您的位置: 专家智库 > >

浙江省重大科技专项基金(2008C14082)

作品数:4 被引量:8H指数:2
相关作者:高基民吴小兵董小岩何秋山陈素云更多>>
相关机构:温州医学院中国疾病预防控制中心南方医科大学更多>>
发文基金:浙江省重大科技专项基金浙江省自然科学基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇融合蛋白
  • 3篇细胞
  • 2篇生物学活性
  • 2篇亲和
  • 2篇链亲和素
  • 2篇白细胞
  • 2篇白细胞介素
  • 2篇SA
  • 1篇原核表达
  • 1篇载体介导
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇脂联素
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学活性检...
  • 1篇受体
  • 1篇死因
  • 1篇球部
  • 1篇中试

机构

  • 4篇温州医学院
  • 2篇中国疾病预防...
  • 1篇南方医科大学

作者

  • 4篇高基民
  • 2篇董小岩
  • 2篇吴小兵
  • 1篇刘丹
  • 1篇茅奇峰
  • 1篇柳云帆
  • 1篇陈素云
  • 1篇刘雪荣
  • 1篇陆月
  • 1篇余宏盛
  • 1篇张孝任
  • 1篇陈惜倩
  • 1篇何秋山

传媒

  • 2篇生物工程学报
  • 2篇温州医学院学...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 2篇2010
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
hIL-15-SA双功能融合蛋白的制备被引量:1
2010年
目的:对双功能融合蛋白hIL-15-SA的发酵及纯化工艺进行研究。方法:采用发酵罐高密度发酵hIL-15-SA工程菌,通过镍柱亲和层析及阴离子交换层析纯化目的蛋白。免疫印迹分析产物,淋巴细胞增殖试验以及细胞锚定试验检测双功能融合蛋白hIL-15-SA的生物学活性。结果:采用半合成培养基,以3%的接种量,pH值为7.2发酵可得到湿菌47 g/L,21.15 g/L包涵体。经纯化后目的蛋白纯度为97%。细胞增殖试验和细胞表面锚定修饰试验表明,经纯化复性的hIL-15-SA融合蛋白具有双重生物活性。结论:本研究获得了高产量、高纯度的hIL-15-SA双功能融合蛋白,为后续的体内生物学功能研究奠定了基础。
余宏盛严耀明茅奇峰高基民
关键词:白细胞介素15链亲和素融合蛋白中试工艺
SA/hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定被引量:2
2013年
目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素24融合蛋白(SA/hIL24),并鉴定其生物学活性。方法:通过RT-RCR扩增hIL-24基因序列,构建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和凝胶过滤层析纯化、透析复性。MTT法检测融合蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析融合蛋白对已生物素化的小鼠膀胱癌MB49细胞的锚定修饰效率。结果:成功构建两种融合蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达,表达量分别占菌体总蛋白的20%和35%,二次纯化后SA/hIL24融合蛋白纯度可达95%以上。SA/hIL24融合蛋白可高效结合至已生物素化的MB49肿瘤细胞表面(表面锚定修饰率大于90%),hIL24-SA融合蛋白可以剂量依赖的方式抑制Hela细胞的生长,而SA-hIL24融合蛋白对Hela细胞没有明显的抑制生长作用。结论:SA/hIL24融合蛋白的制备为hIL-24表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础。
陈惜倩高基民
关键词:白细胞介素24链亲和素融合蛋白原核表达
可溶性肿瘤坏死因子受体II-脂联素球部融合蛋白的真核表达及生物学活性检测被引量:4
