广东省科技计划工业攻关项目(2006B35901003)
- 作品数：7 被引量：48H指数：4
- 相关作者：何援利付霞霏彭冬先杨芳刘木彪更多>>
- 相关机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响被引量：10
- 2008年
- 目的研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5mg.L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测bcl-2和bax基因蛋白的表达。结果CDDP浓度≥1mg.L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5mg.L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态。FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义。结论CD-DP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的。
- 张春燕何援利
- 关键词：顺铂卵巢黄素化颗粒细胞凋亡BCL-2BAX
- 大鼠间充质干细胞的体外分离培养及CFSE标记被引量：9
- 2007年
- 目的探讨体外分离、培养及荧光染料CFSE标记大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法。方法Wistar大鼠10只。用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定。荧光染料CFSE标记MSCs,荧光显微镜检测标记率,CCK-8法检测标记细胞的增殖能力。结果原代MSCs72h贴壁,呈梭形,集落样生长;传代后,细胞变为形态均一,排列有序的成纤维细胞样。CFSE标记当天,荧光显微镜下大鼠MSCs呈明亮的绿色荧光,标记率达100%,随着培养时间延长,荧光强度逐渐减弱,标记率随之下降,标记4周后,标记率下降至78%;标记细胞的增殖能力与未标记细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;CFSE短期标记MSCs效率很高,且标记细胞的增殖能力不受影响,但荧光强度及标记率随着时间延长而下降。
- 付霞霏何援利
- 关键词：干细胞生物学标记
- 避孕药对化疗损伤大鼠卵巢功能的保护作用被引量：4
- 2008年
- 目的:研究在化疗期间应用避孕药能否对大鼠卵巢功能起到保护作用。方法:40只雌性Wistar大鼠随机分为4组,即对照组、环磷酰胺(CTX)组、避孕药(CA)组、联合治疗组。给药后采用放射免疫法比较各组大鼠雌二醇和卵泡刺激素(FSH)浓度变化,并比较各组大鼠卵巢重量、卵泡数量的变化。结果:CTX组大鼠血清雌二醇浓度为(25.84±5.36)pg/mL,低于联合治疗组的(40.02±2.94)pg/mL,FSH的浓度为(11.02±0.93)mIU/mL,高于联合治疗组的(3.62±0.30)mIU/mL,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);CTX组大鼠卵泡总数和卵巢重量分别为(431±32)个和(34.12±3.43)mg,明显低于联合治疗组的(983±75)个和(41.33±2.81)mg,两组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:避孕药能够在化疗期间对大鼠卵巢功能起到保护作用。
- 王敏何援利张振
- 关键词：避孕药卵巢功能环磷酰胺
- BrdU,CFSE和GFP标记大鼠间充质干细胞的比较被引量：17
- 2008年
- 目的:研究BrdU,CFSE和GFP作为大鼠间充质干细胞标记物的可行性.方法:分别用上述三种标记物标记大鼠间充质干细胞,检测即时、15和30d的标记率,通过检测细胞周期、凋亡率和描绘生长曲线,来明确标记物对体外培养大鼠间充质干细胞生长特性的影响;通过流式细胞仪检测标记物对细胞表面标志(CD29,CD34,CD44,CD45)表达的影响.结果:BrdU,CFSE,GFP的即时标记率为77.0%,99.4%,89.7%,1mo后分别下降至51.9%,77.5%,82.9%.三者对体外培养的大鼠间充质干细胞的生长特性和表面标志的表达均无明显影响.结论:GFP,BrdU和CFSE均可以作为大鼠间充质干细胞的标记物.
- 付霞霏何援利杨芳彭冬先刘木彪
- 关键词：绿色荧光蛋白溴脱氧尿嘧啶核苷间充质干细胞
- 绿色荧光蛋白标记大鼠间充质干细胞的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法。方法用密度梯度离心法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,以携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体Ad-GFP转染MSCs,流式细胞仪检测即时、15 d和30 d的标记率;通过流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率,CCK-8法检测增殖能力,明确标记后细胞的生长特性;通过流式细胞仪检测标记后细胞表面标志(CD29,CD34,CD44和CD45)表达的变化。结果Ad-GFP对大鼠MSCs的即时标记率高达89.71%,15 d和30 d的标记率分别为:85.10%、82.92%。标记后细胞周期的分布、凋亡率、增殖能力与未标记细胞相比,差异无显著性(P>0.05)。标记后细胞表面标志的表达亦不受影响。结论重组腺病毒载体Ad-GFP能高效标记MSCs,且标记后细胞的增殖能力不受影响,表面标志的表达不发生改变。
- 付霞霏何援利
- 关键词：干细胞绿色荧光蛋白重组腺病毒
- 体外培养、冻存及复苏对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：4
- 2008年
- 用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。第3代MSCs在10%二甲亚砜(DMSO)保护下放入液氮中(-196℃)冻存,6个月后复苏,检测其存活率,观察形态及生长情况,细胞计数试剂-8(CCK-8)检测MSCs的增殖能力、流式细胞仪检测细胞表面标记(CD29、CD34、CD44和CD45)的表达及细胞周期特性。结果:原代MSCs 72 h贴壁,呈梭形,呈集落样生长;传代后,细胞变为形态均一排列有序的成纤维细胞样。冻存MSCs复苏后存活率为86.5%。冻存MSCs与未冻存MSCs比较,增殖能力、细胞表面标记及细胞周期无明显变化。认为密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs,采用液氮冻存大鼠MSCs不改变其增殖能力及生物学特性。
- 付霞霏何援利
- 关键词：干细胞细胞培养冷冻保存
- 重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的体外研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法。方法用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体Ad-GFP转染,荧光显微镜检测其转染效率,CCK-8法检测转染细胞的增殖能力。结果Ad-GFP对大鼠MSCs的感染率高达90.0%,感染1月后仍有稳定表达;转染细胞的增殖能力与未转染细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组腺病毒载体Ad-GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖能力不受影响,可作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法。
- 付霞霏何援利
- 关键词：干细胞绿色荧光蛋白重组腺病毒转染
