国家自然科学基金(30070333)
- 作品数：51 被引量：308H指数：10
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- 转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?
- 付军科周清华朱文王艳萍刘伦旭陈小禾聂强李定彪李印
- 关键词：L9981GSK-3ΒΒ-连环蛋白
- 小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinasesuppressorofRas,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体。但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点。本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(NKSR)和羧基端(CKSR)的真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达。方法通过PCR方法扩增NKSR和CKSR目的片段,利用基因重组技术构建pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,通过Westernblot方法检测目的蛋白的表达。结果通过酶切和测序鉴定,pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体序列正确,编码框正确。转染后的293T细胞经Westernblot检测,能够表达目的蛋白。结论成功构建了pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体并可在293T细胞中表达,为以后的研究奠定了基础。
- 杨雪琴周清华朱文朱大兴马力李昌林王艳萍陈小禾马家宝
- 关键词：真核表达基因重组
- 人肺癌细胞株L9981-nm23-H_1的建立被引量：8
- 2004年
- 目的 建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法 应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 H1 。应用PCR和Westernblot检测L9981 nm2 3 H1 细胞中nm2 3 H1基因及其蛋白表达。结果 成功构建了逆转录病毒载体pLXSN nm2 3 H1 EGFP。nm2 3 H1 cDNA导入到L9981细胞株中 ,并检测到L9981 nm 2 3 H1 细胞中有nm 2 3 H1 蛋白表达。结论 nm 2 3 H1 基因在细胞株L9981 nm2 3 H1 中能持续。
- 车国卫周清华王艳萍陈军刘伦旭覃扬孙芝琳陈小禾朱文
- 关键词：NM23-H1基因肺肿瘤
- 检测CK19 mRNA和MUC1 mRNA诊断非小细胞肺癌淋巴结微转移被引量：19
- 2004年
- 目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)淋巴结微转移的基因诊断方法 ,并分析CK19mRNA、MUC1mRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法 应用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR) ,对 3 1例NSCLC的 119枚淋巴结中的粘蛋白 1(MUC1)mRNA、角蛋白 19(CK19)mRNA表达情况进行检测 ;对照组为 10例肺良性病变患者的 3 5枚淋巴结。结果 3 1例NSCLC患者的 119枚淋巴结中 ,66枚 ( 5 5 .5 %)淋巴结存在CK19mRNA阳性表达 ,65枚 ( 5 4.5 %)存在MUC1mRNA阳性表达 ;肺良性病变患者 3 5枚淋巴结中CK19mRNA和MUC1mRNA表达均为阴性 ,与肺癌组比较均有显著性差异。结论 MUC1、CK19基因均可作为RT PCR法检测NSCLC患者淋巴结微转移的分子标志物 ,两者联合检测可能有助于早期诊断肺癌转移。
- 牛中喜周清华孙芝琳孙泽芳朱文王艳萍车国卫秦建军陈晓禾
- 关键词：非小细胞肺癌淋巴结微转移MUC1基因
- nm23-H_1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响被引量：5
- 2006年
- 背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性。结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P<0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01)。结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。
- 马力周清华朱文朱大兴杨雪琴王艳萍陈小禾张敏高利伟赵颖
- 关键词：NM23-H1基因GSK-3Β点突变
- 分子检测非小细胞肺癌外周血中MUC1表达的临床意义被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)患者外周血微转移的分子诊断的临床意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,对 31例肺癌患者和 10例肺良性病变患者外周血中MUC1基因mRNA表达进行检测。结果 术前 10例NSCLC患者检测到外周血肺癌微转移 ,外周血微转移与肺癌组织学类型 ,细胞分化程度及P -TNM分期均存在密切关系 (P <0 .0 5 )。 10例肺良性病变患者的外周血中未检测到MUC1mRNA表达。结论 MUC1基因mRNART -PCR法检测肺癌患者外周血微转移具有较高的特异性和敏感性 ,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。
- 牛中喜郑静晨朱金如李树军彭碧波纪小龙周清华
- 关键词：分子检测非小细胞肺癌外周血MUC1肿瘤微转移
