中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP31001)
- 作品数：10 被引量：73H指数：6
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- 大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质被引量：2
- 2011年
- 以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶（mdh）编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶（mdh）,纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K＋对酶有明显的激活作用,Cu2＋对酶有抑制作用,Hg2＋和Zn2＋对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/（L.min）。
- 李倩徐美娟夏海锋饶志明
- 关键词：大肠杆菌克隆表达苹果酸脱氢酶纯化酶学性质
- 一株产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选、鉴定及发酵条件被引量：16
- 2012年
- 利用贫营养条件,从土壤样品中筛选到一株产红色素的菌株。经形态学、生理生化实验进行菌株初步鉴定,并经16S rDNA测序分析确定该菌株为粘质沙雷氏菌属,将其命名为:Serratiamarcescens JNB5-1。该菌株所产红色素经全波长扫描及LC-MS确定为灵菌红素。对Serratiamarcecens JNB5-1产灵菌红素做初步发酵研究,在蔗糖2 g/dL,牛肉膏1.5 g/dL,CaCl21 g/dL,脯氨酸0.75 g/dL,MgSO4.7H2O 0.02 g/dL,FeSO4.7H2O 0.006 g/dL的培养基中发酵72 h后,其发酵产量可达4.139 g/L。
- 李子武张显徐美娟夏海锋饶志明
- 关键词：灵菌红素发酵条件
- 钝齿棒杆菌N-乙酰鸟氨酸转氨酶的克隆表达分析及其重组菌的精氨酸发酵被引量：7
- 2011年
- N-乙酰鸟氨酸转氨酶(EC 2.6.1.11,ACOAT)是钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum精氨酸合成途径中的第4个酶,催化底物N-乙酰谷氨酸半醛生成产物N-乙酰鸟氨酸。为研究N-乙酰鸟氨酸转氨酶在钝齿棒杆菌中精氨酸合成中的作用,考察其酶学性质,对培养基成分和发酵过程工艺条件的优化提高精氨酸产量提供依据。从精氨酸高产菌株钝齿棒杆菌SYPA 5-5染色体扩增获得ACOAT编码基因argD,全长1 176 bp,编码390个氨基酸,在Escherichia coli BL21(DE3)及C.crenatum SYPA中成功表达。采用Ni柱亲和层析纯化后获得的重组蛋白比酶活达108.2 U/g,对其部分酶学性质进行初步研究。构建重组钝齿棒杆菌C.crenatum SYPA(pJCtac-CcargD),加强精氨酸合成途径ACOAT蛋白表达量,对重组菌产精氨酸进行初步发酵分析。多次发酵结果表明重组钝齿棒杆菌与出发菌株相比胞内ACOAT酶活得以增强;重组菌CCD1精氨酸平均产量为39.7 g/L,产酸提高14.7%。结果还表明在重组菌发酵精氨酸的同时不仅ACOAT得到了加强表达,同时还提高了重组菌在发酵过程中菌体自身的氧利用率。
- 徐美娟张显饶志明杨娟窦文芳金坚许正宏
- 关键词：钝齿棒杆菌L-精氨酸酶学性质发酵
- β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达被引量：11
- 2012年
- 从Bacillus subtilis JNA 3-10中克隆出β-甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列manA1和含信号肽的β-甘露聚糖酶基因manA2,在B.subtilis 168中克隆表达,分别筛选获得高效分泌表达β-甘露聚糖酶的重组菌株BPM1001(pMA5-manA1/B.subtilis 168)和BPM1002(pMA5-manA2/B.subtilis 168),结果表明菌株BPM1002总酶活力是菌株BPM1001的9.65倍,是原始菌株的13.1倍.在基因manA2下游引入His序列克隆出β-甘露聚糖酶基因manA3,获得枯草芽孢杆菌168重组菌株BPM1003.采用Ni-NTA柱纯化重组菌株BPM1003分泌表达的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质,该酶促反应的最适pH为6.5,最适温度为65℃,在37℃条件下保存一个月酶活力依然保留有77.8%.5 L发酵罐放大实验结果表明魔芋粉对于产β-甘露聚糖酶具有明显的诱导作用,酶活力最高可达2 748.82 U/mL.
- 刘项羽徐美娟杨套伟张显饶志明
- 关键词：Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌信号肽重组菌株酶学性质
- 耐热β-淀粉酶高产菌株的筛选及其产酶条件优化被引量：6
- 2013年
- 为丰富产耐热β-淀粉酶菌种资源,从土样中筛选得到高产淀粉酶菌株B10-54,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).经硫酸铵沉淀、阴离子交换柱分离纯化获得β-淀粉酶,测定其最适作用温度为65℃,最适pH为6.0,Ni2+、Mg2+离子对其酶活有促进作用.对B10-54发酵产β-淀粉酶进行优化,确定最适培养基碳氮源为木薯粉2%、豆粕粉4%,最适发酵条件为初始pH 7.0、温度37℃、转速190 r/min、接种量4%,摇床培养64 h后酶活力可达6 724 U/mL,比优化前提高了3.06倍.在装液量为2.5 L的5 L发酵罐中发酵,转速350 r/min,通气量1 L L-1min-1,控制pH在6.5-7.5之间,发酵48h后酶活可达最高酶活6 920 U/mL,比摇瓶培养缩短了发酵时间.因此菌株B10-54产耐热β-淀粉酶并可利用廉价原料木薯、豆粕粉发酵,可大大降低生产成本.
