江苏省研究生培养创新工程项目(ZY320506)
- 作品数：4 被引量：44H指数：4
- 相关作者：贡成良周文林曹广力薛仁宇沈卫德更多>>
- 相关机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省研究生培养创新工程项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析被引量：16
- 2007年
- 家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。
- 诸戌娴曹广力薛仁宇周文林刘炜彬贡成良
- 关键词：家蚕启动子克隆
- 家蚕丝蛋白Fhx/P25基因启动子区域的克隆及序列分析被引量：19
- 2007年
- 为研究家蚕Fhx/P25基因在时空上的调控机制,通过PCR扩增获得家蚕丝素蛋白Fhx/P25基因的启动子序列并进行克隆和序列分析。进一步构建了由Fhx/P25启动子驱动报告基因DsRed的表达载体pSK-P25-DsRed-PolyA,并通过家蚕BmN细胞进行瞬时表达。结果显示:Fhx/P25基因的启动子序列符合真核生物启动子特点,具有丝腺特异性表达启动子的特征,TATA框的保守序列为TATAA,位于-28—-32处,CAAT基序有3个,其中-110—-117和-90—-87处的2个CAAT基序可能具有活性;二级结构分析显示:Fhx/P25启动子区域具有复杂的茎环结构,这可能与蛋白表达的组织特异性、时间性以及活性有关。基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕BmN培养细胞中的瞬时表达。
- 刘炜彬贡成良薛仁宇周文林诸戌娴曹广力
- 关键词：家蚕启动子
- 家蚕丝素蛋白轻链基因(fib-L)启动子序列的克隆及其活性分析被引量：24
- 2007年
- 家蚕Bombyx mori丝素蛋白轻链(fibroin light-chain,fib-L)基因fib-L具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为了利用其启动子构建能够表达外源基因的丝腺生物工厂,本实验对fib-L启动子活性进行了研究。通过PCR法克隆了fib-L启动子元件,序列分析显示fib-L启动子由位于-33^-25处的TATA盒元件和位于-128^-121处的特征性序列GTCAATTT共同组成。用fib-L启动子控制报告基因DsRed进行家蚕BmN细胞和蚕体内的瞬时表达研究,结果表明fib-L启动子可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。
- 周文林曹广力薛仁宇虞晓华沈卫德贡成良
- 关键词：家蚕启动子DSRED
- piggyBac转座子介导的家蚕细胞转基因研究初探被引量：16
- 2007年
- 为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo。以该载体转染家蚕BmN细胞,用终浓度800μg/mL的遗传霉素(geneticin,G418)筛选3个月,获得了稳定转化的细胞,呈现绿色荧光的细胞数达80%以上。通过PCR鉴定证实了细胞基因组DNA中neor基因和gfp基因的存在。
- 周文林王崇龙刘波曹广力薛仁宇沈卫德贡成良
- 关键词：转基因家蚕PIGGYBAC转座子家蚕细胞
