本文分析了不同单向导RNA(Single-guide RNA,sg RNA)结合毛白杨PDS(Pt PDS)靶基因DNA序列后对突变效率的影响。结果发现sg RNA与靶基因间的碱基错配会导致突变的效率降低,甚至不能突变,其中3′端的碱基配对更为重要。进一步测序分析发现,该系统能同时敲除杨树基因组上两个同源的PDS编码基因(Pt PDS1和Pt PDS2),突变率分别达86.4%和50%。研究证明该系统可快速高效地敲除两个以上的内源基因,获得多重突变体杨树株系。利用该技术,本课题组已获得多个杨树转录因子及结构基因的敲除突变体株系,为将来开展基因功能研究和杨树遗传改良奠定了基础。; 刘婷婷范迪冉玲玉姜渊忠刘瑞罗克明; 关键词：杨树多基因八氢番茄红素脱氢酶

NAA和IBA处理对罗汉松插条生长及生理生化的影响被引量：8: 2017年; 以罗汉松扦插条为实验材料,研究了水培条件下,不同质量浓度的生长调节剂吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)处理对其株质量、株高、生根数等形态指标及多酚氧化酶(PPO)活性、过氧化物氧化酶(POD)活性、叶绿素质量分数、根系活力等生理指标的影响.结果表明:与对照相比,不同质量浓度的IBA和NAA处理均可促进罗汉松水培插条生长,其中质量浓度为60 mg/L IBA及100 mg/L NAA促进株质量、株高效果较好,60 mg/L IBA,60mg/L NAA处理促生根效果最佳;不同质量浓度的IBA,NAA处理中,60 mg/L IBA,100 mg/L NAA的PPO活性和60mg/L IBA,100mg/L NAA的POD活性最高;40mg/L IBA和40mg/L NAA处理组中叶绿素质量分数最高;根系活力与对照组相比差异无统计学意义.因此,不同质量浓度生长调节剂的处理能有效地促进罗汉松的生长并提高PPO,POD活性及叶绿素的质量分数.; 周启贵陈锡娟汤春雁樊春艳; 关键词：生长调节剂生理生化插条

毛白杨二氢黄酮醇合酶基因PtDFR1的克隆与功能验证: 2012年; 以RT-PCR的方法获得毛白杨(Populus tomentosa Carr.)二氢黄酮醇合酶基因(Dihydroflavonol 4-reductase)DFR,命名为PtDFR1,完整的ORF编码336个氨基酸,含有DFR蛋白特征性序列:NADP结合域和特异性底物识别域。序列比对发现,毛白杨PtDFR1蛋白与其他已知物种DFR有较高同源性,特别是与欧洲颤杨(Populus tremuloides)和葡萄(Vitis vinifera)以及苹果(Malus x domestica)氨基酸序列同源性最高,分别达到89.9%,86.4%和85.1%。荧光定量PCR检测基因组织特异性表达发现,该基因在根中表达量最高,其次为叶柄,而在叶片中表达丰度最低。根癌农杆菌介导PtDFR1在毛白杨中超量表达,检测转基因株系中花青素和缩合单宁的含量发现,与野生型相比,转基因植株中缩合单宁产量提高2～3倍,而花青素含量无显著变化,表明PtDFR1可能主要在缩合单宁合成途径中发挥作用。; 高江林黄艳贾之春罗克明; 关键词：毛白杨

金心吊兰在不同营养液中的生长效应被引量：4: 2013年; 以金心吊兰为材料,将生长状况大致相同的金心吊兰放在3种不同成分和不同浓度的营养液中进行比较实验,观测不同处理植株的叶片数、根长、根数、株高、茎粗及叶绿素含量、光合速率、蒸腾速率,筛选出最适合金心吊兰生长的溶液,结果表明:最适合吊兰生长的是B配方T1浓度的营养液.; 周启贵汤绍虎张晴霞; 关键词：营养液

Cre/Loxp系统在转基因拟南芥杂交后代中的删除效率分析被引量：2: 2015年; 在位点特异性重组酶系统Cre/Loxp中,重组酶Cre可以识别两个同向Loxp位点,并删除Loxp位点之间的所有外源基因,最终只留下一个识别位点.基于这一原理,以拟南芥为材料,构建带有同向Loxp位点的植物双元表达载体pCA-Loxp以及携带Cre基因的植物载体pCXSN-nlsCre,利用花序浸染法将二者分别转化野生型拟南芥.经逐步筛选得到各自的单拷贝纯合植株,分别以转基因纯合pCXSN-nlsCre和pCA-Loxp为父本或母本进行杂交,收集杂交后代种子.经萌发后对幼苗进行GUS组织化学染色、DNA检测以及测序分析等,最终证实该系统能成功删除拟南芥杂交子代中的外源基因,其基因删除效率高达82.2%.; 李嘉蕙葛佳汪丽君文梦玲陆万香罗克明; 关键词：转基因拟南芥人工杂交基因删除生物安全

IBA处理对春剑水培苗生根的影响被引量：6: 2014年; 以春剑为材料,用0~80mg/L不同体积质量分数的吲哚丁酸(IBA)处理进行水培春剑对比试验,研究不同处理对其株高、株质量、根数等形态指标及叶绿素质量分数与过氧化氢酶活性等生理指标的影响.结果表明:不同体积质量分数IBA处理可促进水培春剑苗根的生长,其中体积质量分数在10mg/L^40mg/L时促进效果最好.生长过程中以20mg/L IBA处理促进叶绿素的合成作用最显著,而10mg/L IBA处理春剑水培苗的过氧化物酶活性最高.; 周启贵虎文静; 关键词：春剑吲哚丁酸水培

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国家自然科学基金(31171620)