辽宁省自然科学基金(20102080)
- 作品数：10 被引量：49H指数：5
- 相关作者：曹际娟许龙岩袁慕云曹冬梅荣策更多>>
- 相关机构：辽宁出入境检验检疫局广东出入境检验检疫局大连工业大学更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学理学更多>>
- 食品中副溶血性弧菌toxR和tdh基因双色荧光PCR检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 目的建立对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性检测toxR(跨膜转录激活蛋白)基因和tdh(热稳定性直接溶血素)毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman探针双色荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度试验;对副溶血性弧菌分离菌株实施检测,了解其tdh基因和tdh基因分布情况。结果结果表明,副溶血性弧菌标准菌株和3株从食物中毒患者中分离获得的分离株均出现toxR基因和tdh扩增曲线,而溶藻弧菌、单增李斯特菌等31株弧菌属其他菌株和肠杆菌科的菌株未见扩增曲线。从食品中分离的37株副溶血性弧菌分离株均未携带tdh毒力基因。副溶血性弧菌检测灵敏度可达到3.6×102cfu/mL。结论该方法可用于同时检测食品中副溶血性弧菌的特异性和毒力基因。
- 曹冬梅袁慕云许龙岩曹际娟
- 关键词：副溶血性弧菌
- 食品中肠道沙门菌焦磷酸测序方法检测被引量：4
- 2014年
- 沙门菌包括肠道沙门菌与邦戈尔沙门菌，前者血清型种类极为丰富，约有2600余种血清型，包扩肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌等若干种传播途径广泛、侵染宿主繁多、感染症状严重的强致病性血清型。肠道沙门菌（Salmonella enterica，SP）是引起食物中毒的主要病原菌。
- 卢熠川徐杨刘宇许龙岩曹际娟
- 关键词：焦磷酸测序PCR
- 焦磷酸测序检测食品中鼠伤寒沙门氏菌被引量：6
- 2013年
- 根据鼠伤寒沙门氏菌的特异序列,分别设计扩增引物和测序引物,建立焦磷酸测序检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。针对鼠伤寒沙门氏菌设计特异性扩增引物,对目标片段进行PCR扩增,然后制备单链模板,并利用测序引物进行焦磷酸测序。测序结果表明,6株不同来源的鼠伤寒沙门氏菌均可以扩增出碱基序列为TACAACCGGA GTGCACATTA ATCCCGCAGC的基因片段,而30株阴性对照菌株均未得到扩增。进行BLAST比对表明,该序列与GenBank中鼠伤寒沙门氏菌的碱基序列100%匹配。焦磷酸测序法是一种快速、准确的检测方法,可用于食品中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。
- 曹冬梅徐杨袁慕云刘宇曹际娟
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌焦磷酸测序
- 食品中伤寒沙门氏菌TaqMan探针实时PCR检测方法被引量：6
- 2014年
- 建立实时荧光PCR快速鉴定伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)的方法。根据GenBank公布的伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果表明,特异性引物和探针可从31株伤寒沙门氏菌菌株、27株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中鉴定出全部的31株伤寒沙门氏菌。以伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数为0.994,扩增效率为94.5%,最低检测浓度为4cfu/mL的添加浓度。实时荧光PCR检测与传统方法相比较,两者结果一致。该方法特异性好、灵敏度高,可以快速鉴定伤寒沙门氏菌。
- 曹冬梅袁慕云史媛媛刘洋许龙岩曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR伤寒沙门氏菌
- 建立Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法被引量：5
- 2012年
- 目的利用Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌。方法根据沙门氏菌属共有基因序列和肠炎沙门氏菌的特异序列分别设计2组引物及探针,运用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果采用沙门氏菌属探针可检测到25种不同血清型沙门氏菌(共49株),而11株阴性对照菌株未得到扩增;利用肠炎沙门氏菌探针可从25种不同血清型的沙门氏菌(共49株)和11株阴性对照菌株中特异性的检测出全部15株肠炎沙门氏菌;以肠炎沙门氏菌系列稀释度菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株的模板浓度与Ct值之间呈现良好线性关系,线性系数(R2)0.993,扩增效率87%,最低检测浓度260cfu/mL;分别接种肠炎沙门氏菌于四种样品进行模拟样品检测,实时荧光PCR检测结果与经典培养鉴定方法的检测结果相吻合。结论实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法特异性强、敏感度高,可应用于食品中肠炎沙门氏菌的检测。
- 荣策孙铭英那晗曹际娟
- 关键词：TAQMAN探针实时荧光PCR肠炎沙门氏菌沙门氏菌属
- 建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法被引量：5
- 2014年
- 建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.
- 刘冉赵玉琢孙铭英曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR鸡伤寒沙门氏菌
- PCR-焦磷酸测序法快速鉴定食品中肠炎沙门菌被引量：3
- 2015年
- 通过对肠炎沙门菌特异性基因片段的焦磷酸测序,达到快速鉴定肠炎沙门菌的目的。设计PCR扩增引物和焦磷酸测序引物,对PCR扩增产物进行焦磷酸测序,测得序列进行BLAST比对分析。通过对肠炎沙门菌特异性基因上的30个碱基片段进行测定,可准确鉴定16株肠炎沙门菌。所建立的方法可以从基因序列水平上准确鉴定肠炎沙门菌,具有快速、准确的优势。
- 曹冬梅倪长鹏刘宇卢熠川许龙岩曹际娟
- 关键词：肠炎沙门菌
- 沙门氏菌PFGE分型非计量多维尺度分析法的研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨沙门氏菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型非计量多维尺度分析法(NMDS)。方法从国内不同地区分离得到的24株沙门氏菌进行PFGE分型,然后以非计量多维尺度法对PFGE分型进行分析。结论将24株沙门氏菌显示在三维空间,从视觉上直接揭示了表型特征相近的不同国家和地区沙门氏菌之间的相关性,为PFGE谱图的分析提供了一种有用的工具。
- 曹际娟贾俊涛许龙岩赵丽青
- 关键词：沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型
- 实时荧光PCR检测食品中丙型副伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌被引量：17
- 2014年
- 建立实时荧光PCR检测丙型副伤寒沙门氏菌(S.Paratyphi C/Salmonella paratyphi C)和猪霍乱沙门氏菌(S.Choleraesuis/Salmonella Choleraesuis)的方法。根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门氏菌序列,分别设计引物和Taqman探针,使用168株不同血清型的沙门氏菌和21株变形杆菌等非沙门氏菌进行实时荧光PCR检测的特异性试验,可以实现特异性检测丙型副伤寒沙门氏菌,并且可以同时检测丙型副伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌。经模拟污染样品检测,灵敏度可达到2～5 cfu/mL的添加浓度。该方法可以快速检测食品中丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门氏菌。
- 郑秋月赵彤彤袁慕云许龙岩荣策曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR丙型副伤寒沙门菌猪霍乱沙门氏菌食品
- 实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌被引量：12
- 2012年
- 目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。
- 荣策赵彤彤许龙岩刘宇那晗曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR法鼠伤寒沙门氏菌TAQMAN探针沙门氏菌属
