国家自然科学基金(30672273)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：范先群陆雯娟邵春益傅瑶李瑾更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
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- 以猪角膜脱细胞基质为载体培养猫骨髓内皮祖细胞构建角膜后板层的实验研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨以猪角膜脱细胞基质(cornea acellular matrix,CACM)为载体培养猫骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)体外构建角膜后板层的可行性。方法分离培养猫骨髓EPC,并用PKH26标记,观察标记效率。用10g.L-1Triton X-100脱细胞,联合逐步切薄角膜、超净台中自然晾干法制备角膜脱细胞基质,行HE染色,Hoechst染核,电镜观察猪CACM的胶原排列和细胞脱除情况。将标记的EPC接种到猪CACM上,观察细胞的生长情况。结果培养的猫骨髓EPC形态上呈多边形,几乎全部EPC可以标记上PKH26,细胞膜呈现红色荧光,至少可维持1个月。制备的猪CACM可保持整齐的胶原排列,细胞完全脱除。EPC在CACM上呈单层生长,贴附较好。构建的组织工程角膜后板层与正常角膜相似。结论以猪CACM为载体培养猫骨髓EPC可体外构建组织工程角膜后板层,为进一步体内移植打下基础。
- 邵春益傅瑶陆雯娟李瑾范先群
- 关键词：骨髓内皮祖细胞角膜脱细胞基质
- 人骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的探讨人骨髓内皮祖细胞的特性及其替代角膜内皮细胞成为种子细胞的可行性。设计实验研究。研究对象人骨髓内皮祖细胞。方法利用密度梯度离心法从人骨髓中分离出单核细胞,接种到纤维蛋白铺层和明胶铺层的培养皿中,EGM-2培养液培养,比较这两种不同铺层对细胞生长增殖的影响。检测人骨髓内皮祖细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素能力,免疫荧光检测CD133和CD34,RT-PCR检测Ⅷ型胶原表达情况。主要指标人骨髓内皮祖细胞形态特点,免疫荧光、RT-PCR结果。结果人骨髓内皮祖细胞呈短梭形或多边形,纤维蛋白铺层较合适。人骨髓内皮祖细胞能摄取AcLDL,结合UEA-1,表达CD133和CD34,表达角膜内皮细胞较特异的Ⅷ型胶原。结论人骨髓内皮祖细胞有望成为较理想的代替角膜内皮细胞的种子细胞。
- 邵春益傅瑶陆雯娟范先群
- 关键词：骨髓内皮祖细胞角膜内皮细胞
- 异种角膜脱细胞基质为供体进行角膜前板层移植的初步研究被引量：5
- 2009年
- 目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性。设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1%TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1/3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。
- 傅瑶陈苹陆雯娟邵春益李瑾范先群
- 关键词：板层移植生物相容性
- 猫骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定
- 2008年
- 目的探讨分离和培养猫骨髓内皮祖细胞(EPC)的方法,为研究干细胞治疗人角膜内皮失代偿提供理论依据。方法采用密度梯度离心法从猫骨髓中分离出单核细胞,接种到纤维蛋白(Fn)铺层的培养皿中。检测不同质量浓度的Fn铺层及不同培养液DMEM和EGM-2对细胞生长的影响。EPC与乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)和荆豆凝集素(UEA-1)孵育,免疫荧光检测CD133和CD34。结果EPC呈铺路石样生长。提高Fn质量浓度并不提高细胞贴壁数。细胞呈长梭形。50%以上的EPC能摄取DiI-ac-LDL,并结合UEA-1。第10dEPC的CD133和CD34表达率为90%,第14d时分别下降到80%和70%。结论从猫骨髓中成功分离和培养出内皮祖细胞,形态上与猫角膜内皮细胞相似,有望作为种子细胞用于治疗角膜内皮失代偿。
- 邵春益傅瑶陆雯娟范先群
- 关键词：骨髓内皮祖细胞角膜内皮
- 培养猫角膜内皮细胞的新方法——联合酶消化法被引量：2
- 2008年
- 目的寻找一种可以快速获得大量猫原代角膜内皮细胞的方法。方法揭取猫角膜后弹力层，反复剪碎，用2g·L^-1复合胶原酶消化40min，再用2．5g·L^-1胰蛋白酶-EDTA消化2min，离心、细胞计数后以50×10^6L^-1的浓度接种。待细胞长满皿底后传代，接种浓度同原代培养。记录细胞的形态以及原代细胞的数目、原代细胞铺满皿底的时间、细胞传代时间和传代次数，并与组织块贴壁法和揭膜消化法相比较。结果联合酶消化法获得的原代细胞可以形成典型的铺路石样结构，无基质细胞污染，每片角膜可以收获（100—200）×10^3个细胞，只需5d就可以首次传代，传代后4d即可达到80％融合，连续传代8次仍可以维持小多边形的形态。结论胶原酶和胰蛋白酶联合消化法可以快速获得大量的猫角膜内皮细胞。
- 陆雯娟傅瑶邵春益范先群
- 关键词：角膜内皮细胞
