国家自然科学基金(81070971)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：屠冠军陈毅刘丹平尹西盟周毅更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院辽宁医学院附属第一医院沈阳医学院沈洲医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 1个多发性椎间盘退行性变疾病家系Aggrecan基因串联重复多态性的分析
- 2012年
- 目的分析1个多发性椎间盘退行性变疾病(DDD)家系的聚合蛋白聚糖(Aggrecan)基因串联重复多态性(VNTR)。方法应用PCR技术检测家系成员血液中Aggrecan VNTR的分布情况。结果被检测的家系成员中未发现超过25次重复的等位基因者,家系患DDD成员Aggrecan基因VNTR分布:均为杂合子,且有1个等位基因≤20个重复序列。结论本家系中遗传因素是DDD的主要诱发因素,且可能与相对较小重复序列Aggrecan VNTR有关。
- 丛琳屠剑桥李雨辰屠冠军
- 关键词：椎间盘退行性变病家系N基因多发性AGGRECANVNTR
- PTEN基因沉默对BMSC氧糖剥夺模型的保护作用及其对Bcl-2凋亡通路的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究RNA干扰沉默第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)基因对骨髓间充质干细胞(BMSC)氧糖剥夺模型的保护作用,并探讨其对Bcl-2敏感的凋亡通路的影响,分析其保护作用的机制。方法体外分离培养BMSC并鉴定,通过脂质体法转染PTEN基因特异的siRNA沉默PTEN基因;RT-PCR检测PTEN基因的表达;制备体外氧糖剥夺模型观察PTEN基因的沉默对细胞的保护作用。Western blot检测Bcl-2蛋白表达的变化。结果成功培养BMSC并鉴定。RT-PCR检测结果显示siRNA成功干扰了PTEN基因的表达,流式细胞仪检测结果显示PTEN基因沉默后的细胞对氧糖剥夺模型有较强的耐受能力,Western blot检测结果显示Bcl-2蛋白明显增多。结论 PTEN基因的沉默使BMSC更能耐受氧糖剥夺的环境,增强了细胞的存活能力,其机制可能是通过Bcl-2敏感的凋亡通路抑制细胞凋亡。
- 陈毅尹西盟董宝铁范仲凯刘丹平屠冠军
- 关键词：PTEN基因BCL-2蛋白
- 基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因重组腺病毒载体的构建被引量：7
- 2012年
- 目的为探讨基因治疗逆转或延缓椎间盘退变的可行性,构建及制备人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)cDNA重组腺病毒载体。方法以含TIMP1 cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法扩增TIMP1cDNA片段,将TIMP1 cDNA全长定向克隆到Ad5MaxTM腺病毒系统的穿梭质粒pDC316上,构建pDC316-TIMP1穿梭质粒;使用Ad5MaxTM腺病毒包装系统,脂质体介导的穿梭质粒及骨架质粒pBHGlox-E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组构建含TIMP1 cDNA的重组腺病毒Ad5-TIMP1,通过PCR方法鉴定重组腺病毒Ad5-TIMP1的正确性。通过阴离子柱层析方法纯化重组腺病毒Ad5-TIMP1并测定重组腺病毒感染滴度。结果经PCR及酶切方法证实pDC316-TIMP1穿梭质粒中存在630 bp大小左右的插入片段,与目的基因TIMP1的cDNA大小一致;经PCR鉴定证实TIMP1 cDNA重组腺病毒载体Ad5-TIMP1构建成功,病毒感染性滴度为1×1010IU/mL。结论成功构建TIMP1 cDNA重组腺病毒载体,为应用基因治疗方法逆转或延缓椎间盘退变的研究奠定实验基础。
- 周毅屠冠军
- 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制剂1腺病毒载体基因转染椎间盘
- PTEN基因沉默对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
- 2015年
- 背景:脊髓损伤后脊髓自身的修复和再生能力有限,细胞移植治疗脊髓损伤具有很强的临床应用价值和前景。目的:探讨PTEN基因沉默对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响,以期为组织工程提供更优良的种子细胞。方法:采用脂质体法转染PTEN基因特异的si RNA沉默PTEN基因,RT-PCR检测PTEN基因的表达,通过细胞生长曲线、细胞周期、Transwell实验观察PTEN基因修饰后细胞生物学特性的变化。结果与结论:PTEN基因在骨髓间充质干细胞中高表达并且siR NA成功干扰了PTEN基因的表达,PTEN基因沉默后的细胞具有更强的存活、增殖、迁移能力,更适合作为组织工程的种子细胞。
- 陈毅陆晓东刘丹平屠冠军
- 关键词：骨髓间质干细胞PTEN磷酸水解酶干细胞骨髓干细胞骨髓间充质干细胞PTEN基因
- 转染血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞与牛松质骨支架复合组织工程骨的血管形成被引量：2
- 2011年
- 背景:小块组织工程骨植入动物体内后,早期依靠组织液的渗透可获得营养,但大块组织工程骨的营养仅靠组织液的渗透是远远不够的,必须通过血管再生来获得。目的:观察转染血管内皮细胞生长因子表达载体骨髓间充质干细胞复合组织工程骨植入动物体内后的血管形成能力。方法:制作日本大耳白兔双侧尺骨中段骨缺损模型,左侧尺骨缺损植入转染血管内皮细胞生长因子表达载体的自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为实验组,右侧尺骨缺损植入自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为对照组。术后12周行X射线摄片观察、大体标本观察、苏木精-伊红染色和Masson染色组织切片观察、MiFas图像分析系统定量分析。结果与结论:实验组与对照组尺骨缺损处均有连续骨痂形成;组织切片经苏木精-伊红染色、Masson三色法染色及MiFas图像分析系统定量分析可见实验组和对照组均有大量的新生骨,但实验组新生血管明显多于对照组(P<0.01),且血管较粗大,而且与新生骨接近。说明将转染血管内皮细胞生长因子表达载体的骨髓间充质干细胞复合在组织工程骨上植入动物体内可明显促进新生血管的形成。
- 陈毅尹西盟韩亚新王岩峰刘丹平屠冠军
- 关键词：骨髓间充质干细胞血管内皮细胞生长因子组织工程骨血管生成
