上海市科学技术委员会资助项目(034119939)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：顾鹏飞王爱华于嘉屏张建张建更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海第二医科大学附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义被引量：4
- 2004年
- 目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚(uMtCK)的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达。方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞(HeLa细胞)中成功扩增出1062bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗。免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达。结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达。免疫家兔制备的抗uMtCK多抗经Western免疫印迹分析适合作uMtCK的进一步分析。免疫组化检测临床病理标本结果显示,59例胃及直结肠肿瘤标本uMtCK的阳性率为76.5％。结论:成功克隆了人uMtCK的编码基因,并将其在大肠杆菌中成功表达;制备了抗uMtCK多抗,免疫组化检测临床病理标本的结果提示uMtCK有助于胃肠肿瘤的诊断。
- 张建王爱华顾鹏飞于嘉屏
- 关键词：线粒体肌酸激酶基因表达胃肠肿瘤
- 人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备被引量：1
- 2004年
- 目的 获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型 (uMtCK)的全长基因 ,在大肠埃希菌中表达 ,研制抗uMtCK多克隆抗体。方法 采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞 (Hela细胞 )中成功扩增出 10 6 2bp的uMtCK的基因片段 ,插入到质粒pMD18 T中 ,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列 ,再插入到质粒pQE30 ,转化大肠埃希菌 ,诱导重组质粒pQE30 uMtCK表达酶融合蛋白。经亲和层析纯化 ,并进行SDS PAGE、westernblot鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗。结果 RT PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因 ;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达 ,表达量约 17%。重组uMtCK具有CK样催化活性 ,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性。经免疫印迹分析 ,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用。结论 人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达 ,制备了针对uMtCK的抗体。
- 张建王爱华顾鹏飞于嘉屏
- 关键词：CK大肠埃希菌肌酸激酶线粒体抗体制备
- 人心肌线粒体肌酸激酶的提纯及抗体制备被引量：1
- 2004年
- 目的 从人心肌中分离纯化肌小节型线粒体肌酸激酶 (sMtCK) ,制备抗血清 ,从抗血清中制备对sMtCK有特异免疫反应的抗体 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,测定血清sMtCK。方法 采用超低温高速离心、硫酸铵分级提取、SepharoseCL6B层析等技术分离纯化sMtCK ,免疫新西兰大白兔。应用自制抗sMtCK建立ELISA检测健康体检者、心肌炎及急性心肌梗死 (AMI)患者血清sMtCK。结果 经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot鉴定 ,纯化的sMtCK为单一蛋白质条带。制备的抗sMtCK多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA中的抗体效价分别为 1∶32和 1∶80 0。自制抗体建立的ELISA检测心肌炎和AMI患者的血清sMtCK阳性率分别为 5 1.6 % (16 / 31)和 5 4 .1% (2 0 / 37) ,与健康对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 经离心、提取、纯化所得的sMtCK是免疫纯。建立的ELISA检测血清sMtCK有助于心肌炎和AMI的诊断。
- 王爱华张建于嘉屏顾鹏飞竺蓓
- 关键词：抗体酶联免疫吸附试验
