国家自然科学基金(30170045)
- 作品数：11 被引量：25H指数：2
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- HPV16L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 :探讨嵌合性病毒样颗粒HPV1 6L1 E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法 :以本室构建的HPV1 6L1 E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB/c小鼠 ,在初次免疫后 ,分别于第 3、4、5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV1 6L1蛋白 ,检测特异性DHT反应。在末次免疫 2周后 ,取小鼠脾细胞 ,用HPV 1 6L1 E7蛋白刺激 ,检测T细胞增殖反应及血清IFN γ水平。结果 :HPV1 6L1 E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV1 6L1抗体及特异性DTH反应 ,加强免疫后 ,抗体水平升高 ,两者水平均高于对照组 (P <0 .0 1 )。HPV1 6L1 E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞 ,在特异性HPV1 6L1 E7蛋白抗原刺激下 ,特异性T淋巴细胞明显增殖。被免疫小鼠血清中出现高水平IFN γ。结论 :嵌合病毒样颗粒HPV1 6L1 E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体、HPV1 6L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子 。
- 栾怡于修平宋长芹卞继峰阎世坤赵蔚明贾继辉周亚滨齐眉
- 关键词：人乳头状瘤病毒疫苗实验动物
- HPV_(16)L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究被引量：2
- 2002年
- 目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640+10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。
- 宋长芹于修平栾怡卞继峰赵蔚明贾继辉李勇周亚滨于瑾齐眉宋静王津秋阎淑芳
- 关键词：重组腺病毒载体疫苗BALB/C小鼠抗独特型抗体
- 减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建被引量：7
- 2002年
- 目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 。
- 卞继峰于修平赵蔚明耿昭杨海宁于瑾李静胡海燕卢翌张茂修姜广水
- 关键词：人乳头状瘤病毒DNA疫苗沙门氏菌属
- SCID-HuIC小鼠模型的建立及在rAd5HPV16L1-E7疫苗中的应用被引量：1
- 2004年
- 目的 研究脐血移植建立SCID HuIC小鼠嵌合动物模型以及在HPV16L1 E7重组腺病毒中的应用。方法 (1)采用尾静脉注射法给实验组注射脐血单个核细胞悬液 ,对照组注射RPMI16 4 0培养液 ;8周末检测血中人IgG抗体水平及人CD4 5、CD3、CD19;(2 )将SCID HuIC小鼠和SCID小鼠 ,分别经腹腔注射和滴鼻途径给予rAd5HPV16L1 E7重组病毒 ,于第 4周末取血检测rAd5HPV16L1 E7重组病毒特异性IgG抗体、脾细胞培养液中IFN γ的含量及T 淋巴细胞增殖。结果 (1)实验组中人IgG抗体阳性数为 10 15 ,含量为 (0 16 7± 0 0 89) ;人CD4 5为 (9 39± 4 2 1) ,CD3为 (3 2 5± 3 99) ;CD19为 (1 6 9± 0 75 ) ,对照组未测出人IgG抗体以及CD4 5、CD3、CD19;(2 )腹腔注射组和滴鼻组病毒特异性IgG抗体均为 10 0 %阳性 ;实验组培养液中IFN γ的含量和T 淋巴细胞增殖实验病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 0 5 ) ;对照组SCID小鼠rAd5HPV16L1 E7重组病毒特异性IgG抗体、T 淋巴细胞增殖和培养液中人IFN γ均为阴性。结论 (1)采用人脐血移植SCID小鼠建立SCID HuIC小鼠嵌合动物模型是可行的 ;(2 )人新鲜脐血移植重建的SCID HuIC小鼠具有对rAd5HPV16L1 E7重组病毒的免疫应答能力 ,而未移植者 (对照组 )则对rAd5HPV16L1 E7重?
