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鸡cvh启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体的构建及鉴定: 2009年; 探索建立一种用绿色荧光蛋白对鸡原始生殖细胞进行标记分离的方法。克隆并测序鸡原始生殖细胞特异表达基因cvh1.6kb启动子序列。序列分析表明它含有类似于TATAbox和CAATbox的元件,在其远端上游区域还有多个GC富含区。将cvh基因启动子亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pegfp-1的多克隆位点,成功构建表达载体pcvh-egfp。重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下分别转染鸡Ⅹ期胚盘细胞和鸡胚成纤维细胞,并于转染后12h在荧光显微镜下观察转染效果。实验结果显示:在胚盘细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大;在鸡胚成纤维细胞未检测到gfp表达。实验结果说明,由cvh基因启动子控制下的gfp可在Ⅹ期胚盘细胞特异表达,为利用流式分离技术PGCs标记分离、纯化研究奠定基础。; 耿立英张传生杜立新陈红菊沈萍付志新; 关键词：启动子绿色荧光蛋白胚盘细胞

细胞色素b基因标记绵羊种内亲缘关系的初步研究被引量：1: 2010年; [目的]从群体的角度,初步探讨细胞色素b(Cytb)基因标记绵羊种内亲缘关系。[方法]用PCR方法扩增出滩羊和洼地绵羊2个地方绵羊品种共112个个体的线粒体DNA(m tDNA)Cytb基因,用限制性内切酶EcoRΙ对其进行限制性长度多态性(RFLP)分析。[结果]在56个滩羊样品中,有51个个体检测到1个酶切位点,5个个体没有检测到切点,呈现出2种限制性态型。在56个洼地绵羊样品中均能检测到酶切位点,表现为1种限制性态型。[结论]受试绵羊品种线粒体DNA多态性较贫乏,且m tDNA Cytb基因在绵羊品种内、品种间都有很强的保守性。因此,Cytb基因标记绵羊种内亲缘关系有一定的局限性。; 耿立英张传生尹春光曹顶国杜立新刘铮铸付志新; 关键词：绵羊细胞色素B基因

家鸡基因组pre-microRNA SNP多态性分析与研究: ＜正＞引言本研究对鸡pre-microRNA及其侧翼区SNP位点进行了鉴定,利用生物信息技术估计SNP对pre-microRNA二级结构稳定性和microRNA靶基因选择的影响,分析不同区域SNP潜在的功能重要性,为鸡m...; 张传生耿立英刘铮铸冯敏山杜立新; 关键词：单核苷酸多态性; 文献传递

pEGFP-N-cENS2在鸡X期胚盘细胞中的表达: 以鸡CENS-2启动子调控的绿色荧光蛋白基因（p EGFP-N-c ENS2）为报告载体,初步采用脂质体、电穿孔两种转染方法体外瞬时转染鸡X期胚盘细胞,以探索获得较好的体外转染方法。本试验是分离新鲜的种蛋胚盘细胞,运用脂...; 耿立英张传生刘铮铸付志新沈萍陈娟; 关键词：胚盘细胞转染

鸡基因组pre-microRNA SNP多态性被引量：8: 2009年; 为探讨鸡pre-microRNA SNP的多态性及其可能的功能意义,对鸡471个pre-microRNA区域的SNP位点进行了鉴定和生物信息学分析。结果表明:pre-microRNA的SNP多态性显著地低于其侧翼区(P<0.01=,其种子区SNP变异对pre-microRNA二级结构稳定性的影响高于其他各区;microRNA成熟体SNP可能影响microRNA对靶基因的选择。研究结果提示:pre-microRNA相对于其侧翼区在分子进化过程中受到更大的选择压力;成熟体SNP可通过影响microRNA加工和靶基因的选择,改变多种生理过程,导致鸡种间表型变异。研究结果将为鸡microRNA的进化模式研究及其功能性SNP的鉴定提供参考信息。; 耿立英张传生杜立新; 关键词：小RNA 生物信息学单核苷酸多态

