中国烟草总公司科技项目([2010]221)
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
- 相关作者：钟晓武王进胡重怡任学良杨春元更多>>
- 相关机构：贵州省烟草科学研究院川北医学院川北医学院附属医院更多>>
- 发文基金：中国烟草总公司科技项目贵州省科技厅农业攻关项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 普通烟草八氢番茄红素脱氢酶基因的原核表达及表达谱分析被引量：4
- 2014年
- 基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotiana benthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶PDS基因(ABE99707)的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板,通过PCR方法获得了烟草NtPDS基因的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1749 bp,编码582个氨基酸,推测该蛋白等电点为7.53,理论分子量为65.04 kD。通过构建融合表达载体pET-32a-NtPDS,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下经1 mmol/L IPTG诱导4 h表达后,产生了以可溶性蛋白形式存在的NtPDS融合蛋白,并通过Western blotting验证融合蛋白获得表达。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析发现,该基因在烟草的叶片、花和茎中均有表达,在根中没有表达。该结果为进一步研究烟草八氢番茄红素脱氢酶NtPDS的活性和生物学功能奠定了基础。
- 钟晓武付强邹颉林世峰郭玉双赵杰宏任学良
- 关键词：烟草八氢番茄红素脱氢酶原核表达表达谱
- 烤烟种质资源遗传多样性和群体结构及亚群特异性研究被引量：2
- 2012年
- 筛选多态性丰富的16对SRAP引物,对不同地理来源的276份烤烟资源的遗传变异进行分析,结果表明:16对SRAP引物共检测出611个等位位点,平均每对引物对38.19个,多态性较高;国外烤烟品种遗传多样性高于国内品种,贵州烤烟品种遗传多样性水平较低;NJ法聚类、PCA分析和STRUCTURE群体结构分析结果相互吻合,证明烤烟是与地理来源和亲缘关系密切相关的资源群,贵州烤烟资源形成了独立的组群,其遗传背景独特;各烤烟群体拥有独立的特有和特缺等位位点,群体间互补等位位点丰富,利用国外品种来拓宽国内烤烟品种的遗传基础最具潜力。
- 张吉顺杨春元吴春胡重怡王仁刚郭玉双任学良
- 关键词：遗传特异性SRAP
- 烟草突变株SN01、SN02抗PVY~N相关基因的克隆及表达分析
- 烟草抗病突变株SN01、SN02为本实验室筛选获得的高抗PVY~N(potato virus Y vein necrosis strain)的具有自主知识产权的烟草新种质。为了进一步明确其抗PVY~N的分子机制,本文研究...
- 朱丹安梦楠赵艳琴赵秀香吴元华
- 关键词：克隆
- 烟草突变株SN01、SN02抗PVYN相关基因的克隆及表达分析
- 烟草抗病突变株SN01、SN02为本实验室筛选获得的高抗PVY
- 朱丹安梦楠赵艳琴赵秀香吴元华
- 关键词：克隆
- 烟草植物螯合肽合成酶PCS1基因的电子克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 为了研究烟草中重金属镉的代谢转运基因,以马铃薯的植物螯合肽合成酶phytochelatin synthases 1(PCS1)基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:AJ548472.1)为信息探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个植物螯合肽合成酶基因(NtPCS1),并对其进行了序列分析。序列分析结果:NtPCS1包含完整的开放读码框,编码531个氨基酸,含有2个保守域Phytochelatin_C和Phytochelatin;通过同源比对和进化分析发现,NtPCS1氨基酸序列与番茄PCS1的序列一致性达到85%,与已报道的树烟草NgPCS相比,在N端多出30个氨基酸。以上结果表明NtPCS1是栽培烟草中新发现的金属镉代谢转运基因。
- 付强钟晓武邹颉林世锋郭玉双赵杰宏王轶任学良
- 烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达被引量：5
- 2014年
- 为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。
- 钟晓武付强邹颉赵杰宏林世锋郭玉双任学良
- 关键词：烟草糖基转移酶基因蛋白酶
- 烟草原生质体制备体系的优化及PVY^N导入研究被引量：1
- 2015年
- 植物原生质体是除去细胞壁后仍具有活力的裸露单细胞,其在植物RNA病毒的复制机理研究方面具有广泛的应用。为了获得高产、高活力的烟草原生质体,以烟草(Nicotiana tabacum Linn.)品种K326为材料,对原生质体制备体系中的不同细胞壁酶解液成分、酶解时间、酶解渗透压稳定剂含量、离心时间以及离心转速等因素进行优化。结果表明:在含1%纤维素酶,0.5%离析酶,0.6mol·L-1甘露醇的酶解液中,26℃慢速震荡(40r·min-1)酶解4h,700r·min-1离心3min,得到产量及活力较高的原生质体,可直接用于植物病毒的接种试验;利用聚乙二醇(PEG)融合法向获得的高活力原生质体中接种马铃薯Y病毒N株系(Potato virus Y necrosis strain,PVYN),经培养后提取总RNA,通过PVYN特异性引物经RT-PCR扩增后检测条带明显,表明PVYN成功导入烟草原生质体并自我复制。
- 吴元华董雪安梦楠苏燕妮李晓冬
- 关键词：烟草原生质体制备
- 基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立
- 2014年
- CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测,表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系:酶切温度42℃,酶切时间60 min,酶切反应总体积15μL,包括8μL PCR产物、4.5μL ddH2O、1.5μL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/L KCL,100 mmol/L Tris-Cl,15 mmol/L MgCl2)和1μL CEL I酶(稀释为原始粗提液0.05倍)。
- 付强邹颉张吉顺王轶任学良
- 关键词：TILLING毛细管电泳
- 烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPI)基因家族的克隆及组织表达谱分析被引量：5
- 2014年
- 运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术从烟草(Nicotiana tabacum)中克隆了4个CPI基因的全长cDNA序列,分别命名为NtCPI1、NtCPI2、NtCPI3和NtCPI4,GenBank登陆号分别为KF057988、KF057989、KF057990和KF057991。基因序列分析表明4个基因分别编码98、98、120和123个氨基酸残基的蛋白质,都具有CPI反应位点的保守基序GG、QXVXQ和A/PW,同时具有植物CPI所特有的LARFAV基序,其中NtCPI3和NtCPI4的N端还包含一段27个氨基酸残基组成的信号肽。实时荧光定量PCR试验表明,4个基因的组织表达谱很广,在根、茎、叶和芽组织中都有表达。研究结果为进一步研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物中的生理功能奠定了基础。
- 林世锋元野任学良邹颉黎瑞源郭玉双赵杰宏王仁刚
- 关键词：烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族克隆组织表达谱
- PVYN导入烟草原生质体技术研究
- 本文首先开展了高产、高活力烟草原生质体制备技术研究。取80周室温培养的烟草K326叶片,使用刀片在叶背部轻划且不划破叶片,将其加入10mL附加不同浓度的甘露醇以及不同浓度的纤维素酶(Cellulase R-10)和离析酶...
- 董雪安梦楠苏燕妮吴元华
- 关键词：烟草原生质体RT-PCR检测
