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排序方式：

有汗性外胚叶发育不良一家系致病基因突变筛查被引量：1: 2012年; 目的:寻找有汗性外胚叶发育不良家系GJB6、GJB2和CTSC突变基因。方法:抽提外周血DNA,PCR扩增GJB6、GJB2和CTSC基因编码区的所有外显子,扩增产物纯化后直接双向测序,并与基因组序列进行比对分析,查找有无突变。结果:候选基因编码区所有外显子均未发现突变结论:GJB6、GJB2和CTSC基因编码区序列与本研究中有汗性外胚叶发育不良家系发病无关,致病基因待进一步研究。; 王占想宋亚丽陈楠王震英张莉; 关键词：GJB2基因

一残毁性掌跖角化病家系GJB2基因突变研究被引量：2: 2012年; 目的对一个中国汉族残毁性掌跖角化病家系进行GJB2基因突变检测，以明确其致病基因。方法收集该家系5例患者、4例正常人和100例非该家系成员外周血和家系患者临床资料。提取基因组DNA，PCR扩增包括GJB2基因整个编码序列在内的1015bp，扩增产物纯化后应用ABI PRISM3730XL自动测序仪直接双向测序，Sequencher4．10．1Demo软件与基因组序列进行比对分析，查找有无突变基因。结果该家系所有患者GJB2基因均存在一个杂合错义突变196G→C，导致第一细胞外区域（E1）第66位天冬氨酸被组氨酸替代（即D66H），而家系中4例正常人和100例非家系成员正常人对照的DNA测序结果均未发现此突变。结论GJB2基因中D66H错义突变是中国汉族人群中残毁性掌跖角化伴耳聋的致病原因之一。; 王占想陈楠宋亚丽王震英郭小璇张莉; 关键词：皮肤角化病掌跖突变

人GJB6基因Tet—onHaCaT细胞稳定株的构建与鉴定: 2016年; 目的以Tet—on慢病毒为载体建立稳定表达GJB6基因及其突变体的HaCaT细胞株，为后续研究有汗性外胚层发育不良的发病机制奠定实验基础。方法利用PCR技术扩增人GJB6基因野生型与突变型（A88V）基因，重组Tet—Oil慢病毒质粒，经基因测序及酶切技术对其鉴定，再将重组慢病毒转染入HaCaT细胞，经嘌呤霉索筛选出稳定表达编码缝隙连接蛋白Cx30的GJB6基因的细胞株。细胞株加四环素诱导后，通过RT—PCR检测GJB6基因的mRNA表达量，同时通过Western印迹检测Cx30与FLAG标签肽的表达，从而对稳定表达GJB6基因的HaCaT细胞株进行鉴定。用CCK8法检测GJB6基因野生型与突变型经四环素诱导表达后对细胞增殖的影响。结果经酶切、测序鉴定，重组慢病毒质粒构建成功。RT—PCR检测到稳定转染的HaCaT细胞中GJB6基因mRNA表达量明显增加，感染野生型Tet—on慢病毒的HaCaT细胞组（wT组）加四环素GJB6基因表达丰度是wT组不加四环素的113．369倍（P〈0．05），感染突变型（A88V）Tet—on慢病毒的HacaT细胞组（MU组）加四环素GJB6基因表达丰度是MU组不加四环素的3．249倍（P〈0．05）；Western印迹可检测到经四环素处理的WT组和MU组稳定表达Cx30与FLAG，而未经四环素处理的细胞和感染阴性对照病毒的HaCaT细胞组（NC组）未检测到Cx30与FLAG目的条带。NC组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均无统计学意义（P〉0．05）；wT组加与不加入四环素在4、8、12、24、36h时的A值差异均有统计学意义（P〈0．05）；MU组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建出稳定表达GJB6基因野生型及其突变体A88V的HaCaT细胞株。; 路雨婷王震英宋亚丽姬灿灿张莉; 关键词：外胚层发育不良症连接蛋白类 HACAT细胞

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山东省科技发展计划项目(2010GSF10812)

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