江苏省高校自然科学研究项目(07KJD320224)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：黄一虹徐开林潘秀英谷红红宋立孝更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院徐州医学院附属第三医院徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目徐州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 移植物化学修饰与阻断OX40一OX40L途径预防异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病的研究被引量：3
- 2009年
- 目的观察甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯（mPEG-SPA）与抗OX40L单抗预处理移植物对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响及其机制。方法供、受鼠的脾淋巴细胞体外混合培养，加入抗OX40L单抗孵育培养后，再用mPEG—SPA化学修饰，与C57BIM6供鼠骨髓细胞混合后移植给经致死量全身照射的BALB／c受鼠。同时设相应的对照组。观察移植后受鼠aGVHD的临床表现、病理学改变、存活时间及生存率等，检测移植鼠T淋巴细胞亚群，细胞因子的变化及异基因嵌合体。结果①单纯骨髓移植对照组小鼠均出现aGVHD临床表现，17d内全部死于aGVHD，存活时间为（12．1±5．5）d；而mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠一般状态较好，部分出现aGVHD表现，且较单纯骨髓移植对照组症状轻，皮肤、肝脏、小肠病理表现均较单纯骨髓移植对照组明显减轻，mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠存活时间分别为（36．2±24．9）、（32．0±24．8）和（44．3±23．2）d，均较单纯骨髓移植对照组明显延长（P〈0．05），其中抗OX40LmPEG—SPA联合预处理组小鼠平均存活时间最长（P〈0．05），mPEG—SPA单独预处理组和抗OX40L单独预处理组生存率分别为50．0％、41．7％，明显高于单纯骨髓移植组，OX40LmPEG—SPA联合预处理组生存率最高，为66．7％。②移植后对照组小鼠血清IFN一吖浓度升高，在＋10～＋15d时达高峰；而mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组降低，＋10d时降至最低，OX40LmPEG—SPA联合预处理组降低最明显（P〈0．01）。移植后对照组IL4、IL一10浓度轻度降低，而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组均明显升高（P〈0．05），＋10～＋15d达高峰，以联合组升高最明显（P〈0．01）。@mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组＋60d时异基因嵌合率�
- 黄一虹冯洒然杜冰徐开林潘秀英
- 关键词：甲氧基聚乙二醇化学修饰OX40L移植物抗宿主病
- 趋化因子受体7基因修饰的未成熟树突细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨趋化因子受体7（CCR7）基因修饰的未成熟树突细胞（imDC）对异基因骨髓移植（allo．BMT）小鼠急性移植物抗宿主病（6vno）的影响。方法构建CCR7重组慢病毒载体，包装后感染imDC；以C57BL／6小鼠为供鼠，BABL／c小鼠为受鼠，建立小鼠GVHD模型；实验分为4组，分别为单纯照射组、移植对照组、pXZ9．imDC组（空载体对照）和CCR7-imDC组；通过观察受鼠移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等评价CCR7-imDC防治GVHD的作用。结果单纯照射组、移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠存活时间分别为（8．20±1．48）、（12．20±2．78）、（20．70±6．01）和（27．50±7．55）d，CCR7-imDC组小鼠存活时间明显长于其他各组（P〈0．01）。移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠GVHD评分分别为（6．90±1．66）、（5．60±0．97）和（4．10±1．79）分，CCR7-imDC组较其他两组GVHD评分降低（P〈0．05），组织病理学改变最轻。移植对照组小鼠血清IFN-丫浓度升高，在＋i0d时达高峰，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IFN-γ浓度降低，＋20d时降至最低，CCR7-imDC组降低最明湿（P〈0．01）。移植对照组小鼠血清IL-4降低，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IL-4浓度渐升高，＋10d达高峰，以CCR7-imDC组升高最明显（P〈0．01）。＋30d，CCR7-imDC组存活受鼠骨髓异基因嵌合率为95％～100％，证实为完全供者型植入。结论CCR7-imDC能够明显延长受鼠的存活时间，减轻急性GVHD的发生。
- 李德鹏武家庆黄一虹宋立孝谷红红高彩玲李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：树突细胞基因CCR7小鼠移植物抗宿主病
- 树突状细胞与免疫耐受被引量：1
- 2013年
- 树突状细胞（DC）是目前发现体内功能最强大的专职抗原递呈细胞（APC），其主要来源于CD34＋造血干细胞。依据其成熟状态的不同而发挥不同的免疫调节作用，如成熟树突状细胞（mDC）可激活T细胞促进免疫应答，未成熟树突状细胞（imDC）及调节性树突状细胞（DCreg）可负向调节免疫应答，诱导免疫耐受。DC在感染、免疫性疾病、移植免疫及恶性肿瘤的发病机制与治疗中的作用成为免疫学界研究的焦点。近年来DC诱导免疫耐受的研究受到越来越多的关注，笔者就DC在免疫耐受中的作用作一综述。
- 谷红红黄一虹
- 关键词：树突状细胞免疫耐受T细胞
- 趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达被引量：4
- 2012年
- 背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。
- 宋立孝张璞李德鹏曾令宇陈翀潘秀英徐开林黄一虹
- 关键词：趋化因子受体7未成熟树突状细胞慢病毒载体真核表达
- 小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外培养及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的体外诱导培养小鼠骨髓来源调节性树突状细胞（DCreg），并从其细胞形态、免疫表型、功能特征等对其进行鉴定。方法无菌条件下取C57BL／6小鼠的骨髓单个核细胞，按体外诱导培养的培养体系不同，将其分为3组：未成熟DC（imDC）组（N=16），用含重组鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）20ng／mL，重组鼠白细胞介素-4（rmlL-4）10ng／mL的RPMI1640培养基诱导培养7d；②成熟DC（mDC）组，用含rmGM-CSF20ng／mL，rmIL-410ng／mL的RPMI1640培养基培养6d，予细菌脂多糖（LPS）刺激24h，使其成熟；③DCreg组：用含rmGM—CSF20ng／mL，II。一1020ng／mL，转化生长因子一81（TGF-131）20ng／mL的RPMI1640培养基培养7d，LPS刺激24h使其成熟（所有实验动物处置符合动物伦理学标准）。显微镜下观察DC的形态、超微结构，流式细胞仪检测其免疫表型，CCK一8法检测刺激淋巴细胞增殖活性，趋化实验检测细胞迁移能力。结果①利用不同细胞因子组合的培养体系能诱导生成具有典型树枝状突起的DC细胞，透射电镜下观察到mDC放射状突起多而密集，细胞表面褶皱多，imDC、DCreg放射状突起较稀疏，细胞表面褶皱减少；②mDC高表达CD80、CD86、CDllc和IA／IE分子，imDC低表达CD80、CD86、IA／IE分子，高表达cDllc，DCreg高表达CD45RB，低表达CDllc、CD80、CD86；③DCreg组和imDC组体外刺激异基因淋巴细胞增殖能力较弱。3组DC刺激异基因淋巴细胞增殖率比较，差异有统计学意义（F-163．24，P〈O．01）；④DCreg的趋化迁移能力最强。3组迁移率相比，差异有统计学意义（F-560．644，P〈0．01）。结论应用细胞因子GM—CSF，IL-10和TOF-能成功诱导培养出小鼠骨髓源性CDllcCD45RB“曲调节性DC，其功能特征为移植免疫耐受的进一步研究奠定实验基础。
- 谷红红黄一虹武家庆刘苍春曾令宇李德鹏李振宇徐开林
- 关键词：树突状细胞调节性免疫耐受小鼠
