广西大学科研基金(X032066)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：张为宇黄维义陈明周春明石云良更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 奶牛温氏支原体16S rRNA基因的PCR扩增、克隆及分析被引量：3
- 2008年
- 目的对奶牛温氏支原体16S rRNA基因进行PCR扩增及克隆分析。方法从自然感染体的广西奶牛无菌采集血液,分离温氏支原体并提取病原基因组,用血营养菌的16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆到PGEM-Teasy载体后进行测序和分析,并与Gene bank上搜索的温氏支原体相应序列进行比较,建立系统发育树。结果PCR扩增得到长约1.5 kb的扩增片段,测序结果显示该片段全长为1 453 bp,同源性分析表明该序列与Neimark公布的温氏支原体(前称温氏附红细胞体)(AF016546)的16S rRNA基因序列同源性达到97.4%,与系统发育进化树表明本株温氏支原体同本地株的关系较近,而与国外株的新缘关系较远。国内公布的广西株同源性为99.8%。结论结果表明证实该病原为温氏支原体,从分子生物学水平证实了温氏支原体在广西的存在。由于本试验分离得到的牛温氏支原体与国外发表的牛温氏支原体核苷酸序列相差2.6%,因此两者的基因型存在一定的差异,这对该病的分子流行病学分析具有一定的意义。
- 苏乾莲黄维义张为宇陈明拉伊萨
- 关键词：温氏附红细胞体RRNA基因
- 奶牛附红细胞体的分类鉴定及诊断方法的建立被引量：7
- 2006年
- 为了从分子水平上确定奶牛附红细胞体(E.wenyoni)的分类学地位及建立奶牛附红细胞体感染诊断方法。本研究通过利用原核生物16S rRNA基因通用引物,对分离得到的奶牛附红细胞体(广西株,E.wenyoni-GX)进行16S rRNA基因的克隆及测序,并建立系统发育进化树;同时根据测序结果设计诊断引物,建立奶牛附红细胞体感染的PCR诊断方法。结果扩增出长约1.5kbp的奶牛附红细胞体的16S rRNA基因片段;特异性试验和敏感性试验表明,所建立的PCR方法与常见支原体、细菌及原虫无交叉反应,能检测奶牛附红细胞体最低DNA量为0.145fg。通过试验结果分析,建议将奶牛附红细胞体这类血营养菌划归入支原体科、支原体属;同时,所建立的PCR诊断方法是特异、敏感、快速的,可应用于临床检测。
- 陈明黄维义张为宇韦家周石云良周春明张诗新张宇
- 关键词：附红细胞体RRNA基因PCR克隆系统发育进化树
- 奶牛附红细胞体16SrRNA基因的克隆测序及系统发育进化树的建立被引量：1
- 2006年
- 为了从分子水平上证实奶牛附红细胞体的存在及研究其分类学地位,利用原核生物16S rRNA基因通用引物对分离纯化的疑似奶牛附红细胞体进行16S rRNA基因的PCR扩增及克隆测序。结果扩增出长约1.5 kb的目的片段,测序结果表明:目的片段长度为1 439 bp,其核苷酸序列与国外已发表的牛温氏附红细胞体(E.wenyoni)的16SrRNA基因片段同源性高达97.1%,暂称为中国广西株(E.wenyoniCGX)。系统发育进化树显示:E.wenyoni和其他血营养菌在系统进化关系上组成了一个大的进化分支,与支原体科、支原体属的病原最接近(75%),而与立克次体科的病原较远(55%)。分析结果支持了Nei mark等和Messick等提出的将这类血营养菌划归支原体科、支原体属的建议。
- 陈明黄维义张为宇李莉萍韦家周周春明
- 关键词：RRNA克隆系统发育进化树
