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多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定被引量：6: 2008年; 为了克隆和转化多枝赖草(Leymus multicaulis)的耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因,利用脉冲电泳分离纯化2Mb以上核DNA,酶切后回收10～200kb DNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B,在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆.用两种TAC载体pYLTAC17和pYLTAC747H/sacB分别构建了文库Ⅰ和Ⅱ,约16.5和23.6万个克隆,估计覆盖3～5倍多枝赖草基因组大小.文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中,每孔1.2mL菌液中含300～600个克隆,40多万个克隆转存到3块384孔板,留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液,可用于后续文库鉴定.此外,从文库Ⅰ和Ⅱ分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中.17块384孔板都用GeneTACTMG3复制了2份,点高密度杂交膜6张,以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5′RACE-GR和3'RACE-GR为探针初步筛选到19个阳性克隆.两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础。; 徐粤宇周玉雷宋琳琳张艳赵茂林; 关键词：基因组文库

多枝赖草高分子量核DNA的有效制备被引量：4: 2007年; 以多枝赖草Leymus multicaulis黄化苗幼嫩叶片为材料,在液氮中研磨成粉末,加入冰冷的细胞核抽提缓冲液,经一系列钢制细胞筛过滤,离心分离细胞核,相差显微镜镜检后,用低熔点琼脂糖包埋,蛋白酶K原位裂解,经脉冲场电泳分离,用1%低熔点琼脂糖回收获得了较纯净的分子量大于2 Mb的核DNA,Southern杂交显示没有叶绿体和线粒体DNA的污染。利用该方法制备的高分子量核DNA,可用于后续可转化人工染色体(TAC)文库的构建和基因组分析。; 周玉雷徐粤宇赵茂林曹致中王志平; 关键词：多枝赖草脉冲场电泳

可转化人工染色体文库的构建与鉴定被引量：1: 2006年; 随着人类和植物基因组计划的实施,能容纳大片段的人工染色体载体发展迅速。而用YAC、BAC和PAC等基因组文库进行目的基因的筛选,在获得候选克隆后,通常要进行亚克隆,然后对每个亚克隆逐一进行基因功能互补试验,不仅工作量大,而且有遗漏目的基因的危险。TAC载体含P1质粒和Ri质粒的复制子,可直接转化植物,大大加速了工作进程。概括性的叙述了TAC载体的发展,TAC文库构建的程序及文库鉴定的问题。; 宋琳琳赵茂林; 关键词：可转化人工染色体文库构建基因

多枝赖草的组织培养: 2005年; 以多枝赖草种子为材料,在MS+3mg/L2,4-D+0.5mg/L激动素+3%蔗糖+0.5%琼脂培养基上暗培养,产生愈伤组织。愈伤组织经多次继代培养后仍可保持分化潜力。在1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LIBA+3%蔗糖+0.5%琼脂培养基上光照培养后分化出丛生状绿芽,并大量生根,形成再生植株。; 葛荣朝胡得全张前林赵宝存赵茂林; 关键词：多枝赖草种胚

多枝赖草谷胱甘肽还原酶cDNA片段的克隆与分析被引量：1: 2005年; 从盐胁迫处理的多枝赖草(Leymusmulticaulis)新鲜叶片中提取分离出RNA,然后根据报道的多种植物谷胱甘肽还原酶氨基酸序列上两个保守区设计简并引物。RT-PCR获得了1条大小约400bp的条带,回收该条带并进行TA克隆,蓝白斑筛选,得到阳性克隆。经过质粒大小比较和PCR验证,进行序列测定和分析,发现该序列属于GR基因片段,其Genbank注册号为AY781786,编码的氨基酸序列与Oryzasativa、Zeamays、Arabidopsisthaliana和Nicotianatabacum的GR相应区段的氨基酸序列一致性分别为91%、89%、86%和83%。蛋白质序列分析发现该序列含有一个吡啶二硫酸核苷酸氧化还原酶(pyridinenucleotide-disulphideoxidoreductase)保守结构域。进化树分析表明,该多枝赖草cDNA片段编码的氨基酸序列在进化上与水稻和玉米较近。; 史仁玖赵茂林杨清; 关键词：多枝赖草谷胱甘肽还原酶

载有抗逆性基因的多枝赖草染色体连锁群的特定TAC克隆的鉴定被引量：1: 2008年; 分别以耐黄矮病耐蚜虫小赖麦附加系Line24、耐盐耐旱小赖麦附加系Line15、耐盐小赖麦易位附加系Line14为材料,以它们各自所附加的含有相应抗逆基因的多枝赖草染色体（简称为抗逆染色体）的6个特定SSR分子标记为探针,通过两轮菌落杂交法筛选多枝赖草基因组可转化人工染色体（TAC）文库,最终得到经过验证的阳性克隆77个,它们分别对应于3个（易位）附加系中所附加抗逆染色体（臂）连锁群的6个特定SSR标记,每一标记所对应的TAC克隆数目变化在5-19个,平均约13个。进一步从来自Line24的抗逆染色体连锁群的同一个探针筛选到的阳性克隆中抽查2个TAC克隆15J18和09I02,通过双色荧光原位杂交技术（Double-color FISH）进行初步定位,直观地证明了文库筛选结果的准确性。为各条抗逆染色体的识别鉴定和相关抗逆基因的精细定位奠定了基础。; 张艳赵茂林孙淼徐粤宇; 关键词：多枝赖草抗逆性双色荧光原位杂交

多枝赖草Glutathione Reductase基因克隆及胁迫表达分析被引量：6: 2008年; 为了获得完整的谷胱甘肽还原酶基因序列,根据已克隆到的谷胱甘肽还原酶cDNA片段设计引物,利用RACE扩增获得了基因全长序列,应用Southern印迹杂交法分析基因存在状态,Northern印迹杂交法研究基因表达情况.结果表明,该基因全长1580 bp,含一个1 140 bp的开放阅读框架,编码380个氨基酸,与其它植物谷胱甘肽还原酶氨基酸序列的同源性在77%-92%之间;Southern杂交表明该基因有一个拷贝;Northern杂交表明在逆境胁迫下GR基因表达加强.; 史仁玖郝岗平赵茂林杨清; 关键词：多枝赖草谷胱甘肽还原酶盐胁迫

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国家自然科学基金(30370905)