上海市科学技术委员会基础研究重点项目(10411956500)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：吴宗贵梁春贺治青杨阳伍锋更多>>
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- 发文基金：上海市浦江人才计划项目上海市科学技术委员会基础研究重点项目上海市国际科技合作基金更多>>
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- 一种动态检测小鼠微量血中T细胞受体重排删除环含量的方法被引量：1
- 2015年
- 目的:通过检测比较外周血(颈动脉大量采血和微量隐静脉采血)、胸腺组织和脾脏组织等不同成分或组织中T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并建立一种通过微量外周血PCR预扩增的方法,评估胸腺输出功能。方法:采用C57BL/6小鼠作为实验对象,分成幼年组(5周龄,n=10)和成年组(15周龄,n=10)。经过隐静脉采血及颈动脉采血后处死小鼠,取小鼠胸腺器官和脾脏器官,提取基因组DNA(g DNA),隐静脉微量血g DNA通过PCR预扩增,提纯后再和颈动脉血、胸腺组织和脾脏组织g DNA一起进行实时定量PCR,分析各组织成分TREC的表达水平及差别。结果:幼年组胸腺组织及外周血中TREC的含量比成年组高,且二者趋势基本一致;而脾脏组织结果与其相反;幼年组小鼠胸腺组织中TREC的含量比脾脏组织中高,成年组小鼠结果与之相反;微量外周血经过预扩增后再进行实时定量PCR的结果与直接定量PCR结果一致,且更高效。结论:研究提供了一种新型高效的动态检测T细胞受体重排删除环和检测胸腺输出功能的方法。
- 代现良黄帅波贺治青林毅吴宗贵梁春
- 关键词：胸腺T细胞受体重排删除环
- 微创采血结合多色流式细胞术分析小鼠外周血记忆T细胞亚群被引量：2
- 2014年
- 目的为实现序贯多时间连续采血监测小鼠外周血记忆T细胞亚群的变化情况，建立并优化微创采血结合多色流式细胞术分析的方法体系。方法经隐静脉进行微创采血，使用荧光补偿微球进行多色荧光补偿矩阵的建立，在BDCalibur双激光流式细胞仪上分析小鼠外周血记忆T细胞亚群（初始T细胞、中心记忆T细胞、效应记忆T细胞），评估采血体积、全血是否离心、抗体孵育浓度、红细胞裂解后是否洗涤等参数对多色流式分析结果的影响。随后采用优化的流式细胞分析方法动态评估C57和动脉粥样硬化（As）易发载脂蛋白E基因敲除（apoE-/-）小鼠在从常规饮食切换至高脂饮食过程中记忆T细胞的演变过程。结果（1）经小鼠隐静脉可实现10～50μL采血，该采血可无需对实验动物进行麻醉，能够实现多次重复采血，且10μL全血即可满足多色流式细胞术分析的需要，并减少抗体用量。（2）联合高速离心分离血细胞进一步缩小抗体孵育体积，则可进一步节省抗体的用量。（3）对抗体浓度的优化能在保证检测结果准确性和可重复性好的基础上进一步降低抗体用量和背景荧光的干扰。（4）红细胞裂解后加用洗涤可进一步降低背景荧光，但延长操作时间；也可裂解后直接上机检测。（5）使用上述流式细胞学分析方法揭示：apoE-/-小鼠在常规饮食基线水平其体内的效应记忆T细胞水平即高于对照C57小鼠（P〈0．05），给予高脂饮食3周后基本达到平台，而C57小鼠在高脂饮食2周即达到平台，表明apoE-/-小鼠在AS斑块进展早期即出现免疫调节紊乱。结论采用隐静脉采血结合优化流式细胞术抗体孵育流程可实现序贯连续采血，完成对小鼠体内记忆T细胞亚群的动态观察。
- 杨阳俞诚虹段磊贺治青丁茹伍锋代现良黄帅波梁春吴宗贵
- 关键词：流式细胞术外周血记忆T细胞
