国家教育部博士点基金(200806570003)
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 相关作者：陈祥许厚强骆衡李坤许庆贺更多>>
- 相关机构：贵州大学贵州山地农业病虫害重点实验室教育部更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制。方法运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响。结果苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DNA结合活性及ATPase活性均有弱抑制作用,对RecQ解旋酶活性抑制常数Ki为5×10-3 nmol.L-1,对dsDNA和ssDNA结合活性的Ki分别为5×10-2和0.5 nmol.L-1。结论在体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性具有弱抑制作用,二者至少有两个作用位点。
- 段丽霞许厚强陈祥骆衡
- 关键词：苯甲酸雌二醇DNA结合活性ATPASE活性
- 丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响被引量：7
- 2011年
- 目的研究体外丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响及二者的相互作用机制。方法分别运用荧光偏振技术、ATPase试剂盒和紫外吸收光谱技术分析丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶活性和DNA结合活性、AT-Pase活性和构象的影响。结果丙酸睾酮能够影响E.coliRecQ解旋酶的活性。低浓度促进解旋酶活性,高浓度抑制;抑制RecQ解旋酶与dsDNA的结合活性,其抑制常数Ki小于7×10-5 nmol.L-1;对与ssDNA结合活性的Ki为7×10-3 nmol.L-1;对ATPase活性抑制作用的时间相关性较弱;影响RecQ解旋酶的构象变化,但峰位无偏离。结论提示丙酸睾酮与RecQ解旋酶具有弱相互作用,二者具有两个结合位点。
- 段丽霞许厚强陈祥骆衡
- 关键词：丙酸睾酮大肠杆菌DNA结合活性ATPASE活性构象
- Mg^(2+)对Bloom综合症解旋酶与G4DNA结合的影响研究
- 2012年
- 利用荧光偏振技术检测了Mg2+对G4DNA、BLM-G4DNA复合物和BLM642-1290解旋酶与G4DNA结合的影响.结果表明,G4DNA荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而增加(P<0.01);BLM-G4DNA复合物的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加出现下降—升高—下降的变化趋势(P<0.01);G4DNA与BLM642-1290解旋酶结合的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而逐渐下降(P<0.01);分析不同Mg2+浓度下两种分子结合的Kd值,发现Mg2+浓度为3.0mmol/L时,BLM642-1290解旋酶与G4DNA最容易结合,表明适量Mg2+浓度会促进BLM642-1290与G4DNA的结合,但会引起两种分子结合的形状、流动性和电荷等性质的改变.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶对G4DNA的作用机理提供相关资料.
- 骆衡蔡明娟陈祥丁玫李坤许厚强
- 溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。
- 许庆贺许厚强骆衡陈祥张金彪李坤
- 关键词：溴化乙锭DNA结合活性ATPASE活性
- 荧光偏振技术研究Bloom解旋酶催化核心与双链DNA的相互作用被引量：2
- 2013年
- Bloom综合症(BLM)解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用.BLM解旋酶的突变可导致Bloom综合症,患者遗传不稳定易患多种类型癌症.本研究运用荧光偏振技术研究BLM解旋酶催化核心(BLM642～1290)与双链DNA(dsDNA)的相互作用,分析其相关特征参数,了解BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链特性.结果表明:BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链与dsDNA 3′端的单链DNA(ssDNA)长度有关;解旋酶优先结合于dsDNA底物的ssDNA末端,且每分子解旋酶可结合9.6 nt的ssDNA;dsDNA 3′端ssDNA的长度为9.6 nt时,解旋酶的解链效率达到最大且不再随其长度而变化.另外,BLM642～1290解旋酶也能够结合和解链钝末端dsDNA,但其结合亲和力和解链效率低于有3′端ssDNA的dsDNA.推测BLM642～1290解旋酶在与dsDNA底物结合和解链时是单体形式,可能以尺蠖的形式解开dsDNA.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶的功能特征提供理论基础.
