国家重点实验室开放基金(SKLVBF200909)
- 作品数：4 被引量：25H指数：2
- 相关作者：朱丽萍李雁冰颜世敢周百成张玉忠更多>>
- 相关机构：山东轻工业学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 别藻蓝蛋白标记抗鸡IgG荧光抗抗体的高效制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 将别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,APC)与抗鸡IgG抗体交联制备荧光抗抗体,用于鸡疫病的间接荧光检测。首先采用羟基磷灰石层析和阴离子交换层析法高效制备APC,然后利用蛋白质交联技术高效制备荧光抗抗体。分别用摩尔比50∶1、100∶1的交联剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)将APC、抗鸡IgG抗体衍生,衍生物以摩尔比1∶1液相交联,经高压液相色谱(HPLC)纯化制备出APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体,最后对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定。结果表明,APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体交联效率达95%以上,纯度达电泳纯,红色荧光明亮,抗体活性高,4℃保存90 d荧光亮度和抗体活性稳定。研制的APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体可作为通用荧光抗抗体用于鸡传染性疾病的间接免疫荧光检测。
- 朱丽萍颜世敢李雁冰张玉忠
- 关键词：别藻蓝蛋白
- R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用被引量：12
- 2009年
- 用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒。结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5mg.mL-1的H9亚型尿囊毒。R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。
- 颜世敢朱丽萍张玉忠周百成张秀美李雁冰
- 关键词：R-藻红蛋白荧光标记禽流感病毒
- 硫酸铵盐析条件对多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白得率和纯度的影响被引量：11
- 2010年
- 藻胆蛋白是一类用途广泛、市场前景广阔的天然色素蛋白,但分离纯化困难。粗提条件优化对最终获得的藻胆蛋白的得率和纯度影响较大。研究了硫酸铵饱和度、盐析次数、分级盐析对海洋红藻多管藻R-藻红蛋白(RPE)和R-藻蓝蛋白(RPC)提取得率和纯度的影响。结果表明,多管藻RPE和RPC的得率随硫酸铵饱和度的提高而增加,饱和度为60%时得率最高,分别为91.59%、97.98%。饱和度20%的硫酸铵仍能沉淀47.3%的RPE和24.8%的RPC。RPE的纯度随硫酸铵饱和度的提高而降低,但RPC纯度随硫酸铵饱和度的提高而增加,至饱和度为45%时纯度最高,之后随饱和度的提高而缓慢降低。饱和度<40%时,RPE/RPC得率比随硫酸铵饱和度提高而增加;饱和度>40%时,RPE/RPC得率比趋于稳定。硫酸铵盐析2次与盐析1次相比,RPE、RPC的得率降低,但纯度提高。二步法盐析比一步法盐析RPE、RPC的纯度分别提高122.42%、18.67%,但得率降低。因此硫酸铵盐析提取多管藻RPE、RPC时,以饱和度60%为宜,盐析2次,二步法盐析有利于藻胆蛋白纯度的提高,二步法盐析时初次使用的硫酸铵饱和度应<20%。藻胆蛋白盐析条件优化可为藻胆蛋白的进一步分离纯化奠定基础。
- 朱丽萍颜世敢李雁冰周百成
- 关键词：多管藻R-藻红蛋白R-藻蓝蛋白得率纯度硫酸铵沉淀
- R-phycoerythrin标记抗猪瘟病毒荧光抗体的制备及其与FITC标记荧光抗体检测的比较研究被引量：2
- 2011年
- 用摩尔比100∶1的化学交联剂SPDP分别将RPE、抗猪瘟病毒抗体衍生,两种衍生物再以摩尔比1∶1液相交联,HPLC纯化制备出RPE标记的抗猪瘟病毒荧光抗体。对制备的荧光抗体从荧光特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用固相免疫荧光检测法,以制备的RPE、FITC分别标记的荧光抗体检测猪瘟病毒细胞毒。结果表明,RPE标记的荧光抗体检测阳性微球在蓝绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无本底光干扰,检测灵敏度高达2.67×10-6mg.mL-1,是FITC标记的荧光抗体检测灵敏度的10倍。RPE可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。
- 赵守山颜世敢朱丽萍崔道实
- 关键词：R-藻红蛋白荧光标记猪瘟病毒
