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白腐菌漆酶对莠去津最适降解条件的探讨被引量：2: 2012年; [目的]将白腐菌Coprinopsis cinerea okayama 7#130漆酶对三嗪类农药莠去津的降解条件进行了研究。[方法]向纯漆酶溶液中加入一定浓度的莠去津溶液进行降解反应,采用HPLC测定其含量,计算降解率。利用Box-Behnken设计对影响降解此农药的关键因素进行优化。[结果]经Design-Expert软件二次回归分析,得到莠去津降解的最适条件：pH值为6.9,温度为38.3℃,反应体系体积为5.3 mL,转速为186 r/min。在此条件下,莠去津降解率响应预测值为52.41%,验证值为52.32%。[结论]最适条件下的降解率提高了10%－15%,这为降低莠去津对环境的危害提供了科学依据。; 程科毕云枫沈明浩; 关键词：漆酶莠去津降解响应面法

栗生灰黑孔菌合成漆酶最佳发酵条件的优化被引量：1: 2011年; 研究了碳源、氮源、诱导剂、金属离子、pH值、温度、转速、装液量、接种量等培养条件对栗生灰黑孔菌产漆酶的影响。利用Minitab15软件、Plackett-Burman PB实验设计和响应面分析法对栗生灰黑孔菌产漆酶的发酵条件进行优化。结果表明:最佳液态发酵培养基组分为玉米秆粉9.976 g/L,黄豆粉9 g/L,ZnSO4.7H2O 0.3μmol/L,对苯二胺0.5 mmol/L;最佳培养条件为:温度28℃,转速180 r/min,pH值5.913,装液量60 mL/250 mL,接种量10%。在此条件下培养漆酶酶活可达431 U/mL。; 李振光沈明浩; 关键词：漆酶响应面

Plackett-Burman设计和响应面法优化火红密孔菌发酵产漆酶培养基被引量：13: 2011年; 目的:借助MINITAB15.0,采用Plackett-Burman实验设计法及响应面分析法,对影响火红密孔菌发酵产漆酶的培养基成分进行优化研究。方法:首先利用Plackett-Burman实验设计筛选出影响产酶的三个主要因素,即麦麸、葡萄糖和蛋白胨。在此基础上用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken实验设计及响应面分析法进行回归分析。结果:麦麸、葡萄糖和蛋白胨与漆酶活力存在显著的相关性,通过求解回归方程得到优化发酵条件:麦麸2.5%,葡萄糖2.0%,蛋白胨1.2%,pH自然。此时,漆酶活力达到最大值330.66U/mL,与初始设计发酵培养基中(238U/mL)相比漆酶活力提高了38.9%。结论:首次利用数学统计方法优化了火红密孔菌发酵产漆酶培养基,并建立数学模型,为该菌株漆酶的工业应用提供了一定的理论依据。; 张田田沈明浩; 关键词：漆酶响应面法 PLACKETT-BURMAN

一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达: 2012年; 以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。; 蒋海芹毕云枫华欣春陈丽丽徐雪霏沈明浩; 关键词：纤维素克隆原核表达

应用白腐菌漆酶提取人参皂苷Re的工艺研究被引量：3: 2012年; 利用漆酶对人参中木质素成分的降解作用,以提高人参皂苷Re提取率为目的,采用正交试验对漆酶酶解条件进行了研究。结果表明,人参皂苷Re最佳提取工艺为:1 g人参粉加入1.5 g漆酶(25 000 DLU/g),在60℃,pH值5.0下,酶解1.5 h,用甲醇加热回流提取人参皂苷Re。经漆酶酶解处理后人参皂苷Re提取率达到0.511%,比传统加热回流法提高了90.0%。; 王野沈明浩; 关键词：漆酶人参正交试验

黄多孔菌产漆酶最佳培养条件的优化被引量：1: 2012年; 采用Plackett-Burman设计法,对影响黄多孔菌生产漆酶的9个因素进行了筛选。结果表明,影响该菌产生漆酶的主要营养因素为碳氮比、铜离子浓度和pH值。在此基础上,采用响应面法对其中3个显著因子的最佳水平范围进行研究,利用统计软件Design-Expert进行二次回归分析。当碳氮比、铜离子浓度和pH值分别为4∶1、0.1 mmol/L和5.5时,漆酶产量从178 U/mL提高到446 U/mL,是优化前的2.5倍。; 徐雪霏毕云枫蒋海芹沈明浩; 关键词：PLACKETT-BURMAN 漆酶响应面

Thermotoga nea politana葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及其酶学性质被引量：2: 2013年; 目的：从新阿波罗栖热袍菌Thermotoga neapolitana（DSM4359）中克隆葡萄糖苷酶基因，并将其转化进大肠杆菌中进行体外表达，研究重组酶的酶学性质。方法：以Thermotoga neapolitana基因组DNA为模板，根据该基因序列设计引物，采用PCR法扩增出葡萄糖苷酶基因，将其连接到pET-28a（4-）载体上，转化入E．coli BL21（DE3）宿主菌中。经IPTG诱导体外高效表达。研究重组酶的最适反应温度、pH值和底物特异性。结果：PCR扩增得到825bp的片段，编码274个氨基酸，并连接到载体pET-28a（＋）上，成功转化到宿主菌中。并在体外进行了高效表达。丙烯酰胺凝胶电泳，目标蛋白相对分子质量约为63000。重组酶的最适反应温度为75℃，在70℃～85℃范围内仍保持60％以上活力。最适反应pH值为5．0，在pH3．0～6．0范围内仍能保持70％以上活力。最适底物为海藻糖，其次为龙胆二糖，其他糖苷键连接的二糖的活力均很低或没有活力。结论：Thermotoga neapolitana（DSM4359）中葡萄糖苷酶基因成功克隆并表达于大肠杆菌中。葡萄糖苷酶能特异性水解α-（1→1）糖苷键。; 毕云枫刘薇薇李彦阳杨万才沈明浩; 关键词：葡萄糖苷酶基因

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吉林省科技厅科研基金(20090553)