- 宋长芹李勇栾怡卞继峰赵丽赵蔚明贾继辉周亚滨齐眉于修平
- 关键词：HPV16SCID小鼠人IGGCD3T-淋巴细胞免疫应答能力
- 大鼠胚胎皮肤前体复合物裸鼠移植模型的构建
- 2012年
- 目的筛选大鼠胚胎皮肤裸鼠移植的最佳妊娠时间窗,探索研究胚胎皮肤及其附件发育机制并进行干预的新方法。方法获取不同胎龄(E14.5 d、E16.5 d、E18.5 d)的携带少量皮下组织的大鼠胚胎皮肤前体复合物(ESPCs),以皮瓣下埋植的方式移植到裸鼠背部。7 d后打开皮瓣并暴露成活的ESPCs,观察其成活后胚胎皮肤及附件生长发育的组织学变化。结果 E16.5 d、E18.5 d移植物可顺利成活并继续生长发育,最终生成带皮肤附件的完整的皮肤结构;E14.5 d移植物则形成畸胎瘤样肿物。结论通过皮瓣下埋植可成功移植大鼠ESPCs;E16.5 d左右为ESPCs移植的最佳妊娠时间。
- 李川程艳娜姜笃银
- 关键词：胚胎皮肤附件
- HPV_(16)L1-E7重组病毒及其重组质粒免疫后小鼠抗体水平动态变化的研究
- 2003年
- 目的 :研究人乳头瘤病毒 16型L1 E7重组腺病毒 (rAd5HPV16 L1 E7virus)及其重组质粒 (rAd5HPV16 L1 E7plasmid)经不同途径免疫后小鼠抗体水平的动态变化。方法 :用 2 93细胞扩增rAd5HPV16 L1 E7重组病毒 ,同时制备rAd5HPV16 L1 E7重组质粒 ,分别以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠 ,采用ELISA法测定其血清IgG抗体水平。结果 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒采用不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中以肌注组产生抗体量最多 ,并且出现最早。结论 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒均能刺激B细胞产生抗体介导的免疫应答 ,免疫途径不同 ,抗体峰值的出现时间亦不同 ,测定抗体的最佳时间亦不同。
- 宋长芹孙洪涛于修平栾怡卞继峰赵蔚明贾继辉周亚滨于瑾齐眉
- 关键词：人乳头状瘤病毒小鼠近交BALBC抗独特型抗体
- 小鼠对HPV_(16)L1-E7重组腺病毒和重组质粒的免疫应答被引量：2
- 2003年
- 对比研究人乳头瘤病毒 16型L1 E7重组腺病毒 (rAd5HPV16L1 E7)和重组质粒经不同途径免疫小鼠所产生的免疫效应。将rAd5HPV16L1 E7病毒在 2 93细胞中扩增 ,并制备rAd5HPV16L1 E7重组质粒 ,分别以肌肉注射、滴鼻途径免疫小鼠 ,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平 ;制备脾细胞悬液 ,加入到 96孔无菌培养板中 ,分别加入rAd5HPV16L1 E7特异性蛋白和 10 %FCSRPMI16 4 0 ,加入3 H TdR 1μCi/孔 ,做T 细胞增殖实验 ;取经过培养 5 6h的培养液进行IFN γ的测定。不同疫苗和不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组小鼠 (P <0 0 5 ) ,IFN γ和T 细胞增殖亦高于对照组 (P <0 0 5 ) ,且各实验组中病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 0 5 )。提示 :rAd5HPV16L1 E7重组质粒和rAd5HPV16L1 E7重组活病毒一样既能刺激T 细胞产生细胞免疫应答 ,又能刺激B 细胞产生体液免疫应答 ,说明其具有很好的免疫原性 。
- 宋长芹于修平栾怡卞继峰赵蔚明贾继辉王津秋阎淑芳
- 关键词：质粒人乳头瘤病毒免疫应答
- 人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组质粒的构建及其细胞的免疫性被引量：1
- 2003年
