国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-10-P12)
- 作品数：35 被引量：196H指数：8
- 相关作者：朱杰华杨志辉赵冬梅徐进张岱更多>>
- 相关机构：河北农业大学中国农业大学贵州大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立被引量：2
- 2014年
- 为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系，以菌株 HK0919为材料，从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果，建立的转化体系条件为：以1．0μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选，采用玻璃纸作为共培养介质，AS浓度为200μmol/L，培养6 d，温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50～60个转化子。随机选取10个转化子，利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增，转化子均能扩增出800 bp左右的预期条带；同时，利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行 PCR扩增，排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性；转化子继代培养5代后，仍能在含潮霉素 B的黑麦培养基上生长。说明外源T DNA已成功整合到致病疫霉基因组中，并能稳定遗传。
- 赵冬梅何佳昱杨志辉朱杰华徐进
- 关键词：致病疫霉
- 内蒙古和河北致病疫霉温度适应性的研究
- 由致病疫霉Phytophthora infestans(Mont.)de Bary引起的马铃薯晚疫病,对马铃薯产业造成最具毁灭性的灾害。为了研究致病疫霉菌株在不同温度下的适应性,本文测定了采集自内蒙古和河北各8株致病疫霉...
- 胡珍珠杨志辉赵冬梅朱杰华
- 关键词：致病疫霉温度产孢
- 文献传递
- 马铃薯疮痂病菌拮抗菌ZWQ-1的鉴定及防效测定被引量：6
- 2012年
- 为探明马铃薯疮痂病菌拮抗菌ZWQ-1的生物学分类地位和防病效果,结合其生物学特性和16SrDNA序列特征对菌株ZWQ-1进行了鉴定,利用纸碟法和温室盆栽接种试验测定了该菌的抑菌活性及其对马铃薯疮痂病的防效。结果表明,该菌的形态和生理生化特征与枯草芽孢杆菌一致,其16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌菌株JQ398853、JN399219的同源性高达99%,因此,将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。盆栽接种防病测试结果表明,拮抗菌ZWQ-1可显著降低马铃薯疮痂病的发病程度,对病原菌CPS-1、SHXHZ-3、CPS-3、CPS-2和NM-10的防治效果较为明显,防效分别为79.09%、78.85%、77.44%、54.68%和49.68%,说明拮抗菌株ZWQ-1对马铃薯疮痂病具有较好的防治作用。此外,该菌对其他18种植物病原菌也有一定的抑菌作用,说明菌株ZWQ-1是一株较具开发潜力的生防菌株。
- 李勇郭凤柳赵伟全刘大群
- 关键词：马铃薯疮痂病拮抗菌16SRDNA序列防效
- 利用PCR技术测定东北、华北致病疫霉线粒体单倍型
- 2015年
- 为了明确东北、华北地区致病疫霉群体的线粒体单倍型组成与多样性,采用PCR的方法对2013年采自两地区5省(区)的163株致病疫霉菌株的线粒体单倍型进行了测定和分析。由高变区HVRi所区分的Ⅰ型菌株所占比例为38.65%,Ⅱ型菌株占61.35%;高变区HVRii所区分的R1型、R2型和R3型菌株所占比例分别为1.85%、4.90%和93.25%。东北和华北两地区的优势线粒体单倍型均为ⅠR3型与ⅡR3型,其在群体中的比例分别为36.81%和56.44%。不同省(区)间致病疫霉线粒体单倍型组成存在一定差异,ⅡR2型菌株仅在河北和辽宁省有少量分布,所占比例仅为4.91%;ⅠR1型菌株仅存在于黑龙江,所占比例仅为1.84%。东北和华北地区致病疫霉线粒体单倍型整体表现一致,不同省(区)之间多态性不同,说明致病疫霉的线粒体单倍型与地理来源之间有很大关系。
- 贾京珠杨志辉朱杰华赵冬梅蒋继志
- 关键词：致病疫霉多态性PCR
- 致病疫霉NLP家族基因PITG_10839的克隆和功能分析被引量：1
- 2014年
- 【目的】分析致病疫霉(Phytophthora infestans)NLP(Necrosis-and ethylene-inducing like proteins)家族基因PITG_10839的致坏死功能及所编码蛋白的活性位点对其功能的影响。【方法】以PITG_10839作为研究对象,选inf1作为正对照,以致病疫霉菌株HK09-19的总RNA为模板,通过RT-PCR获得基因的cDNA全长序列。将所得cDNA与表达载体pBI121连接,构建所选基因的重组表达载体,并采用冻融法将其转入农杆菌LBA4404中。利用农杆菌介导的瞬时表达体系在本生烟(Nicotiana benthamiana)中对PITG_10839的表达和功能进行分析。利用over-lap PCR方法定点突变基因PITG_10839的活性位点,同时构建活性位点突变后的重组表达质粒,并通过农杆菌注射接种本生烟来研究各活性位点在基因坏死功能中所起的作用。