广东省科技计划工业攻关项目(2009B060700112)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：南方医科大学广东省人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MiR-138对MCF-7细胞端粒酶活性及端粒稳定性的调控作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究MiR-138通过人端粒酶反转录酶(hTERT)作为下游靶基因,对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性的调控作用及端粒稳定性的影响。方法在人乳腺癌MCF-7细胞中瞬时转染MiR-138模拟物,用MTT法检测细胞增殖活性,并于转染后48 h用实时定量RT-PCR检测端粒酶催化亚单位hTERT表达、TRAP assay检测端粒酶活性,同时对细胞进行53BP1抗体免疫荧光染色及端粒的FISH染色。结果转染后48 h,MiR-138模拟物处理的MCF-7细胞hTERT表达水平比对照细胞降低2.18倍(2-△△Ct),端粒酶活性比对照细胞降低2.69倍,53BP1聚集形成的凝集点(Foci)部分与端粒位点重合,比率达到20.62%±1.55%。结论 MiR-138以hTERT作为下游靶分子调控MCF-7细胞端粒酶活性,影响细胞端粒稳定性。
- 石嵘姜立高洋周珏宇丁大鹏郑文岭马文丽
- 关键词：端粒酶端粒人乳腺癌MCF-7细胞
- 干扰hTERT降低人乳腺癌MCF-7细胞对γ射线引起的DNA损伤反应被引量：1
- 2010年
- 目的研究hTERTRNA干扰对人乳腺癌MCF-7细胞γ射线照射引起的DNA损伤反应的影响。方法通过反转录病毒为载体的hTERT-siRNA,抑制人乳腺癌MCF-7细胞中端粒酶催化亚单位hTERT表达,实时定量RT-PCR及Western blot确认hTERT表达水平。用137Cs放射源以3 Gy剂量γ射线照射细胞,于照射前以及照射后1、2、4、8和12 h收集细胞,采用磷酸化53BP1抗体进行免疫荧光染色,并于照射前、照射后1、4和12 h收集细胞,Western blot检测53BP1蛋白磷酸化水平。结果 hTERT-siRNA处理的细胞hTERT表达水平比对照细胞降低3.20(2-△△Ct)倍,hTERT蛋白水平降低2.56倍。hTERT-siRNA处理的细胞对γ射线引起的DNA损伤反应显著降低。结论 RNA干扰hTERT表达水平,可以降低人乳腺癌MCF-7细胞对γ射线照射引起的DNA损伤反应。
- 石嵘马文丽高洋周珏宇丁大鹏余海浪郑文岭
- 关键词：端粒酶Γ射线人乳腺癌MCF-7细胞
- 浸润性膀胱癌差异基因的互作网络分析及验证研究被引量：3
- 2010年
- 目的采用蛋白互作网络分析研究表达谱基因芯片数据,构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行实验验证。方法将表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌152个共同差异表达基因,导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因互作网络图,并将互作网络数据导出到Cytoscape2.6.2软件中,筛选出网络中心节点。采用KEGG数据库等进行信号通路分类及基因功能研究,进而采用实时定量RT-PCR对其基因表达进行验证,筛选出基因表达在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组差异最大的基因,并对浸润性膀胱癌发生的分子机制进行初步探讨。结果共有103个膀胱癌共同差异表达基因编码的蛋白经STRING筛选存在相互作用,并构成一个复杂的互作网络图;Cytoscape共筛选出26个网络中心节点,广泛参与肿瘤发生的多条信号通路;实时定量RT-PCR结果表明UBE2C、VEGF、TGFBR2、CAV1四个基因表达量在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组的差异最大,分别为9.45、4.17、0.13、0.18倍(以GAPHD作为内参,计算2-△△Ct),与芯片检测结果的趋势一致。结论本研究构建出的浸润性膀胱癌差异基因互作网络图,尤其是其中的网络中心节点基因,对于浸润性膀胱癌发生分子机制的研究、早期诊断及分子靶向治疗研究具有较好的提示作用。
- 石嵘赵镇高洋吴清华宋艳斌姜立郑文岭马文丽
- 关键词：膀胱癌中心节点
- 莪术油对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及DNA损伤反应的调控作用被引量：6
- 2010年
- 目的研究莪术油通过hTert作为下游靶基因对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及DNA损伤反应的调控作用。方法以300μg/mL莪术油处理MCF-7细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,绘制生长曲线,筛选最佳药物处理时间。于加药后48 h,实时定量RT-PCR检测端粒酶催化亚单位hTert表达水平、TRAP Assay检测端粒酶活性变化;收集加药前以及加药后24,48,72 h细胞,采用免疫荧光及Western Blot检测DNA损伤反应相关53BP1蛋白水平。结果莪术油处理的MCF-7细胞24 h后增殖活力开始降低,至48 h生长明显减缓,实时定量RT-PCR结果表明,加药后48 h,hTert表达水平降低为对照细胞的2.43倍(2-△△Ct),TRAP Assay结果显示端粒酶活性降低为对照细胞的2.27倍,免疫荧光及Western Blot结果显示莪术油处理的细胞53BP1蛋白磷酸化水平自转染24 h后开始升高,至48 h左右达到高峰,至72 h时仍保持在较高水平。结论莪术油可以hTert作为下游靶分子,通过调控端粒酶活性及DNA损伤反应,抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖。
- 石嵘姜立周珏宇吴清华高洋丁大鹏郑文岭马文丽
- 关键词：莪术油端粒酶