- 骆衡许厚强陈祥刘朝前许庆贺李坤
- 关键词：DNA结合
- Bloom解旋酶突变体的克隆与表达
- 2013年
- blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。
- 张金彪许厚强骆衡许庆贺陈祥李坤
- 关键词：重组PCR基因克隆表达
- BLM(642-1290)重组解旋酶的优化表达被引量：1
- 2011年
- Bloom综合症(Bloom s syndrome)是人类一种少见的常染色体隐性遗传疾病,BLM基因突变导致这种疾病的发生,患者染色体极不稳定,是多种癌症的易患体,其致病机理不清楚.该研究在优化诱导表达温度、时间、IPTG质量浓度、pH值、培养基种类以及培养基成分的基础上,建立了BLM642-1290重组蛋白表达、分离和纯化方法.最优表达条件为IPTG0.45 mmol/L,诱导温度18℃,诱导表达时间20 h,pH值7.0.在LB培养基中添加终质量浓度为5 mmol/L的EDTA能够增加蛋白的表达量.该实验所建立的方法为进一步开展Bloom综合症的研究奠定了基础.
- 陈祥骆衡段丽霞张勇张勇
- 甲磺酸培氟沙星抑制大肠杆菌RecQ解旋酶的体外DNA结合、解链和ATPase活性被引量：2
- 2012年
- RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,参与DNA复制、修复、重组、转录及维持端粒稳定等细胞代谢过程,在维持染色体稳定性与完整性中起着重要作用.甲磺酸培氟沙星(pefloxacin mesylate,PFM)是一种新型氟喹诺酮类抗菌药物,对一些革兰氏阴性菌具有明显的杀菌效果,临床上已广泛使用.本研究利用荧光偏振、自由磷检测技术研究PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶的DNA结合活性、解链活性、ATPase活性的影响.结果表明,低浓度PFM可促进大肠杆菌RecQ解旋酶与ssDNA、dsDNA结合,达到一定量后PFM则抑制酶与DNA底物的结合,这种影响与DNA底物有关;PFM对RecQ解旋酶的DNA解链活性和ATP酶活性都具有抑制作用,但其抑制的效果有极显著差异(P<0.01):比较PFM对两种活性抑制的Ci值(对解链活性抑制的Ci值为(1.5±0.2)μmol/L,对ATP酶活性抑制的Ci值为(0.010±0.005)μmol/L)可知,PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶ATPase活性的抑制强于其解链活性.这些结果可为研究以DNA解旋酶为药物靶标的分子机理奠定相关理论基础.
- 李坤骆衡许厚强陈祥刘微孟惠惠
- 关键词：甲磺酸培氟沙星构象
- 大肠杆菌RecQ解旋酶的生物学活性分析被引量：6
- 2010年
- RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,在维持染色体的稳定性中起着重要的作用.人类RecQ家族解旋酶突变会导致几种与癌症有关的疾病.本研究旨在诱导大肠杆菌RecQ解旋酶体外表达,并应用生物化学和生物物理学技术研究大肠杆菌RecQ解旋酶的生物学活性.体外诱导表达获得纯度达90%以上并具有高活性的大肠杆菌重组RecQ解旋酶,其可溶性好;经生物学活性分析显示具有DNA结合活性、ATP依赖的DNA解链活性、DNA依赖的ATP酶活性.较之双链DNA(dsDNA),大肠杆菌RecQ解旋酶更容易与单链DNA(ssDNA)结合(P<0.01),但与长度不同的dsDNA的结合特性有差异(P<0.01)而与ssDNA没有差异(P>0.05);大肠杆菌RecQ解旋酶对3种dsDNA的解链速率不同(P<0.05);大肠杆菌RecQ解旋酶的ATP酶活性与辅助因子ssDNA长度也呈正相关(P<0.01).这些研究结果将有助于阐明大肠杆菌RecQ解旋酶的分子作用机制,并为研究RecQ解旋酶家族其它成员的结构与功能提供帮助。
- 骆衡陈祥段丽霞许庆贺许厚强
- 关键词：大肠杆菌纯化生物学活性
- 光谱法研究BLM解旋酶的稳定性
- 2011年
- BLM解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用,其突变会导致Bloom综合症。Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者易患各种类型癌症。本研究利用紫外吸收光谱法研究了pH、反应时间、NaCl浓度对BLM解旋酶的稳定性和ATP酶活性的影响。结果显示,pH会影响BLM解旋酶的构象和ATP酶活性,碱性环境对其构象和ATP酶活性影响比酸性环境大。酶在稀释的过程中对其构象和ATP酶活性有影响。NaCl浓度小于500mmol/L时,对酶构象和ATP酶活性影响不大;当NaCl浓度大于500mmol/L时,酶的构象和ATP酶活性均受到影响。这些研究结果将为开展小分子药物与BLM解旋酶的相互作用研究提供相关资料。
- 陈祥骆衡许厚强
- 关键词：紫外吸收光谱法稳定性
