上海市科委重大科技攻关项目(04DZ14006)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：房静远孙丹凤朱红音翁玉蓉陈朝飞更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究细胞外信号调节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径(ERK-MAPK)与DNA甲基化间的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116,分别以PBS、二甲基亚砜(DMSO)为对照组,PD 98059 50μmol／L、5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)5μmol／L、PD 98059 50 μmol／L+5-aza-dC 5μmol／L进行药物干预,以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶(Dnmt)1、3a和3b基因转录水平;流式细胞仪分析细胞周期;MTT测定细胞活力;光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 ERK-MAPK途径阻断剂PD 98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b,Dnmt抑制剂5 aza-dC下调Dnmt 1、 Dnmt 3a和Dnmt 3b,日5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5- aza-dC明显降低G0／G1期细胞百分比(P<0．05),G2／M期细胞百分比明显增加(P<0．05);PD98059 使G0／G1期细胞百分比降低(P<0．05),G2／M期增加(P<0．05)。PD98059明显抑制细胞生长。PD 98059促进细胞分化,呈上皮样改变,细胞变狭长,胞质减少,细胞排列开始出现相对整齐;5-aza-dC干预组细胞大小不一,出现较多多倍体细胞(多个核分裂相)。结论 ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖,并诱导细胞分化;两者有协同作,ERK-MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。
- 陈朝飞房静远孙丹凤翁玉蓉李恩灵朱红音顾伟齐
- 关键词：细胞周期
- 叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系被引量：7
- 2006年
- 背景:叶酸缺乏与胃癌发生有关,亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸代谢途径的关键酶之一,叶酸受体α(FRα)可介导细胞外叶酸进入细胞内。目的:探讨人胃癌组织中FRα的表达及其与叶酸、MTHFR基因多态性以及胃癌生物学行为的关系。方法:收集38例胃癌患者的癌组织、癌旁和外周正常组织标本,以自动化学发光系统测定叶酸含量,以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并以即时逆转录PCR(real-timeRT-PCR)检测FRα的表达。结果:FRα在胃癌组织中的表达显著降低(P<0.01),且表达降低癌组织与表达无变化癌组织相比,叶酸含量呈降低趋势(P=0.06)。FRα的表达与MTHFR基因多态性无明显相关性。年龄≥60岁、有淋巴结转移以及肿瘤直径≥5cm的胃癌组织FRα表达水平更低(P≤0.05)。结论:胃癌组织中FRα低表达影响了细胞外叶酸进入细胞内,从而参与了胃癌的发生,其表达降低与年龄增长和胃癌的进展有关。
- 翁玉蓉房静远孙丹凤陈朝飞陆嵘顾伟齐朱红音
- 关键词：叶酸受体Α叶酸亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
- 胃癌组织中叶酸水平与代谢酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的关系研究被引量：8
- 2006年
- 目的 探讨人胃癌组织中叶酸水平与代谢酶亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性的变化及其关系.方法 收集38例晚期胃癌患者的癌区、癌旁和外周正常区域组织标本,以自动化学发光系统测定人胃癌组织叶酸含量,PCR-限制性内切酶片段长度多态性技术检测MTHFR基因677（C→T）和1298（A→C）两个常见多态,并以34例慢性浅表性胃炎（CSG）组织作为对照,分析叶酸、MTHFR基因多态性的变化及其关系.结果 CSG对照组中叶酸含量[（5.48±2.15）ng/m1]明显高于胃癌组织[癌区（3.65±1.97）ng/ml,癌旁（4.01±2.11）ng/ml,外周正常组织（4.00±2.20）ng/ml],胃癌组织MTHFR基因的两个多态位点中,677CT基因型叶酸含量最高,而1298（A→C）多态则未见明显差异.677TT基因型与CC基因型相比有减少胃癌发生的趋势,但与其生物学行为关系不密切.677TT基因型高叶酸组与CC基因型低叶酸组相比发生胃癌的相对风险度为0.11（95%CI：0.01～1.02）.癌组织标本检测中未发现1298CC基因型.结论 组织叶酸含量降低者发生胃癌风险明显增加.MTHFR基因多态性并不是胃癌的一个孤立危险因素,它和组织叶酸含量共同作用于胃癌发生.