- 邹艳玲徐美娟饶志明
- 关键词：枯草芽孢杆菌Β-淀粉酶菌种筛选发酵条件优化
- 一株以葡萄糖为底物产2,3-丁二醇微生物菌株的筛选及鉴定被引量：3
- 2010年
- 从自然界中筛选出一批以葡萄糖为底物发酵产2,3-丁二醇的菌株,经初步发酵测定发酵液中2,3-丁二醇含量,其中菌株6-7的2,3-丁二醇产量最高达49.6g/L。对其进行常规生理生化鉴定实验,并结合16SrDNA序列分析,比对结果表明,菌株6-7与Bacillus subtilis strain BIHB332相似性达99%。在细菌分类学上属于枯草芽孢杆菌属,将其命名为Bacillussubtilis6-7。其特点是属于环境友好和食品安全型菌株,因此,利用Bacillus subtilis6-7生产2,3-丁二醇具有良好的工业应用价值。
- 林清张显杨套伟徐美娟张术聪夏海锋饶志明
- 关键词：2,3-丁二醇枯草芽孢杆菌
- 一株重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化被引量：16
- 2012年
- 为实现微生物法高效率生产γ-氨基丁酸(GABA),从一株经多次诱变筛选的具有较高谷氨酸脱羧酶(GAD)活力植物乳杆菌GB 01-21全基因组DNA中PCR扩增获得GAD酶基因lpgad,构建重组质粒pET-28a-lpgad,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中高效诱导表达。并采用Ni柱亲和层析纯化获得重组GAD,并对其酶学性质进行初步研究,为改良转化工艺提高GABA产量提供可靠理论依据。结果显示,重组大肠杆菌中GAD酶活显著提高,可达8.53 U/mg,是植物乳杆菌GB 01-21中GAD酶活的4.24倍。将该重组菌应用于转化L-谷氨酸生产GABA,5 L发酵罐水平转化24 h产量可达143.5 g/L,摩尔转化率为97.32%,是植物乳杆菌GB 01-21的2.19倍。纯化后酶学性质进行初步研究表明:其最适pH为4.8;最适温度为37℃;Ca2+、Mg2+对其有较强的激活作用,将上述实验结果用于转化条件的优化,最终5 L发酵罐上进行转化实验,批次添加底物L-谷氨酸共600 g,转化24 h,GABA累计浓度可达204.5 g/L,摩尔转化率为97.92%,与最初转化条件相比,GABA浓度提高了42.5%,为其工业化应用打下了良好的基础。
- 田灵芝徐美娟饶志明
- 关键词：Γ-氨基丁酸谷氨酸脱羧酶重组大肠杆菌
- 三种酵母启动子在毕赤酵母中的功能比较被引量：11
- 2011年
- 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子功能的强弱对于目的基因的表达非常重要。为找到一个启动转录功能较好的启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,在毕赤酵母中研究不同启动子对外源蛋白表达的影响。首先采用PCR扩增的方法克隆了酿酒酵母甘油合成关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子pScgpd,借助于载体pPIC9K和pGAPZB,构建pPIC9K-gfp和pPIC9K-PG,pGAPZB-gfp和pGPDZB-gfp,将重组载体分别转入毕赤酵母GS115和毕赤酵母X33中,在不同渗透压条件下培养重组菌,通过GFP的表达情况比较启动子pScgpd与甲醇氧化酶启动子pAOX1、3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子pGAP的功能。荧光显微镜观察结果显示,pScgpd表现为受高渗条件诱导,重组毕赤酵母P.pastoris GS115和P.pastoris X33均能产生稳定的荧光,且在一定范围内随着葡萄糖或NaCl浓度的增加,GFP表达强度也有所增加;但分别与对应宿主P.pastorisGS115、P.pastoris X33的启动子pAOX1和启动子pGAP相比,表达水平仍较弱。
- 蒋慧慧李丰功陆毅饶志明
- 关键词：毕赤酵母绿色荧光蛋白
- 聚癸二酸木糖醇酯生物弹性体的合成与性能研究被引量：1
- 2010年
- 以癸二酸和木糖醇为单体通过熔融缩聚反应,制备出聚癸二酸木糖醇酯生物弹性体,并对其结构进行表征。研究表明,材料具有可调的力学性能(拉伸强度0.2～3.2MPa、伸长率47%～252%),而且其玻璃化转变温度处于室温以下,是一种性能优异的生物弹性体,随着癸二酸量的增加,弹性体出现部分结晶。
- 东为富吴畏陈明清倪忠斌胡杰梅涛峰
- 关键词：木糖醇癸二酸生物弹性体
- 结合缺陷型菌株显色法采用离子束诱变筛选高产L-精氨酸突变株被引量：1
- 2011年
- 为快速高效筛选L-精氨酸高产突变株,建立一种缺陷菌株平板显色法并采用低能N+离子束对L-精氨酸生产用菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5进行诱变处理,通过上述平板显色法筛选获得高产突变株。对突变株进行摇瓶发酵实验,最终选育出一株L-精氨酸产量较高且产酸性能比较稳定的突变菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5-36。该菌株摇瓶发酵L-精氨酸产量可达35.85 g/L,比出发菌株提高了19.5%。因此,缺陷型菌株平板显色法可以用于快速、高效筛选高产L-精氨酸突变株。
- 杨娟饶志明徐美娟夏海锋窦文芳许正宏
- 关键词：L-精氨酸离子束注入钝齿棒杆菌营养缺陷型