- 非小细胞肺癌患者手术前后血清中内皮抑素和VEGF水平变化及相关性研究被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)患者手术前后血清中内皮抑素(endostatin)和血管内皮生长因子(vasular endothelial growth factor,VEGF)水平的动态变化规律及两者水平变化的相关性。方法:用ELISA法检测46例NSCLC患者手术前后血清中endostatin和VEGF的水平。结果:1)NSCLC患者术后7d血清endostatin水平为(23·41±5·12)ng/mL,显著高于术前[(20·85±4·56)ng/mL]和术后1d[(18·89±4·67)ng/mL]血清endostatin水平,P值分别为0·011和0·000;术后7d血清VEGF水平为(3·75±0·71)ng/mL,显著高于术前[(1·72±0·46)ng/mL]和术后1d[(2·22±0·58)ng/mL]血清VEGF水平,P值均为0·000。2)NSCLC患者术前血清endostatin与VEGF水平呈非常显著负相关,r=-0·380,P=0·009。3)NSCLC患者术后7d血清endostatin水平与VEGF水平呈非常显著正相关,r=0·351,P=0·017。结论:NSCLC患者手术前、后血清endostatin和VEGF水平存在动态变化,且两者手术前后的水平变化有显著相关性,检测NSCLC患者手术前后血清中endostatin和VEGF水平可能是进一步预测肺癌恶性行为的有用指标。肿瘤防治杂志,2005,12(19)
- 刘颖周清华陆艳蓉张洁刘伦旭
- 关键词：内皮抑素类酶联免疫吸附测定
- 肿瘤转移相关基因与周围型肺癌CT征象的关系研究被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨VEGF和nm23-H1基因表达水平与周围型肺癌的病理生理学特征和CT征象之间的关系。方法:回顾性分析确诊的47例周围型肺癌患者CT表现,同时采用免疫组化方法(LSAB法)检测47例肺癌组织中的VEGF和nm23-H1表达水平。结果:1)VEGF、nm23-H1表达水平与原发肿瘤大小、淋巴结转移状态,pTNM分期均有密切关系(P<0.05)。2)VEGF与nm23-H1表达水平呈负相关(P<0.05)。3)VEGF基因的高表达和nm23-H1基因的低表达均与分叶征、纵隔淋巴结转移有关(P<0.05),且VEGF的高表达也与空洞征有关;二者表达水平与毛刺征、空泡征、胸膜凹陷征和支气管征均无关(P>0.05)。4)深分叶征、空泡征和支气管征与肿瘤大小有关(P<0.05),而与毛刺征、胸膜凹陷征和纵隔淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论:VEGF过度表达和nm23-H1低表达均与周围型肺癌的分叶征、空洞坏死征和纵隔淋巴结转移有密切关系。
- 车国卫白汉林孙江涛周清华周翔平张尚福刘伦旭
- 关键词：转移相关基因CT征象肺癌
- 人高、低转移大细胞肺癌细胞株双向凝胶电泳图像分析被引量：13
- 2005年
- 背景与目的 肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌患者治疗失败和死亡的主要原因。 为了更好地了解和阐明肺癌转移的分子机制,发现早期诊断和逆转肺癌转移的分子标志物,本研究应用双向 凝胶电泳技术,比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980)间蛋白质组 表达的差异。方法 利用固相pH梯度双向凝胶电泳,分离L9981和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析 软件比较分析并识别细胞间的差异表达蛋白质。结果 应用比较蛋白质组学技术对L9981和NL9980细胞 株的蛋白质表达进行双向电泳分离,成功地获得了蛋白组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱。在三次 重复实验结果中,在L9981和NL9980细胞株中检测到的蛋白质点数分别为902±169和941±173,蛋白质斑 点位置在IEF方向的平均偏差为(0.858±0.076)mm,在SDS PAGE方向的平均偏差为(1.514±0.127)mm, 蛋白质表达量的变异为12.06%～12.22%。经ImageMaster软件分析后发现有15个蛋白质点仅在L9981 肺癌细胞株中检测到有表达,27个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达。发现4个蛋白质点在两种肺癌 细胞株中均存在,但在两种细胞株间的表达量差异在2倍以上。
- 朱文邓幼林周清华陈晓禾王艳萍刘伦旭车国卫
- 关键词：蛋白质组双向凝胶电泳
- MMP-2、MMP-9在肺癌中的表达及其与肺癌转移和预后关系的研究被引量：26
- 2008年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平与肺癌转移和预后的关系。方法:应用免疫组化(LSAB法)检测了108例非小细胞肺癌和19例肺良性病变中MMP-2、MMP-9的表达水平。结果:(1)肺癌组织中MMP-2、MMP-9的表达水平均显著高于癌旁肺组织和肺良性病变肺组织(P<0.01)。(2)伴有淋巴结或/和远外转移的肺癌中MMP-2、MMP-9的表达水平均显著高于不伴有淋巴结或/和远外转移的肺癌(P<0.01或P<0.05)。(3)MMP-2、MMP-9在肺鳞癌中的表达水平显著高于在腺癌和腺鳞癌中的表达水平(P<0.01)。(4)肺癌组织中MMP-2、MMP-9的表达水平呈显著正相关(P<0.05)。(5)多因素COX比例风险模型分析显示:MMP-2、MMP-9的表达水平对于预测肺癌预后具有一定意义。结论:(1)肺癌中MMP-2、MMP-9的表达水平明显升高,且与肺癌的进展和转移有密切关系。(2)肺癌组织中MMP-2、MMP-9的表达水平呈显著正相关(P<0.05)。(3)检测肺癌中MMP-2、MMP-9的表达水平有助于预测肺癌的预后,指导肺癌的多学科综合治疗。
- 薛洋周清华张尚福刘伦旭
- 关键词：肺癌基质金属蛋白酶免疫组化预后