通过荧光定量PCR分析致病疫霉游动孢子侵染马铃薯叶片后不同时期PITG_10839的表达模式。【结果】获得了PITG_10839和inf1的全长cDNA,分别为405及357 nt。同时,成功构建了PITG_10839和inf1的真核表达载体pBI121-10839和pBI121-inf1,并成功转入农杆菌。将含有重组质粒pBI121-10839的农杆菌注射接种本生烟,5 d后接种叶片开始逐渐黄化,7 d后叶片出现典型的皱缩坏死症状。然而含有对照重组质粒pBI121-inf1的农杆菌在注射接种3 d后,本生烟叶片便开始出现萎蔫,5 d时则出现坏死症状,7 d时坏死症状严重。进一步对PITG_10839编码蛋白的活性位点进行突变,发现D9A、E22A和D20A 3个氨基酸位点的突变使基因PITG_10839所编码蛋白的致坏死功能丧失,叶片仅出现轻微的黄化现象,然而H17A位点氨基酸的突变对该基因的致坏死功能没有影响,注射接种7 d后,仍然可以使本生烟叶片出现皱缩坏死的症状。同时,荧光定量PCR表明,致病疫霉游动孢子接种后不同侵染阶段PITG_10839的表达呈现出了不同水平的增加。接种后12 h至36 h,表达量变化水平稳定,增加了20倍左右;48 h�
- 赵冬梅杨志辉徐进朱杰华朱丽丹
- 关键词：致病疫霉功能分析
- 马铃薯疮痂病拮抗菌株B1的鉴定及防效测定被引量：10
- 2013年
- 对1株马铃薯疮痂病菌拮抗菌株B1进行了鉴定和盆栽防效试验。在采用皿内抑菌试验、管碟法确定了B1菌株对马铃薯疮痂病的抑制作用后,通过表型特征观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析,对菌株进行了鉴定。结果表明,该菌的形态和生理生化特征与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)一致,其16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌的同源性高达99%,因此将其鉴定为枯草芽孢杆菌。菌株B1的培养液经80%硫酸铵提取后,所得物质对部分马铃薯疮痂病菌也具有一定的拮抗作用。温室盆栽试验结果表明该菌株对马铃薯疮痂病防效较好。
- 郭凤柳张海颖李勇于秀梅赵伟全刘大群
- 关键词：马铃薯疮痂病拮抗菌株枯草芽孢杆菌
- 马铃薯早疫病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7
- 2016年
- 马铃薯早疫病主要是由茄链格孢(Alternaria solani)引起的一种常见真菌性病害。本试验依据GenBank中链格孢属的ITS序列(Internal Transcribed Spacer),设计并合成了1对特异性引物ptAsQ-F(5′-TTTGCAATGGCAATCAGCG-3′)/ptAs-R(5′-CCCGCAAG-GGGAGACAAA-3′),以重组质粒为标准品构建实时荧光定量标准曲线。结果表明,建立的实时荧光定量PCR检测方法,引物特异性好,灵敏度高。重复性试验表明,组内和组间变异系数均小于2.51%,显示该方法具有较好的检测稳定性。利用该定量检测技术,可以检测出潜伏侵染于叶片和土壤中的早疫病菌。该方法为马铃薯早疫病田间发病的动态监测以及指导高效防控措施提供了技术支持。
- 王倩张岱赵冬梅杨志辉朱杰华张维宏杨军玉
- 关键词：马铃薯茄链格孢实时荧光定量PCR动态监测
- 温度对河北和内蒙古地区不同致病疫霉致病力的影响
- 由致病疫霉Phytophthora infestans (Mont.) de Bary引起的马铃薯晚疫病,对马铃薯产业造成最具毁灭性的灾害.为了研究温度对致病疫霉菌株致病力的影响,本文测定了采集自河北和内蒙古各8株致病疫...
- 胡珍珠杨志辉张岱朱杰华
- 关键词：致病疫霉温度致病力
- 2012年河北省围场县马铃薯晚疫病菌表型及基因型分析被引量：2
- 2015年
- 对2012年采自河北省围场县永和栈、银窝沟、克勒沟、小苇子沟、扣花营5个地点的60株晚疫病菌测定了其交配型、甲霜灵抗性、mt DNA单倍型、SSR基因型,结果表明,60株晚疫病菌全部为A1交配型,甲霜灵高抗菌株58株,占96.67%;敏感菌株2株,占3.33%。采用以PCR方法为基础的mt DNA单倍型检测新方法共鉴定出ⅠR3、ⅡR3、ⅡR23种mt DNA单倍型。其中,ⅠR3单倍型为该群体的优势单倍型,占80.0%;ⅡR3、ⅡR2分别占18.3%、1.7%。同时,还利用具有多态性的8对引物测定了该群体的SSR基因型,共检测到18个等位基因、5种基因型。SSR聚类结果表明,SSR基因型与菌株对甲霜灵抗性有一定相关性,而与交配型和地理来源无相关性。围场县晚疫病菌群体结构比较单一,遗传多样性程度较低。
- 何佳昱丁明亚杨志辉朱杰华
- 关键词：致病疫霉甲霜灵抗性
- 河北省北部马铃薯早疫病菌对嘧菌酯敏感性的测定与分析被引量：4
- 2014年
- 选取2009-2011年采集自河北省张家口、承德两地的74株马铃薯早疫病菌（Alternaria solani）,用抑制分生孢子萌发的方法,进行嘧菌酯敏感性测定,旨在为生产上科学使用嘧菌酯提供理论依据。结果表明,嘧菌酯的EC50介于0.01-0.13μg/m L之间,平均EC50为0.04μg/m L。处于敏感基线的菌株（EC500.01-0.07μg/m L）占总数的87.84%。2009-2011年所采集的早疫病菌对嘧菌酯敏感性随年度略微有所下降,不同地区采集的菌株对嘧菌酯的敏感性也有差异。因此,河北省北部地区马铃薯早疫病的防控仍可以使用嘧菌酯,但不可盲目,并实时检测菌株的抗药性。
- 周园杨志辉徐进刘丽丽朱杰华
- 关键词：嘧菌酯敏感基线