- 翁玉蓉房静远孙丹凤陈朝飞朱红音
- 关键词：胃癌叶酸亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
- 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与结肠癌发生关系的荟萃分析
- 2006年
- 背景:亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)基因多态性与结肠癌发生密切相关,目前多数病例对照研究结果表明MTHFRTT型多态性对结肠癌发生具有保护作用,尤其是在叶酸充足和摄入低乙醇的个体。目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与结肠癌的相关性。方法:通过文献检索收集肿瘤组和非肿瘤组的病例对照研究,剔除不符合要求的文献,在全面文献回顾的基础上进行荟萃分析。结果:共有12篇符合条件的文献纳入分析,荟萃分析结果表明,以野生型677CC的基因型为参照,携带TT基因型个体发生结肠癌的危险性明显下降,OR为0.84(95%CI:0.76～0.94);1298CC型相对AA型发生结肠癌的危险性为0.85(95%CI:0.72～1.01)。携带677TT基因型同时摄入高叶酸的个体相对于CC/CT基因型伴摄入低叶酸者发生结肠癌的危险性明显下降,OR为0.76(95%CI:0.52～1.10);摄入高叶酸的1298AA和AC/CC携带者相对于携带AA基因型伴摄入低叶酸者发生结肠癌的危险性显著降低,OR分别为0.78(95%CI:0.63～0.95)和0.78(95%CI:0.64～0.96)。携带677TT基因型者不论乙醇摄入高低,发生结肠癌的危险性均为0.92,而CC/CT基因型同时摄入高乙醇者发生结肠癌的危险性为1.34(95%CI:0.92～1.95);1298位点基因多态性与结肠癌危险性似乎同乙醇摄入无多大关联。结论:MTHFR多态性与结肠癌发生危险性有关,677TT型和高叶酸摄入明显降低肿瘤发生危险性,而高乙醇摄入在677CC/CT基因型个体中有增加结肠癌发生的趋势。
- 孙丹凤王霞房静远
- 关键词：结肠肿瘤叶酸
- 四倍体补偿技术的建立及其应用被引量：1
- 2008年
- 常规基因剔除小鼠的获得主要是利用ES细胞的全能性先获得嵌合体小鼠,再利用ES细胞的生殖系传递能力,通过嵌合体与野生型小鼠的交配获得杂合子小鼠.而四倍体补偿技术则可绕过嵌合体小鼠阶段,直接获得基因修饰杂合子小鼠.利用电融合技术和Piezoelectric microinjection显微注射技术建立了四倍体补偿技术,小鼠四倍体胚胎的获得率(电融合率)为(93.01±1.37)%,经体外培养囊胚形成率为(82.49±2.08)%.通过显微注射方法将2种129品系小鼠来源的ES细胞(CJ7和SCR012)注射到四倍体囊胚腔中,获得了完全ES细胞来源的小鼠,ES鼠的获得率分别为2.7%和8.3%.经微卫星DNA检测,成体小鼠的10个被检测组织均为129小鼠来源的.同时,也利用基因修饰的ES细胞进行了研究,获得了2种基因修饰的完全ES细胞来源的杂合子小鼠,部分小鼠具有繁殖能力,经繁育已获得了纯合子,其中凝血因子Ⅷ基因敲除小鼠获得了预期的血友病小鼠表型.上述结果说明四倍体补偿技术可应用于基因修饰小鼠的制备.
- 匡颖孙霞邓涛卢希彬孙瑞林王铸钢费俭
- 关键词：基因修饰
- 亚甲基四氢叶酸还原酶对胃癌细胞基因表达的影响被引量：1
- 2006年
- 目的分析亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的真核表达质粒对人胃癌细胞生存力、DNA甲基化酶基因及肿瘤相关基因转录水平的影响。方法分别构建含有人野生型(正义)MTHFR(W)和反义MTHFR(A)的真核表达质粒,将其转染入人胃癌MKN45细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力,定量PCR检测DNA甲基化酶及胃癌相关基因的转录水平。结果转染野生型MTHFR质粒的胃癌细胞生存活力增高(P＜0．01),而转染反义质粒者生存活力降低(P＜0．01)。野生型MTHFR质粒下调c-myc、p21^(WAFI)和hMLH1基因表达,反义MTHFR质粒的转染则无明显的基因调控作用。结论重组MTHFR表达质粒可影响细胞生存活力及人胃癌细胞相关基因的表达,可望成为肿瘤基因防治的新靶点。
- 孙丹凤房静远翁玉蓉陆嵘朱红音李恩灵顾伟奇
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶胃癌基因表达甲基化
