广东省科技计划工业攻关项目(2012A020602108)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：欧阳乐军曾富华黄真池沙月娥梁卓玲更多>>
- 相关机构：湛江师范学院广东石油化工学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家级星火计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 尾巨桉胚状体诱导及愈伤组织差异研究被引量：6
- 2014年
- 以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对多种不同浓度生长调节剂组合的优化,进行胚状体诱导研究;并对胚性与非胚性愈伤组织进行形态解剖学观察、相关生理指标检测以及相关基因荧光定量PCR分析,以揭示尾巨桉胚性愈伤组织非胚性化发生的机理,为建立尾巨桉体细胞胚胎再生体系提供参考。结果表明:(1)胚性愈伤组织在MS+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ培养基中诱导得到胚状体,外植体经过0.5mol/L蔗糖处理12h有助于胚性愈伤组织产生胚状体,胚状体最高发生率为16.7%。(2)尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织石蜡切片观察发现,两者的细胞形态特征存在明显的差异,胚性愈伤组织细胞体积小,排列紧密,表现出典型的胚性细胞特征,而非胚性细胞比较大,排列疏松,细胞呈不规则形状。(3)生理生化指标检测结果表明,非胚性愈伤组织中蛋白质含量、SOD、PPO及CAT活性均显著低于胚性愈伤组织,非胚性愈伤组织中木质素、可溶性糖含量以及PAL和POD活性要高于胚性愈伤组织,二者的反肉桂酸4-单加氧酶基因、淀粉磷酸化酶基因、谷胱甘肽硫转移酶基因、葡萄糖-1-磷酸腺苷酸转移酶基因、葡萄糖六磷酸异构酶基因、分支酸合酶基因以及苯丙氨酸解氨酶基因表达差异也达到显著水平。
- 欧阳乐军沙月娥黄真池曾富华
- 关键词：尾巨桉胚状体诱导
- 植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank中植物病原物诱导型启动子碱基序列设计引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增PPP3启动子。用PPP3替换pCAMBIA1301中与gus基因相连的35S启动子,构建重组质粒pCOMBIA+PPP3+gus后导入农杆菌GV3101。通过农杆菌介导的瞬时表达技术将受PPPs控制的gus基因导入烟草。分别接种青枯菌和水杨酸24 h后,烟草叶片中检测到gus基因转录效率分别提高了27.94,17.69倍。表明PPP3启动子具有本底表达水平低、诱导表达活性强的特点。
- 欧阳乐军黄真池沙月娥曾富华
- 关键词：诱导型启动子定量PCR
- 基本培养基对尾巨桉愈伤组织诱导及再生的影响被引量：2
- 2013年
- 为建立尾巨桉高效再生体系,研究基本培养基对尾巨桉再生的影响,以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,探讨MS、SDM和SPM 3种基本培养对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化以及增殖的影响。结果表明,在添加了2 mg/L PBU和0.05 mg/LIAA的MS培养基上,茎段外植体5 d后愈伤组织诱导率达96.3%以上;将愈伤组织接种在添加1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA的MS培养基上,诱芽率达91.8%,不同基本培养基对不定芽的增殖及伸长的影响差异达到极显著水平。
- 刘敏燕苏程瑜张润桃梁卓玲黄月权张晓明欧阳乐军
- 关键词：尾巨桉基本培养基愈伤组织诱导
- 尾巨桉不同类型愈伤组织内源激素含量差异比较被引量：10
- 2014年
- 本实验以尾巨桉无性系(DH32-29)无菌苗的茎段为外植体诱导得到的绿色、黄绿色、白色和褐色4种类型愈伤组织为材料。检测不同愈伤组织中内源激素的含量,结果显示,绿色和黄绿色胚性愈伤组织中的IAA、ABA、6-BA含量均比白色和褐色的非胚性愈伤组织高,其中ABA的差异最大,而GA3含量则在非胚性愈伤组织中含量较高。较高含量的GA3不利于胚性愈伤组织的形成,而往培养基中添加适量的ABA可提高尾巨桉胚性愈伤组织的形成率及胚状体的发生率。本研究为尾巨桉胚状体诱导及分化机理提供借鉴与参考。
- 欧阳乐军沙月娥黄真池李莉梅曾富华
- 关键词：尾巨桉愈伤组织内源激素
- 转TSRF1基因尾叶桉的培育及其广谱抗病性
- 2013年
- 以尾叶桉U6无性系无菌种子苗下胚轴为外植体,通过对不同生长调节剂的优化组合,建立尾叶桉高效再生体系。应用正交试验设计,优化尾叶桉遗传转化体系。经PCR和Southern杂交检测表明,TSRF1基因已整合到尾叶桉基因组中;转基因植株灌根接种青枯菌后,转基因植株表现出发病延迟,抗性提高,抗性相关酶活性显著增强。转化植株离体叶片对疫霉菌抗性明显增强。荧光定量PCR的结果表明转基因植株接种致病菌后TSRF1基因表达量得到提高。研究结果表明,转TSRF1基因尾叶桉表现出一定的广谱抗病能力。
- 欧阳乐军刘媛黄真池曾富华
- 关键词：尾叶桉
- aiiA基因原核表达载体的构建与表达
- 2014年
- 【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA,经双酶切及测序鉴定后,进行诱导表达,并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明,重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA构建成功。表达条件优化结果表明,在25℃下用0.2mmol/L IPTG诱导9h,aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明,其能够降解细菌的AHLs信号分子,猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。转aiiA基因尾巨桉抗性检测结果表明,转基因植株抗性明显增强,表现为发病时间延迟,病情指数降低,评价为中等抗病水平。【结论】成功构建了aiiA基因原核表达载体,其诱导表达产物能猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。
- 欧阳乐军梁卓玲黄真池沙月娥曾富华
- 关键词：AIIA基因N-酰基高丝氨酸内酯
