国家葡萄产业技术体系建设项目(CARS-30-bc-3)
- 作品数：11 被引量：85H指数：7
- 相关作者：张尊平任芳董雅凤范旭东胡国君更多>>
- 相关机构：中国农业科学院果树研究所更多>>
- 发文基金：国家葡萄产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立被引量：20
- 2012年
- 以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)、沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)和葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳李亚惠
- 关键词：多重RT-PCR
- 葡萄A病毒辽宁分离物外壳蛋白基因克隆及序列变异分析
- 葡萄皱木复合病(Rugose wood complex disease)是为害葡萄的重要病毒病之一,可造成葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退死亡.葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是...
- 任芳范旭东董雅凤张尊平王教敏
- 关键词：外壳蛋白基因克隆
- 葡萄A病毒外壳蛋白原核表达及抗血清制备被引量：3
- 2014年
- 葡萄A病毒（Grapevine virus A，GVA）为线性病毒科（Flexiviridae）葡萄病毒属（Vitivirus）的代表种，是葡萄皱木复合病（rugose wood complex disease）的重要病原之一，可引起葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退死亡等危害。GVA为线状单链RNA病毒，基因组共编码5个开放阅读框（ORF1-5），其中ORF4 编码外壳蛋白（coat protein， CP），是病毒粒子包裹和系统移动所必需的功能蛋白。GVA自然寄主为葡萄，机械摩擦可侵染本氏烟等草本寄主，由于嫁接和无性繁殖材料调运等因素造成该病毒远距离传播，目前在世界多个国家和地区均有发生。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君朱红娟
- 关键词：抗血清制备原核表达嫁接成活率VIRUSRNA病毒
- 葡萄浆果内坏死病毒变种类型1分离物全长基因组序列分析被引量：4
- 2018年
- 近年来,随着高通量测序技术的运用,国内陆续发现和报道了一些新的葡萄病毒,但由于尚缺乏相关的基础性研究及防治措施,给葡萄产业的健康发展带来一定影响。其中,葡萄浆果内坏死病毒（Grapevine berry inner necrosis virus,GINV）为2016年国内新报道的葡萄病毒,可引起一些葡萄砧木和品种产生褪绿斑驳和环斑症状,造成严重危害。
- 范旭东张尊平任芳胡国君李正男张双纳董雅凤
- 关键词：葡萄浆果病毒变种类型坏死基因组分离物
- 葡萄卷叶伴随病毒4和5简并引物和多重PCR检测被引量：1
- 2012年
- 研究建立了葡萄卷叶伴随病毒4和5(Grapevine leafroll associated virus 4and 5,GLRaV-4and 5)的简并引物及多重PCR检测方法。比较了单一PCR、多重PCR和简并引物检测方法的灵敏度,并对简并引物的特异性进行了分析。结果表明,采用简并引物和多重PCR对这两种病毒进行检测,其灵敏度与单一PCR相同,且简并引物仅对葡萄卷叶伴随病毒4和5具有特异性。本研究建立的方法能够同时、快速、灵敏地检测上述2种葡萄卷叶病毒,提高了检测效率,降低了检测费用。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳裴光前
- 关键词：多重RT-PCR
- 我国部分地区沙地葡萄茎痘相关病毒分离物外壳蛋白序列变异分析被引量：7
- 2014年
- 为明确我国葡萄中沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)的感染情况及病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的变异特点,从而为其致病性、病害的防治以及抗病毒基因工程等研究提供依据,本研究对采自我国16个省市自治区的65个葡萄品种305株葡萄样品中的GRSPaV进行RT-PCR检测,根据地区与品种差异选取了24个阳性样品进行cp基因克隆与测序分析,并对不同RNA提取方法进行了比较。结果显示,114株样品被GRSPaV侵染,平均带毒株率为37.4%;分离物间及同一分离物不同克隆间的序列差异较大,从24个分离物克隆获得的37条cp基因序列与来源于不同国家的12个GRSPaV分离物的核苷酸序列同源性为80.5%~99.7%,氨基酸序列同源性为88.8%~100%;各个分离物的遗传距离无明显地域差异;SiO2吸附法比SDS法和CTAB法更适宜葡萄样品RNA的提取。
- 朱红娟胡国君范旭东张尊平任芳董雅凤
- 关键词：RT-PCR检测
- 沙地葡萄茎痘相关病毒RT-LAMP检测方法研究
- 沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)是葡萄皱木复合病(Rugose wood complex disease)的病原之一...
