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过表达TRPV6基因对小鼠破骨细胞钙转运基因与凋亡相关基因表达的影响被引量：1: 2018年; 破骨细胞是体内唯一的骨吸收细胞,对钙离子跨细胞膜转运及维持正常血钙水平有非常重要的作用。瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6)是TRP家族中的一员,对钙离子有高度选择性,且是钙离子跨细胞转运的限速门控通道。本试验旨在研究TRPV6过表达对破骨细胞钙转运相关基因及细胞凋亡相关基因表达的影响。用TRPV6过表达慢病毒载体(LV-TRPV6)转染培养7 d的破骨细胞构建TRPV6过表达破骨细胞模型,以阐释小鼠破骨细胞中TRPV6与钙离子转运和细胞凋亡的关系。将破骨细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组和LV-TRPV6组。结果显示:与空白对照组比较,破骨细胞TRPV6过表达后钙离子转运相关基因(calbindin-D28K,NCX1) mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05);破骨细胞TRPV6过表达后细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(Fas和FasL除外)(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,LV-TRPV6组凋亡率显著下降6.33%±0.235%(P<0.05)。研究表明,破骨细胞过表达TRPV6基因导致钙转运相关基因表达增加并抑制破骨细胞凋亡。; 崔军邓益锋孟范勇周振雷侯加法; 关键词：过表达破骨细胞细胞凋亡钙离子转运

荧光Real-time PCR鉴定鸡胸骨总RNA质量被引量：3: 2012年; 为了更准确地鉴定提取鸡骨总RNA的质量,试验分别用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳和荧光Real-time PCR检测评价3种不同的方法提取成年鸡胸骨总RNA的质量。结果显示,荧光Real-time PCR可更好地鉴定提取的骨总RNA的质量。用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳能粗略检测RNA的纯度和完整性,但不能反映提取过程中是否引起基因不均一的减少,所检测的纯度也不能精确反映RNA的反转录效率。; 江莎孟凡周振雷邓益锋侯加法; 关键词：胸骨 RNA

蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备: 2012年; 为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。; 郑燕玲杨俊花张建鹏江莎侯加法; 关键词：原核表达多克隆抗体

体内阻断TRPV6对钙转运基因及骨代谢的影响: 瞬时受体电位（TRP）阳离子通道作为细胞传感器让人和动物感应到化学、机械力、光以及温度的变化。他们对于离子体内平衡和新陈代谢同样重要。TRP和TRP基因的突变与人和动物疾病密切相关。TRP家族包括6个亚族:TRPA、TR...; 孟范勇; 关键词：蛋鸡钙转运骨代谢; 文献传递

过表达TRPV6基因对小鼠破骨细胞钙转运及凋亡相关基因表达的影响: 钙和体内骨稳态息息相关。骨细胞胞内的Ca2+是一种重要的第二信使。胞内Ca2+水平的细微变化可影响正常的骨稳态，胞内钙离子浓度的改变会导致钙离子参与细胞凋亡。TRPV6是TRP家族中的一员，对钙离子有高度选择性，由细胞内...; 崔军; 关键词：破骨细胞钙转运细胞凋亡

蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备: 为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据基因序列,设计一对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1801至2176位置的375 bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将...; 邓益锋郑燕玲杨俊花周振雷夏继飞侯加法; 关键词：多克隆抗体原核表达纯化蛋鸡; 文献传递

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国家自然科学基金(30972234)