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心肌或“心肌样”环境而不是化学物质诱导骨髓基质细胞向心肌细胞分化研究被引量：2: 2004年; 目的　比较心肌或“心肌样”环境与胞嘧啶类化学物质 5 氮胞苷对骨髓基质细胞(MSCs)向心肌细胞分化的诱导作用。方法　用不同浓度 (3、5、10 μmol/L)的 5 氮胞苷以各种方法(一次处理与反复处理 )诱导MSCs ,连续观察 3 0d。采用免疫荧光技术检测心肌特异性肌球蛋白重链 (MHC)及肌钙蛋白Ⅰ (TnⅠ )的表达 ,并用心室肌特异性肌球蛋白轻链 (MLC2v)启动子 (2 5 0bp)控制的蓝绿色荧光蛋白 (ECFP)报告基因表达技术从转录启动水平进行检测 ;将MSCs与心肌细胞共培养或移植入大鼠心肌内 ,检测MHC及TnⅠ表达。结果　 5 氮胞苷处理过的MSCs培养物中未见细胞搏动、肌管形成、MHC和TnⅠ表达 ,亦无MLC2v转录启动阳性细胞出现 ;但在共培养及体内移植实验中 ,检测到心肌特异性蛋白在MSCs中的表达。结论　体外 5 氮胞苷处理不能诱导MSCs表达心肌特异性蛋白 ;但MSCs与心肌细胞直接接触可向心肌细胞分化。; 刘维新宋健万喻潘国栋刘昱程邦昌陈锡昌; 关键词：骨髓基质细胞 5-氮胞苷共培养分化

外源性胰岛素样生长因子1基因在大鼠骨髓基质细胞中的表达及对其生物学行为的影响被引量：1: 2006年; 目的:观察人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因转染大鼠骨髓基质细胞(BMSC)后产物的表达及对BM-SC特征的影响。方法:构建hIGF-1逆转录病毒载体并转染BMSC,嘌呤霉素筛选,RT-PCR和ELISA法检测hIGF-1表达,MTT及美蓝、碱性磷酸酶钙钴、苏丹Ⅲ染色观察转染后BMSC增殖、集落形成及分化,并分析药物筛选对其增殖的影响。结果:转染BMSC经筛选后,IGF-1表达的增幅高于未经筛选者(10.7倍∶6.7倍)。与空质粒转染组比较,未经筛选的BMSC增殖加快,而经筛选者增殖和集落形成能力降低,向脂肪及成骨细胞分化增强。结论:基因修饰可成功构建高表达IGF-1的BMSC,并促进其增殖和自然分化,但嘌呤霉素筛选对其自我更新能力有负面作用。; 吴艳宋健万瑜胡成俊刘维新王乔; 关键词：胰岛素样生长因子1 转染骨髓基质细胞

体外证据不支持5-氮胞苷诱导骨髓基质细胞向心肌细胞分化被引量：2: 2004年; 目的　探讨胞嘧啶类化学物质 5 氮胞苷是否可诱导体外培养的骨髓基质细胞 (marrowstromalcells ,MSCs)向心肌细胞分化。方法　用不同浓度 (3,5 ,10 μmol/L)的 5 氮胞苷以各种方法 (一次处理与反复处理 )诱导原代及传代MSCs。采用免疫荧光及WesternBlot技术检测心肌特异性肌球蛋白重链 (myosinheavychainα/ β ,MHCα/ β)及肌钙蛋白I (tro poninI,TnI)的表达 ;并用心室肌特异性肌球蛋白轻链 (ventricularmyosinlightchain 2 ,MLC2v)启动子 (2 5 0bp)控制的增强型蓝绿色荧光蛋白 (enhancedcyanfluorescentprotein ,ECFP)报告基因表达技术检测被诱导MSCs是否发生MLC2v的转录启动。上述检测技术的特异性和可靠性用培养的心肌细胞进行验证。结果　在本试验最长观察时间内 (30d) ,各种浓度及各种方法 5 氮胞苷诱导的MSCs培养物中未见细胞自发搏动、肌管形成、心肌特异性MHC和TnI表达 ;亦无MLC2v转录启动阳性细胞出现。结论　从转录启动到翻译后水平的证据均不支持体外 5 氮胞苷处理可诱导MSCs表达心肌特异性蛋白。; 刘维新宋健万喻刘昱潘国栋程邦昌陈锡昌; 关键词：骨髓基质细胞心肌细胞 5-氮胞苷细胞分化

骨髓基质细胞在梗塞区与非缺血区心肌中的分化: 2004年; 目的　观察心肌梗塞环境对移植骨髓基质细胞 (MSC)向心肌样细胞分化的影响。方法　采用成年近交系Wis tar大鼠 ,经左冠状动脉前降支结扎建立急性心肌梗塞模型。术后 1周 ,将来自同种供体、经体外扩增和DAPI标记的MSC分别植入梗塞区和非缺血区心肌。移植后 1、2、4周取材、连续冰冻切片 ,观察两种环境中MSC的分布、迁移及心肌特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达。结果　植入梗塞区中的MSC扩散较快、增殖似更明显。两种环境中都可见移植细胞表达TnT ,且有少数细胞呈现心肌样横纹 ,但梗塞区移植细胞TnT阳性率显著高于非缺血区。结论　急性心肌梗塞环境有利于骨髓基质细胞向心肌样细胞分化。; 潘国栋宋健刘维新; 关键词：骨髓基质细胞 MSC 心肌样细胞分化心肌

老年骨髓基质细胞移植治疗急性心肌梗死实验研究被引量：4: 2004年; 目的 :观察老年大鼠骨髓基质细胞 (MSC)能否在急性心肌梗死环境中存活、增殖和向心肌样细胞分化。方法 :选用老年近交系Wistar大鼠 ,取供体鼠MSC ,体外扩增 ,DAPI荧光标记。受体鼠经左冠状动脉结扎建立急性心肌梗死模型。 1周后将标记的MSC用直接注射方式移植到梗死灶中 ,移植后 3、7、14d取材 ,观察梗死灶中MSC分布、扩散及心肌特异性蛋白T(TnT)的表达。结果 :在不同移植时间梗死灶中都发现DAPI阳性的细胞 ,且细胞计数随移植时间延长而增多。部分细胞表达TnT ,其中少数细胞出现心肌样横纹。结论 :老年大鼠MSC可在急性心肌梗死环境中存活、增殖 ,有向心肌样细胞分化的能力。; 潘国栋王凤婕吴艳曾敬宋健; 关键词：骨髓基质细胞细胞移植老年大鼠细胞分化 MSC

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湖北省自然科学基金(2002AB00150)