潍坊市科技局资助课题(20121227)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 在SW480细胞中沉默survivin基因抑制细胞增殖及hTERT表达被引量：4
- 2013年
- 目的观察生存素(survivin)基因干扰对SW480细胞增殖的影响,探讨其干扰对hTERT基因表达的影响及机制。方法构建携带survivin小发夹干扰RNA的重组表达载体pGenesil-1.1-survivin,转染结肠癌SW480细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞增殖周期;荧光定量PCR和Western blot检测survivin、hTERT和Sp1的mRNA和蛋白表达,TRAP-ELISE法检测端粒酶活性。构建靶向Sp1基因的RNA干扰载体转染SW480细胞,检测hTERT基因mRNA和蛋白水平及端粒酶活性。结果 Survivin基因干扰后,SW480细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制率为34.44%(P<0.05),G0/G1期细胞增加,S期和G2/M期细胞减少(P<0.01)。hTERT和Sp1基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低,端粒酶活性降低(P<0.01)。Sp1基因干扰后,hTERT基因的mRNA和蛋白表达水平及端粒酶活性下降(P<0.01)。结论靶向沉默survivin基因对SW480细胞增殖有明显的抑制作用;同时下调hTERT基因表达,其机制可能与Sp1基因表达下调有关。
- 王平肖琳董俊红李桂枝赵春玲王守训
- 关键词：HTERTSP1
- hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 目的构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用。方法根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil-1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesil1.1-survivin-hTERT。将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响。结果构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P<0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础。
- 王平肖琳董俊红孙凤祥蒋吉英王守训
- 关键词：SURVIVINHTERT
