上海市青年科技启明星计划(11QB1406300)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 相关作者：李继安邵雷刘伟陈代杰林惠敏更多>>
- 相关机构：上海医药工业研究院上海师范大学河南天方药业股份有限公司更多>>
- 发文基金：上海市青年科技启明星计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：化学工程生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 格尔德霉素发酵工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 目的研究格尔德霉素产生菌吸水链霉菌SIPI.A.2039的发酵工艺,以提高产生菌生物合成格尔德霉素的能力。方法以本实验室保藏的吸水链霉菌SIPI.A.2039为出发菌株,从摇床转速、摇瓶装量、碳源、50L发酵罐参数等方面进行发酵工艺的优化研究。结果采用经过优化获得的发酵培养基和培养条件,发酵周期为144h时,格尔德霉素的摇瓶发酵效价可由原来的230μg/mL提高至2500μg/mL。在50L发酵罐中采用优化的溶解氧和补料工艺能够使格尔德霉素的发酵效价达到3700μg/mL,并使发酵周期比摇瓶缩短了48h。结论本实验得到的结果比国内外报道的格尔德霉素的发酵效价提高了两倍以上,该发酵工艺已经达到了产业化的要求。
- 林惠敏尹培军李继安陈代杰
- 关键词：格尔德霉素发酵工艺溶解氧补料
- 产诺加霉素链霉菌中失活snogA基因的研究
- 2014年
- 诺加霉素是重要的蒽环类抗肿瘤抗生素,由黑胡桃链霉菌ATCC27451发酵产生。本研究从诺加霉素产生茵中克隆得到560 bp的氨基甲基化酶(snogA)编码基因片段,并将其插入基因整合型质粒pKC1139的多克隆位点,构建得到基因中断质粒pLMX-3-58。通过接合转移和同源重组,构建得到氨基甲基化酶编码基因被中断的重组菌株mLMX-3-59。基因重组突变株基因型验证结果表明,中断质粒以正确方式整合入基因组,将氨基甲基化酶编码基因中断。发酵验证结果表明,重组菌株发酵产物中不含有诺加霉素。本研究表明sngA基因在诺加霉素生物合成途径中是必需的。这为进一步阐明诺加霉素生物合成途径和组合生物合成改造诺加霉素提供了参考。
- 李梦茜刘伟石煊雯李继安陈代杰邵雷
- 关键词：同源重组基因失活
- 犹他游动放线菌中酰胺水解酶基因拷贝数增加对转化棘白菌素B效率的影响
- 2012年
- 目的:利用ΦC31整合酶介导的位点特异性重组方法,构建棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数增加的犹他游动放线菌重组菌株。方法:构建含有棘白菌素B酰胺水解酶基因的基因整合型质粒pYGCQ-03-13,通过属间接合转移的方法将该基因片段转入犹他游动放线菌SIPI-T2001中;利用静息细胞转化法,考察其对转化效率的影响。结果:筛选得到的阳性重组菌株SIPI-GE.T2001,对棘白菌素B的转化效率最高达到61.7%。结论:增加棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数,有效地提高了犹他游动放线菌对棘白菌素B的转化效率。
- 刘爱娟常青李继安卢亮陈代杰苏敏邵雷
- 关键词：酰胺水解酶生物转化基因重组
- 夫西地酸产生菌菌落形态与代谢特征的研究被引量：1
- 2012年
- 通过对梭链孢脂球菌SIPI-A.3201进行紫外诱变处理,挑选出3种比较典型的单菌落.摇瓶发酵考察它们的生长代谢特性,检测菌体浓度、糖氮代谢、pH变化以及夫西地酸生物合成量等几项指标.并且对菌株Ⅰ和菌株Ⅲ发酵过程中的菌丝形态变化进行了研究.结果表明:与菌株Ⅰ和菌株Ⅱ相比,菌株Ⅲ草帽型的单菌落产抗水平最高,达到了约480×10-6g/mL.
