国家自然科学基金(30170211)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：商丘师范学院上海交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 噬菌体展示技术筛选DNA错配修复蛋白MutS高亲和性抗体
- 2006年
- 目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力。结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108L/mol。结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。
- 刘俊全智勇刘建华
- 关键词：噬菌体展示
- 肺炎衣原体重组的RNase HIIa和RNase HIIb的生化性质鉴定与比较
- 2008年
- 目的对肺炎衣原体AR39的RNase HIIa和RNase HIIb(CpRNase HIIa和CpRNase HIIb)进行克隆、表达及生化性质鉴定与比较。方法按已知的CpRNase HIIs基因设计引物、扩增。用pET表达系统构建重组质粒,表达和纯化CpRNase HIIs。5′-32P标记底物RNA/DNA及含有核糖核苷酸的DNA,鉴定酶学性质。结果CpRNase HIIa和CpRNase HIIb均能切割RNA/DNA杂合体的寡聚核糖核苷酸链,产生3′羟基和5′磷酸基团的末端。但两者确实存在着不同的酶活性质。结论CpRNase HIIa和CpRNase HIIb在细胞内担负着不同的功能。
- 裴冬丽刘建华
- 肺炎衣原体重组的RNase HIIa的克隆和性质鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的对肺炎衣原体AR39的RNase HIIa（CpRNase HIIa）进行克隆、表达和性质鉴定。方法按已知的CpRNase HIIa基因设计引物、扩增。用pET表达系统（表达载体、大肠杆菌BL21和Ni-NTA树脂）构建重组质粒，表达和纯化CpRNase HIIa。5’-^32P标记底物RNA／DNA，鉴定酶学性质。结摹CpRNase HIIa能切割RNA／DNA杂合体的寡聚核糖核苷酸链，产生3’羟基和5’磷酸基团的末端。CpRNase HIIa对Mg^2＋和Mn^2＋表现出明显的离子偏好性，且反应最适pH值为9～10。CpRNase HIIa切割12个碱基对的RNA／DNA杂合体底物的多个位点，但主要切割位点位于c10-g11之间与u7-g8之间。结论CpRNase HIIa可以有效的降解RNA／DNA杂合体的RNA链，于肺炎衣原体内担负着一定的生物学功能。
- 裴冬丽
- 关键词：肺炎衣原体克隆
