国家自然科学基金(30972206)
- 作品数：8 被引量：47H指数：5
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- 蛇足石杉过氧化物酶和酯酶同工酶比较研究
- 2011年
- 采用聚丙烯酰胺不连续垂直平板电泳(PAGE)技术,对蛇足石杉的过氧化物酶(POD)同工酶及酯酶(EST)同工酶酶谱进行了比较分析。结果表明,两种同工酶在蛇足石杉的组织中均有不同的表达程度,在叶中POD检测到8条酶带,EST检测到7条酶带;在茎中POD检测到4条酶带,EST检测到6条酶带;在根中POD检测到5条酶带,EST检测到5条酶带。两种酶同工酶带型在蛇足石杉中存在明显的组织器官特异性。
- 袁带秀钟飞恩特马克.布拉提白
- 关键词：蛇足石杉POD同工酶EST同工酶
- 禽多杀性巴氏杆菌粘附蛋白Cp39的交叉免疫保护作用被引量：10
- 2010年
- 【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白,并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白,将rCp39蛋白以可溶形式表达在大肠杆菌BL21后,用Amylose Resin亲和层析柱纯化。分别以100μg剂量的鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白、DSA培养基培养菌体荚膜蛋白、纯化的Cp39蛋白和rCp39蛋白通过皮下注射各试验组小鼠,生理盐水为对照组,第二次免疫后2周分别以A:1型菌C48-3株(6.7×102cfu)和A:3型菌C51-3株(1.1×103cfu)进行攻毒试验。采集免疫后小鼠血清,用ELISA法检测抗体水平,并计算免疫保护率,来评价4种抗原对小鼠的交叉保护效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白的条带和分子量相似,且体内外表达的Cp39蛋白的分子量相同;ELISA结果表明Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠血清rCp39蛋白特异性抗体的水平显著高于其他两组(P<0.05);保护试验表明,体外增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和60%,鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠、Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和80%。【结论】粘附蛋白Cp39是禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白中的主要交叉保护抗原,可以作为禽霍乱亚单位疫苗。
- 恩特马克.布拉提白彭清忠严芳何翠吾鲁木汗.那孜尔别克
- 关键词：多杀性巴氏杆菌粘附蛋白免疫原性
- 猪丹毒丝菌天然SpaA和重组SpaA-N免疫保护效果的评价被引量：15
- 2010年
- 【目的】本试验以小鼠为动物模型,评估了猪丹毒丝菌重组表面保护性抗原A的N端保护区域(rSpaA-N)和天然SpaA的免疫保护效果。【方法】将猪丹毒丝菌C43311株SpaA-N以可溶形式表达在大肠杆菌BL21中,用GST Bind Resin纯化试剂盒纯化rSpaA-N,采用电洗脱法从猪丹毒丝菌C43311株NaOH提取抗原中纯化天然SpaA,将rSpaA-N、天然SpaA和NaOH提取抗原制成亚单位疫苗,同时设GST及生理盐水对照组,间隔2周分3次皮下免疫小鼠,第3次免疫后2周用100LD50猪丹毒丝菌C43065株进行腹腔攻毒,采用间接ELISA方法检测免疫组小鼠血清的抗体动态变化。【结果】SDS-PAGE结果显示,采用GST Bind Resin纯化试剂盒和电洗脱法纯化得到了66kDa的rSpaA-N和64kDa的天然SpaA,蛋白含量分别为1.34mg/mL和1.26mg/mL,而Western印迹结果表明rSpaA-N和纯化前后的SpaA具有良好的免疫反应性。保护试验结果表明,不同免疫剂量的rSpaA-N组、天然SpaA组和NaOH提取抗原组均能完全保护小鼠受强毒株C43065的致死性攻击,而GST组和生理盐水组小鼠攻毒后全部死亡。ELISA检测结果表明,在不同免疫剂量的rSpaA-N组、天然SpaA组和NaOH提取抗原组小鼠血清中的抗体效价之间无显著差异(P<0.05)。【结论】本研究结果表明rSpaA-N具有良好的免疫保护作用,可以作为猪丹毒亚单位疫苗。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克张磊何翠彭清忠恩特马克.布拉提白
- 关键词：免疫保护亚单位疫苗
- HPLC测定不同产地白花泡桐中熊果酸和木犀草素的含量被引量：8
- 2011年