- 邓昕蓝鸿董晓景李继安陈代杰
- 关键词：夫西地酸菌落形态
- 增加cmcJ基因表达盒拷贝数对转化头孢菌素C效率的影响
- 2013年
- 研究表明利用棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus(ATCC27064)的粗酶液能够在头孢菌素C的7位添加一个甲氧基,得到的7α-甲氧基头孢菌素C,可以作为头霉素类抗生素的半合成前体。本研究首先构建含有棒状链霉菌中cmcJ基因的重组质粒pHJJ-2,再通过属间接合转移的方法将该基因片段导入棒状链霉菌中,得到cmcJ基因表达盒增加的棒状链霉菌重组突变株。结果表明,重组突变株将头孢菌素C转化为羟基化头孢菌素C的转化率,从野生型菌株的57.0%提高到重组突变株的67.4%;甲氧基头孢菌素C的转化率由野生型的43.1%提高到重组突变株的51.9%。
- 黄娟娟郭兆霞李继安刘伟邵雷陈代杰
- 关键词：头孢菌素C生物转化棒状链霉菌基因重组
- 产诺加霉素链霉菌摇瓶发酵条件的研究被引量：2
- 2013年
- 诺加霉素是由黑胡桃链霉菌Streptomyces nogalater产生的结构复杂的蒽环类抗生素,具有较强的抗肿瘤活性。该文对实验室保藏的Streptomyces nogalater ATCC 27451进行菌种选育,得到了一株发酵效价高,遗传稳定的高产菌株。通过摇瓶培养,从发酵培养基和培养条件两方面进行发酵工艺的优化。培养基方面,从单一碳源,单一氮源的最佳种类和组合的筛选,到前体氨基酸以及油的添加进行尝试;培养条件方面,考察了温度,pH,装量,放瓶时间等因素,最终获得的最佳培养基和培养条件,与出发初始菌株和初始培养条件相比,从最初的发酵产量0.048 g/L提高到了0.312 g/L,最终发酵单位提高了6.5倍。这些工作为我们以后大规模的发酵诺加霉素奠定了基础。
- 刘伟石煊雯李梦茜李继安陈代杰邵雷
- 关键词：蒽环类抗生素抗肿瘤抗生素菌种选育培养基优化摇瓶发酵
- 流加补料技术在林可霉素发酵中的应用被引量：6
- 2012年
- 前期摇瓶预试验表明林可霉素(1)发酵过程中存在葡萄糖效应,整个发酵代谢过程特别是发酵前期耗氧量较高,于是在200 L发酵罐中针对上述两点进行了工艺优化。发酵中后期通过流加葡萄糖和硫酸铵解除葡萄糖效应,同时稳定1产生菌的发酵代谢环境,使整个发酵过程的菌丝形态呈现良好的新老接替,解决了1产生菌产抗后劲不足的问题。同时在流加补料工艺中延长了发酵周期,使1发酵放罐效价较分批补料工艺提高了50.3%,比目前国内1放罐的平均效价(7 500 g/ml)提高了91.1%。
- 李继安林惠敏牛金刚张宏周陈代杰
- 关键词：林可霉素分批补料发酵
- 制癌链霉菌ATCC15944发酵液中抗肿瘤组分的制备和初步鉴定被引量：1
- 2012年
- 新制癌菌素是1965年发现的烯二炔类抗肿瘤抗生素,聚(苯乙烯-马来酸)-NCS偶联物在日本主要用于临床的肝癌介入治疗,目前该药物在国内还没有生产。为了制备新制癌菌素。新制癌菌素产生菌Streptomyces carcino-staticus ATCC15944被在28℃、250 r/min条件下液体发酵,振荡培养72 h。发酵液经预处理后,离心后取上清液经硫酸铵分级沉淀、纯水膜透析分离纯化得到组分SIPI-ZX-1。HPLC分析表明产物纯度大于90%。SDS-PAGE和质谱数据显示,该蛋白质相对分子质量约为11 ku。该产物的抗人肝癌细胞的体外活性被测定。该结果与新制癌菌素的分子质量和抗肿瘤活性数值基本一致。本制备方法简捷,成本较低,本工作为进一步研究新制癌菌素的制备工艺奠定了基础。
- 郭兆霞陈顺陈秀华王娟邵雷
- 关键词：盐析SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
