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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5a/ORF5重叠区的分离被引量：4: 2012年; 以两个不同基因型的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用SOE-PCR将I型PRRSV的ORF2～5a替换进II型PRRSV的相应区域,旨在将I型PRRSV的5a从ORF5中独立出来进而研究5a蛋白的功能,同时探讨两型PRRSV的结构蛋白结构与功能关系。研究结果表明,I型PRRSV的ORF2～5a序列能稳定存在于嵌合病毒基因组内,表达的相应蛋白能在II型PRRSV中发挥同样功能。本研究首次将PRRSV的ORF5a序列从ORF5中独立出来,为进一步研究5a蛋白的结构与功能提供了理论依据和基础材料。; 刘闰夏蔺涛田德斌韦祖樟孙利厂陆嘉琦袁世山童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合

猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析被引量：2: 2011年; 为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。; 陆嘉琦高飞刘萍蔺涛袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制基因表达调控

猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定: 2012年; 查明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)致病性大幅增高的机制,进而研制用于防治流行PRRSV变异株的高效疫苗无疑是兽医工作者的当务之急。在弱毒株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS以及我室构建的高致病性HP PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,构建了nsp2替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆。将构建的嵌合克隆转染MA104,4d后观察到典型的CPE。通过RT-PCR和免疫荧光证明获得了一系列强弱毒株之间的嵌合病毒。这些嵌合病毒的构建成功和相应反向遗传操作平台的建立及应用,为研发预防HP PRRSV的高效嵌合疫苗奠定了基础。该类嵌合感染性cDNA克隆也为解析目前流行的HP PRRSV毒力因子和高致病力机制奠定了基础。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征 NSP2 感染性克隆嵌合病毒

猪繁殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区一茎环结构的功能解析被引量：1: 2010年; 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR将5′非翻译区(5′UTR)中部分一级序列进行系列突变,以改变5′UTR二级结构中的一保守茎部结构,从而解析PRRSV5′UTR中结构与功能的关系。通过DNA转染MARC-145细胞观察突变体克隆的感染性,并通过免疫荧光及Northern blot来研究拯救后突变病毒的复制、转录特性,以及通过空斑形态学分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV5′UTR中保守茎部结构的二级结构与病毒的拯救无直接关系,但其一级核苷酸序列却是PRRSV病毒复制所必需的,作者还找到直接调控病毒复制的核心位点。由此证实了5′UTR中调控PRRSV复制过程的必需序列,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。; 陆嘉琦高飞刘萍袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制基因表达调控

非结构蛋白2高变区在PRRSV复制中的作用: 2012年; 为了研究nsp2的非必需区在动脉炎病毒复制中的作用,采用定点突变PCR(site direct PCR)法对PRRSV全长感染性克隆pAPRRS的nsp2进行了系列缺失。结果显示,通过病毒拯救发现,nsp2部分区段可以忍受一定程度的缺失,但大幅度的缺失影响了病毒的复制、RNA合成翻译甚至病毒颗粒的成熟过程。结果表明,nsp2中多个氨基酸的变化可能影响PRRSV中多聚蛋白的水解、加工、成熟或RTC的组装。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒跨膜区病毒复制

套式病毒目病毒核衣壳蛋白的结构与功能研究进展被引量：5: 2010年; 介绍了套式病毒目病毒的分类及其基因组特点,论述了核衣壳(N)蛋白的结构及其功能特性,包括N蛋白的RNA结合特性、N蛋白的核定位特性、N蛋白在病毒复制中的作用,并就其在冠状病毒和动脉炎病毒中的不同作用进行了着重阐述。; 谭菲菲韦祖樟袁世山; 关键词：核衣壳蛋白

PRRSV强弱病毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定被引量：4: 2013年; 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆。将构建的嵌合克隆转染MA104细胞,4 d后观察到典型的细胞病变。通过RT-PCR和间接免疫荧光证明获得了强弱病毒株之间nsp2基因互换的嵌合病毒。这些嵌合病毒的构建和相应反向遗传操作平台的建立,为进一步研究HP-PRRSV的致病机制及相关疫苗的研发奠定了基础。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：PRRSV 感染性克隆嵌合病毒病毒株 PCR技术间接免疫荧光

携带PCV-2 ORF2的感染性PRRSV克隆在Marc-145细胞表达的研究被引量：1: 2012年; 为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)删除外源基因的机制,以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,构建在PRRSV全长基因组上同时包含其Nsp2区域缺失108nt及其ORF1与ORF2间插入猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2的全长cDNA pDCPV,将pDCPV转染Marc-145细胞,获得拯救病毒vDCPV。鉴定vDCPV的遗传稳定性发现,vDCPV比先前发表的只在PRRSV ORF1与ORF2间插入PCV-2ORF2获得的拯救病毒vCPV更具有遗传稳定性,这提示PRRSV删除外源序列的最主要机制是插入外源序列后导致基因组过长,由此可能影响N蛋白与基因组作用及其他结构蛋白包装过程。IFA结果显示,vDCPVP能微弱表达PCV-2cap蛋白。; 郑海红张可煜周艳袁世山; 关键词：外源基因表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞过程研究进展被引量：2: 2011年; 作为动脉炎病毒科成员之一的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),是一种严重危害世界养猪业的传染病病原。PRRSV如何侵入宿主细胞是病毒学的一个基本但却一直悬而未决的问题,明确该过程对优化设计PRRSV疫苗有重要指导意义。本文拟就PRRSV入侵细胞过程的国内外研究进展作一概述,重点展示细胞受体和病毒结合蛋白的研究动态。; 田德斌袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF4/ORF5基因区间的反向遗传操作:插入外源序列特性研究: 2012年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF4/ORF5基因间隔区有10个核苷酸(nucleotide,nt),为了探索ORF4/ORF5基因间隔区作为外源基因插入靶点的可行性,本研究通过突变PCR技术,获得一系列ORF4/ORF5间在不同位置插入不同碱基数及特定序列的突变体,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明,在ORF4/5的10 nts间隔序列之前至少可插入13 nts;在间隔序列之后只能允许3 nts的插入;间隔序列之间能允许至少18 nts的插入,但允许插入的序列具有特异性,由此,暗示ORF4/5允许插入的外源序列与插入位置有关。本研究获得的诸多突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗奠定了基础。; 丛雁方张可煜高飞韦祖樟郑浩童光志袁世山郑海红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒感染性

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