鸡mir-1644基因“seed”区的T>C多态分析被引量：1: 2011年; 【目的】观察"seed"区T>C多态对鸡mir-1644基因"茎环"结构和靶基因选择的影响,分析其在不同鸡群的遗传分布,为揭示其对mir-1644表达调控的影响及表型效应奠定基础。【方法】利用mfold和miRanda软件进行mir-1644二级结构模拟和靶基因预测,采用引入酶切位点RFLP技术对6个鸡群的179个个体进行基因型检测。【结果】①T→C突变可导致pre-mir-1644空间构型和自由能改变,稳定性降低;②预测到21个mir-1644-T和mir-1644-C基因差异调控的靶基因。③在汶上芦花鸡群体内以C等位基因为优势基因,与其它鸡间的基因型分布存在显著差异(P<0.01)。【结论】"seed"区T>C突变可能干扰或破坏mir-1644基因的表达调控,且CC基因型可能与汶上芦花鸡某些表型变异有关。; 耿立英张传生尹春光曹顶国杜立新陈娟; 关键词：SEED 单核苷酸多态

奶牛OLR1 3'UTR A223C多态的生物学信息分析被引量：3: 2011年; [目的]探索氧化型低密度脂蛋白受体OLR1 3'UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制。[方法]用miRanda(1.0)软件装载牛microRNA数据库,预测OLR1 3'UTR潜在的microRNA。[结果]共预测16个microRNA靶标,OLR1 3'UTR A223C突变定位于bta-miR-370靶标种子序列的互补区。[结论]由于OLR1 3'UTR A→C突变导致bta-miR-370靶标的消失,为OLR1 3'UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制深入研究提供依据。; 张传生耿立英尹春光曹顶国刘铮铸付志新; 关键词：生物信息 MICRORNA

pEGFP-N-cENS2在鸡X期胚盘细胞中的表达: 以鸡CENS-2启动子调控的绿色荧光蛋白基因（pEGFP-N-cENS2）为报告载体,初步采用脂质体、电穿孔两种转染方法体外瞬时转染鸡X期胚盘细胞,以探索获得较好的体外转染方法。本试验是分离新鲜的种蛋胚盘细胞,运用脂质体...; 耿立英张传生刘铮铸付志新沈萍陈娟; 关键词：胚盘细胞转染; 文献传递

鸡microRNA基因“seed”区4个SNPs的群体遗传分布被引量：1: 2011年; 采用CRS-RFLP技术研究了rs14076349、rs16681032、rs14934924和rs16681031共4个SNPs位点在蛋肉兼用型、蛋用型和药用观赏型3种经济类型的6个鸡群的遗传多样性。结果表明:rs16681032在所有鸡群中未检测到变异,rs16681031、rs14934924和rs14076349位点具有较高的次等位基因频率,分别为0.4553、0.1173和0.3296。兼用型鸡与药用观赏型鸡在rs16681031位点的基因频率分布差异显著(P<0.05);兼用型鸡与蛋用型鸡在rs14934924位点的基因频率分布差异极显著(P<0.01);rs14076349位点在所有经济类群间的基因频率分布差异极显著(P<0.01)。根据基因频率信息进行聚类分析,大致可将6个鸡群分为3类,聚类结果反映出不同鸡种microRNAs调控通路的差异。研究结果表明,鸡种系特异性microRNA基因可能受到正选择的影响而存在加速进化现象,其"seed"区SNPs位点在不同鸡种的经济表型的形成中可能发挥着重要作用。; 耿立英张传生尹春光曹顶国付志新刘铮铸; 关键词：MICRORNA SEED 单核苷酸多态

鸡胚卵巢源类ES细胞的培养和鉴定: 2010年; 来源于原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）的胚胎生殖细胞（Embryonic germ cells,EGCs）,与来自内细胞群的细胞一起统称为胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）,具有增殖能力强和可分化为机体所有细胞和组织的能力。; 耿立英张传生尹春光杜立新刘铮铸付志新颜静蕊; 关键词：体外培养

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