2010年
本研究设计和构建了一种人肿瘤坏死因子受体II胞外区与人脂联素球部的融合基因sTNFRII-gAD,且相应的融合蛋白在哺乳动物细胞BHK-21S的无血清培养体系中实现了表达,并对该融合蛋白进行了初步鉴定。首先,用RT-PCR方法从人的外周血淋巴细胞总RNA中扩增人肿瘤坏死因子II型受体胞外区基因片段,与脂联素球部基因片段融合,克隆至pAAV2neo表达载体中,构建成pAAV2neo-sTNFRII-gAD。随后,用pAAV2neo-sTNFRII-gAD转染BHK-21S细胞获得G418抗性细胞BHK-21S/pAAV2neo-sTNFRII-gAD;然后,将原来含有血清的培养液换成无血清的化学成分限定的培养液,细胞从贴壁培养方式转换成悬浮培养方式;最后,收集BHK-21S/pAAV2neo-sTNFRII-gAD无血清悬浮培养24h后的培养上清,进行sTNFRII-gAD融合蛋白的鉴定分析。酶切鉴定和测序结果显示,所构建的pAAV2neo-sTNFRII-gAD质粒结构正确,sTNFRII-gAD序列与预期一致;分别用抗人肿瘤坏死因子受体II和抗人脂联素球部的单克隆抗体检测pAAV2neo-sTNFRII-gAD瞬时转染的BHK-21S细胞,免疫荧光呈现阳性;免疫印迹分析在pAAV2neo-sTNFRII-gAD稳定转染的BHK-21S细胞上清中检测到sTNFRII-gAD融合蛋白的表达,并以单体、三聚体和三聚体以上的多聚体形式存在。活性测定结果表明,sTNFRII-gAD融合蛋白具有显著抑制TNFα杀伤L929细胞的活性。因此,本研究为下一步大量制备sTNFRII-gAD融合蛋白用于体内外功能研究提供了良好基础。
陈素云何秋山董小岩吴小兵高基民
关键词:脂联素融合蛋白真核表达
腺病毒载体介导的重组蛋白sTNFRII-gAD快速表达和制备被引量:3
2011年
利用腺病毒载体高效感染哺乳动物细胞及表达外源基因的特性,建立一种快速高效表达及制备重组蛋白的方法,并用该方法获得sTNFRII-gAD(可溶性肿瘤坏死因子受体II-脂联素球部融合蛋白)蛋白纯品。首先用携带EGFP基因的腺病毒载体rAd5-EGFP以不同的腺病毒用量(MOI)(0-1 000)感染BHK21c022细胞,观察比较其转导效率和细胞毒性。用AdMax腺病毒载体系统制备携带融合基因sTNFRII-gAD的重组复制缺陷型5型腺病毒rAd5-sTNFRII-gAD。用rAd5-sTNFRII-gAD以不同的MOI(0~1 000)感染BHK21c022细胞,收取上清进行Western blotting分析,比较上清中sTNFRII-gAD蛋白的表达量。在此基础上,用rAd5-sTNFRII-gAD以MOI 100感染大量培养的BHK21c022细胞,在无血清培养条件下反复多次收取培养上清,经过硫酸铵浓缩、分子筛柱层析、透析等步骤浓缩和纯化sTNFRII-gAD融合蛋白,并体外测定该融合蛋白拮抗TNFα的活性。结果获得了携带sTNFRII-gAD融合基因的重组腺病毒rAd5-sTNFRII-gAD;用rAd5-EGFP感染BHK21c022细胞结果表明,随着腺病毒用量的增高,表达EGFP蛋白的BHK21c022细胞数量和亮度明显增加;MOI在0~100之间被感染的BHK21c022细胞未表现出明显的细胞毒性,MOI为1 000时可观察到细胞变圆和少量死亡现象。Western blotting分析结果表明,随着腺病毒用量的增高,培养上清中sTNFRII-gAD融合蛋白表达量明显增加,以MOI为1 000时最高。在此基础上,我们用MOI为100的rAd5-sTNFRII-gAD感染5个转瓶培养的BHK21c022细胞以制备sTNFRII-gAD融合蛋白。每个转瓶加无血清培养液100 mL,每48 h收获上清1次并换液,反复6次收取培养上清共约3 L,经过纯化获得了约11 mg的sTNFRII-gAD融合蛋白。体外活性测定实验表明,获得的sTNFRII-gAD融合蛋白能有效拮抗TNFα对L929细胞的杀伤作用。腺病毒载体/BHK21细胞表达系统是一个简便、高效、通用的表达系统,利用该系统成功制备了有生物学�
陆月刘丹张孝任刘雪荣沈炜郑刚柳云帆董小岩吴小兵高基民
关键词:腺病毒重组蛋白哺乳动物细胞
共1页<1>
聚类工具0