- 范旭东董雅凤张尊平任芳
- 关键词：反转录聚合酶链式反应
- 葡萄A病毒外壳蛋白基因克隆及分子变异分析被引量：8
- 2012年
- 为获得葡萄A病毒（Grapevinevirus A，GVA）外壳蛋白（CP）基因，并为开展GVA-CP介导的抗病毒转基因研究提供基础，本研究从葡萄休眠枝条中扩增获得12个GVA分离物的CP基因序列，全长597nt，编码198个氨基酸。所得分离物间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83．9％～99．8％和92．4％～99．5％，与GenBank中12个GVACP序列比较，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为71．0％～93．1％和81．8％～98．0％。系统进化分析表明，本研究12个分离物CP序列与已报道的GVAI组亲缘关系最近。种群变异分析表明，GVA种群具有多种变异体类型，并且多个样品存在不同变异体类型的复合侵染。但绝大多数变异体克隆聚集在GVAⅠ组分支，有60％的克隆序列间同源性较高，并且聚集在同一个次级分支ⅠAa，表明其为该GVA种群的优势序列。克隆的GVACP基因以及优势序列群体的分析为葡萄抗病毒转基因研究奠定了基础。
- 任芳范旭东董雅凤张尊平王教敏
- 葡萄试管苗热处理脱毒技术研究被引量：9
- 2013年
- 为加快培育葡萄优良品种无病毒苗木,提高脱毒效率,开展了葡萄试管苗热处理脱毒技术研究。将携带葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)、葡萄卷叶相关病毒-1(GLRaV-1)和葡萄卷叶相关病毒-2(GLRaV-2)的8个葡萄品种试管苗进行恒温热处理,对分离成活的62个茎尖进行RT-PCR和ELISA检测。结果显示,62个茎尖中,29个茎尖脱除了上述5种病毒,葡萄卷叶相关病毒-1、葡萄斑点病毒、葡萄扇叶病毒、葡萄卷叶相关病毒-2和沙地葡萄茎痘病毒的脱毒率分别为81.8%、80.0%、78.1%、75.0%和61.5%。采用试管苗热处理结合茎尖培养方法可获得良好的脱毒效果,适用于葡萄无病毒原种母本树的培育。
- 张尊平范旭东胡国君任芳朱红娟董雅凤
- 关键词：葡萄葡萄病毒脱毒茎尖培养
- 沙地葡萄茎痘相关病毒的RT-LAMP检测方法被引量：9
- 2013年
- 本研究建立了一种用于沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)的RT-LAMP检测方法。以GRSPaV的RdRp基因序列(GenBank登录号:GQ478314)为靶序列,设计3组RT-LAMP引物,从中筛选出1组有效引物,并确定了适宜的反应温度和反应时间。对RT-LAMP产物进行HhaⅠ酶切,酶切片段与理论片段大小一致,证明了RT-LAMP产物的特异性。RT-LAMP方法能够检测出GRSPaV的RNA最大稀释倍数为10-4,与RT-PCR方法相比更为灵敏。田间葡萄样品RT-LAMP检测结果与已知样品带毒情况相同,表明RT-LAMP检测GRSPaV具有较好的可靠性。在RT-LAMP反应产物中加入染料SYBR GreenⅠ(×1000)可直接观察反应结果。建立的GRSPaV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏、可视化等特点,尤其适合基层使用,具有良好的应用前景。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳胡国君朱红娟
- 关键词：反转录聚合酶链式反应
