上海市科学技术委员会资助项目(9411954800)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：邹多宏赵君黄远亮夏伦果张秀丽更多>>
- 相关机构：同济大学附属东方医院上海交通大学医学院附属第九人民医院同济大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨髓基质细胞中Von Hippel-Lindau基因的siRNA表达载体构建及其检测被引量：1
- 2010年
- 目的:构建骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells BMSCs)中Von Hippel-Lindau(VHL)基因的siRNA表达载体并检测其对BMSCs细胞中VHL基因的干扰作用。方法:根据犬的VHL基因序列设计并合成4对siRNA oligo,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将4对双链的siRNA oligo分别插入到siRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个siRNA表达质粒(SR144-1,SR144-2,SR144-3,SR144-4)。用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致。干扰载体瞬时转染BMSCs,通过qPCR和Western印迹分别检测干扰载体对目的基因的沉默效果。为了提高转染效率及VHL基因的沉默效果,对SR144-4进行慢病毒干扰载体(pLenti-mi-VHL)构建。结果:通过对构建质粒克隆进行测序,证实重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列一致,转染BMSCs细胞24h和48h后分别用qPCR与Western印迹检测,显示SR144-4干扰效果最理想。通过测序结果比对,插入序列完全正确,pLenti-mi-VHL构建成功。结论:成功构建了BMSCs的siRNA-VHL表达载体,为进一步实验研究奠定了基础。
- 邹多宏赵君夏伦果张秀丽蒋欣泉黄远亮
- 关键词：骨髓基质细胞SIRNA干扰低氧诱导因子