- 比较不同产地白花泡桐叶中熊果酸和木犀草素含量。采用Shim-Pack C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）经HPLC法测定含量。测定熊果酸的流动相为甲醇-水-乙酸（85∶15∶0.5）,体积流量为1.0 mL/min,检测波长210 nm;测定木犀草素的流动相为甲醇-水-乙酸（60∶39∶1）,体积流量为1.0 mL/min,检测波长350 nm。结果：熊果酸在1-15μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=0.021X＋0.052,r=0.999 6,平均回收率为98.3%;木犀草素在0.01-0.09μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=0.001 7X＋0.002 2,r=0.999 1,平均回收率为98.7%。结果显示,宏成制药4号基地白花泡桐叶中熊果酸和木犀草素含量分别为6.57 mg/g和25.5μg/g,显著高于其他地区的样品。本研究结果可为白花泡桐药材质量标准的建立提供实验依据。
- 李科吾鲁木汗.那孜尔别克乔杰李辉姚福成恩特马克.布拉提白
- 关键词：白花泡桐高效液相色谱法熊果酸木犀草素
- Zipf定律及人工神经网络在环境污染事故预警中的应用研究被引量：1
- 2011年
- 在目前环境问题日益突出的背景下,为研究环境质量变化与经济增长之间的关系,利用齐波夫（Zipf）定律分析了广东省的环境污染事故发生次数与GDP之间的关系,并利用其在图形中规律性幂率区间,结合RBF人工神经网络对未来3年环境污染事故的发生次数进行了预测。结果表明,这2种方法对环境污染与事故预测值均在允许的范围内,平均值分别为6、5、4次。研究结果为有关部门防范未来环境污染事故发生,具有明显的警示作用。
- 袁志忠周耀渝曾硕董哲青
- 关键词：齐波夫定律人工神经网络环境污染事故预警
- 禽多杀性巴氏杆菌C48-3株hexABC基因缺失株的构建及其生物学特性分析被引量：2
- 2012年
- 为研究荚膜在禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)致病过程中的作用,本研究利用同源重组基因敲除技术构建禽P.multocida C48-3株荚膜多糖输出蛋白基因hexABC的缺失突变株,并以小鼠为动物模型检测荚膜缺陷对细菌毒力的影响。PCR、RT-PCR和DNA测序结果均表明253 bp的hexC基因下游序列、798 bp的hexB基因全序列和290 bp的hexA基因上游序列完全被四环素抗性基因替代,表明构建了基因敲除突变株C48-3ΔhexABC。电镜观察结果表明突变株荚膜合成能力缺失,对小鼠的致病性试验结果显示突变株毒力基本丧失。本研究获得的无荚膜突变株为进一步研究禽P.multocida的致病机理奠定基础。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克张宇凤龚凤娟恩特马克.布拉提白
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌基因敲除荚膜毒力
- 禽多杀性巴氏杆菌C48-3株ompH基因敲除突变株的构建及其生物学功能被引量：9
- 2013年
- 【目的】探讨ompH基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因,两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH,将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中,通过四环素抗性和菌落PCR筛选ompH基因的敲除突变株,并通过组合PCR、逆转录PCR和DNA测序对突变株进行验证。用生物学功能实验比较野生株、互补株和突变株在生长速率、荚膜结构、粘着能力和致病性等方面的差异。【结果】组合PCR、逆转录PCR和DNA测序结果证实ompH基因的敲除突变株C48-3ΔompH构建成功,电镜观察结果证实ompH基因的缺陷影响细菌的荚膜合成能力,粘附实验结果显示与野生株C48-3和互补株C48-3C相比突变株C48-3ΔompH对CEF细胞的粘附能力显著降低(P<0.01),而小鼠毒力实验结果表明突变株C48-3ΔompH的致病性相对减弱。【结论】本实验构建的突变株C48-3ΔompH,为进一步研究多杀性巴氏杆菌的致病机理奠定基础。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克张宇凤龚凤娟泽田拓士恩特马克.布拉提白
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌粘附
- 药用植物蛇足石杉的化学成分与药理活性研究进展被引量：8
- 2011年
- 综述了蛇足石杉植物在化学成分、药理作用、临床应用等方面的研究进展。并对该植物的发展前景进行了展望。
- 袁带秀恩特马克.布拉提白
- 关键词：蛇足石杉化学成分药理作用