- 目的:构建HPV16L1-E7C重组质粒并研究其细胞免疫性。方法:利用基因克隆技术将HPV16L1-E7CDNA片段定向插入pcDNA3.1载体,构建重组质粒pcDNA16L1-E7C,然后将其免疫C57BL/6小鼠,利用T淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖能力,同时利用ELISA试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的水平。结果:特异性T细胞增殖试验中实验组3H-TdR掺入率为18339±1972,对照组为6737±1243,实验组小鼠T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.05)。DNA免疫后实验组小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平为0.89±0.56,对照组为4.81±1.33,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组质粒能增强小鼠的细胞免疫功能。
- 齐眉卞继峰赵蔚明于修平周亚滨贾继辉
- 关键词：乳头瘤病毒基因L1基因E7Γ干扰素
- HPV16L1-E7重组腺病毒在SCID-Hu IC小鼠和HPV16阳性肿瘤联合嵌合小鼠中防治作用的研究被引量：2
- 2003年
- 目的 建立SCID HuIC小鼠动物模型和HPV16阳性肿瘤联合嵌合模型 ,研究HPV16L1 E7重组腺病毒在SCID HuIC小鼠和肿瘤联合嵌合模型中的防治作用。方法 ①实验组SCID小鼠移植人胎儿多组织 ,对照组注射RPMI 16 4 0培养液 ,8周末检测人IgG抗体 ,人CD4 5、CD3、CD19;②T1和C1组先注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,2周末强化 ,4周末接种CaSki细胞 ;T2和C2组先接种CaSki细胞 ,4周末注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,6周末强化。 8周末检测病毒特异性IgG抗体、人IFN γ及T淋巴细胞增殖 ,测定肿瘤的物理指标以及免疫组化实验。结果 ①实验组人IgG抗体阳性率 90 .0 % (18/ 2 0 ) ,CD4 5为 (49.79± 39.18) % ;CD3为 (42 .2 7± 36 .37) % ;CD19为 (9.2 8±7.4 6 ) % ,对照组人IgG抗体、人CD4 5、CD3及CD19均为阴性 ;②T1和T2组病毒特异性IgG抗体均为阳性、人IFN γ的含量和T淋巴细胞增殖实验 ,病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 .0 5 ) ,C1和C2组病毒特异性IgG抗体为阴性、人IFN γ的含量及T淋巴细胞增殖均为阴性 ;肿瘤形成率 :T1和T2组分别为 0和 70 .0 % (7/ 10 ) ,而C1和C2组均为 10 0 % ;肿瘤大小 :T2组在 4周末时为 (4.35 5±0 .387)mm3 ,8周末为 (10 2 8± 90 .96 )mm3 ,C2组在 4周末时为 (32 .75± 6 .717)
- 宋长芹于瑾栾怡卞继峰马道新赵蔚明贾继辉周亚滨齐眉王大燕于修平
- 关键词：重组腺病毒
- 滴鼻接种HPV16 L1-E7 DNA初始引发及HPV16 L1 VLP强化免疫可增强小鼠黏膜和细胞免疫
- 2006年
- 目的探讨HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16L1病毒样颗粒(VLP)强化接种小鼠诱发免疫反应的效应,为进一步用于HPV16相关恶性肿瘤的防治提供实验依据。方法以HPV16 L1-E7嵌合蛋白、HPV16 L1 VLP以及HPV16 L1-E7 DNA单独或联合滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,连续使用3周。免疫后采血及收集阴道分泌物,检测特异性抗体。在末次免疫2周后,取小鼠脾细胞,用HPV 16 L1-E7蛋白刺激,检测T细胞增殖反应及IFN-γ水平。结果HPV16 L1-E7嵌合蛋白滴鼻接种可诱导小鼠产生血清HPV16 L1特异性IgG,强化免疫后抗体水平明显增高(P<0.01);阴道局部产生HPV16 L1特异性IgA;在HPV16 L1-E7抗原刺激下,脾细胞上清液中IFN-γ水平升高。HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发和HPV16 L1蛋白加强免疫可增高阴道分泌液中HPV16 L1特异性IgA水平,增高脾淋巴细胞中特异性T细胞产生IFN-γ的水平。结论嵌合病毒样颗粒HPV16 L1-E7和HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16 L1蛋白强化滴鼻接种适用于预防HPV原发性黏膜感染和治疗HPV16相关肿瘤。
- 栾怡于修平赵蔚明于瑾杨宁唐伟
- 关键词：乳头瘤病毒
