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三种癌细胞株中Bloom综合征解旋酶(BLM)的表达水平高于正常细胞被引量：19: 2014年; 由于Bloom综合征解旋酶（Bloom’s syndrome helicase，BLM）基因缺陷引起的Bloom综合征（Bloom’s syndrome，BS）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，BS患者的临床特征表现为严重的生长迟缓、学习障碍、免疫缺陷等。BLM解旋酶在睾丸和胸腺中高表达，另一方面，BLM基因的突变和高表达与肿瘤发生相关，如结肠癌、肺癌、白血病等。本研究观察了A549人肺癌细胞、SGC7901人胃癌细胞、PC3人前列腺癌细胞与HL-7702[L-02]人正常肝细胞中，BLM解旋酶在mRNA水平及蛋白水平表达量的差异，为寻找新的特异分子治疗靶点提供依据。; 孟惠惠许厚强刘金河王时雄; 关键词：表达量

Mg^(2+)对Bloom综合症解旋酶与G4DNA结合的影响研究: 2012年; 利用荧光偏振技术检测了Mg2+对G4DNA、BLM-G4DNA复合物和BLM642-1290解旋酶与G4DNA结合的影响.结果表明,G4DNA荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而增加(P<0.01);BLM-G4DNA复合物的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加出现下降—升高—下降的变化趋势(P<0.01);G4DNA与BLM642-1290解旋酶结合的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而逐渐下降(P<0.01);分析不同Mg2+浓度下两种分子结合的Kd值,发现Mg2+浓度为3.0mmol/L时,BLM642-1290解旋酶与G4DNA最容易结合,表明适量Mg2+浓度会促进BLM642-1290与G4DNA的结合,但会引起两种分子结合的形状、流动性和电荷等性质的改变.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶对G4DNA的作用机理提供相关资料.; 骆衡蔡明娟陈祥丁玫李坤许厚强

溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响被引量：1: 2012年; 目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。; 许庆贺许厚强骆衡陈祥张金彪李坤; 关键词：溴化乙锭 DNA结合活性 ATPASE活性

人前列腺癌PC3细胞Bloom解旋酶基因干扰载体的构建被引量：4: 2015年; 通过RNAi技术干扰人前列腺癌PC3细胞Bloom(BLM)解旋酶基因的表达。实验前期根据BLM解旋酶基因序列设计并合成两对sh RNA,插入到CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs载体,构建针对BLM解旋酶基因的重组干扰载体CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs-BLM1、CMV-cop GFPT2A-Puro-H1-mcs-BLM2。经测序载体构建成功后,用脂质体将所构建的载体及阴性对照载体转染前列腺癌PC3细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测转染细胞的BLM解旋酶表达情况。检测结果显示,成功构建了BLM解旋酶RNAi真核表达载体;利用脂质体转染PC3细胞后,荧光定量PCR和Western blot鉴定结果表明,BLM解旋酶的表达水平显著降低,即Bloom RNAi真核表达载体在m RNA和蛋白质水平阻断了BLM解旋酶的表达。; 罗霂榃许厚强刘忠伟段志强赵佳福吴萍陈福; 关键词：前列腺癌PC3细胞

荧光偏振技术研究Bloom解旋酶催化核心与双链DNA的相互作用被引量：2: 2013年; Bloom综合症(BLM)解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用.BLM解旋酶的突变可导致Bloom综合症,患者遗传不稳定易患多种类型癌症.本研究运用荧光偏振技术研究BLM解旋酶催化核心(BLM642～1290)与双链DNA(dsDNA)的相互作用,分析其相关特征参数,了解BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链特性.结果表明:BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链与dsDNA 3′端的单链DNA(ssDNA)长度有关;解旋酶优先结合于dsDNA底物的ssDNA末端,且每分子解旋酶可结合9.6 nt的ssDNA;dsDNA 3′端ssDNA的长度为9.6 nt时,解旋酶的解链效率达到最大且不再随其长度而变化.另外,BLM642～1290解旋酶也能够结合和解链钝末端dsDNA,但其结合亲和力和解链效率低于有3′端ssDNA的dsDNA.推测BLM642～1290解旋酶在与dsDNA底物结合和解链时是单体形式,可能以尺蠖的形式解开dsDNA.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶的功能特征提供理论基础.; 骆衡许厚强陈祥刘朝前许庆贺李坤; 关键词：DNA结合

RecQDNA解旋酶结构与功能及其相互关系的研究: 2020年; RecQ解旋酶是DNA解旋酶中的一个家族,从细菌到人类均具有高度保守性.人类RecQ解旋酶有:RecQ1、BLM、WRN、RecQ4和RecQ5五种.RecQ解旋酶的缺陷易患相关遗传病和各种癌症.RecQ解旋酶作为一种分子发动机,将ATP水解产生的化学能量转化成机械能,以"蠕动"和"滚动"两种模式沿DNA分子运动,解开双链DNA,通过复制、转录和翻译指导蛋白质合成.RecQ解旋酶在DNA复制、修复、重组、转录、端粒维持等细胞代谢过程中具有非常重要的作用.项目总体思路是弄清RecQ解旋酶结构与功能及其相互关系,为靶标新药的设计治疗提供科学理论基础.研究内容包括:①解旋酶活性检测新方法的建立;②大肠杆菌RecQ解旋酶结构与功能关系研究;③人BLM解旋酶重要结构域及其功能研究;④RecQDNA解旋酶动力学研究.; 许厚强奚绪光窦硕星徐春华任华郭融冰陈祥; 关键词：DNA解旋酶蛋白质合成 DNA复制双链DNA

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贵州省国际科技合作计划(G[2011]7008)