国家自然科学基金(30140003)
- 作品数：7 被引量：104H指数：7
- 相关作者：柳参奎张欣欣高野哲夫管清杰程玉祥更多>>
- 相关机构：东北林业大学东京大学中国农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水稻碳酸酐酶基因5’端启动子不同区域对基因表达调控的研究被引量：7
- 2005年
- 根据水稻碳酸酐酶基因5'端序列,从4处不同位置设计上游引物,在碳酸酐酶基因ATG前0位点处设计下游引物。通过PCR扩增基因5'端1600bp、964bp、585bp、313bp片段,将以上目的片段克隆到以GUS为报告基因的植物表达载体pBI121上,通过农杆菌介导法转化烟草。转化植株GUS活性检测结果,发现-1600～0bp片段启动GUS在烟草的叶、茎中有GUS活性,而其余3段区域(-964～0bp,-585～0bp,-313～0bp)未检测出GUS活性,这些暗示了-1600～0bp启动子区域在控制基因表达时,具有在叶、茎中表达,在根中不表达的组织特异性。
- 阚彬彬于耸柳参奎高野哲夫
- 关键词：基因表达调控酶基因水稻启动子GUS活性转化植株
- 苜蓿愈伤组织高频再生遗传和转化体系的建立被引量：22
- 2006年
- 本研究以MS为基本培养基,在不同浓度的2,4-D与6-BA联合使用的诱导培养基上,以苜蓿子叶为外植体,诱导愈伤组织,诱导率为55%～90.6%,其中2mg/L2,4-D+1mg/L6-BA诱导率最高,达90.6%;浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS+2mg/LKT+0.15mg/L6-BA+0.3mg/LNAA分化培养基的分化率最高并且植株颜色深绿。丛生芽在1/2MS+2mg/L酵母提取物的生根培养基上再生成完整的苜蓿植株。以建立的苜蓿高频再生体系为基础,愈伤组织为转化的受体,用根癌农杆菌介导苜蓿,利用GUS组织化学染色法,研究影响遗传转化的若干因素,获得了100株转基因植株。乙酰丁香酮的浓度为100!mol/L,菌液浓度OD600为0.3～0.5,最佳的侵染时间为15min,共培养时间为4d,卡那霉素浓度为50mg/L时转化频率最合适。最高转化频率可达80%,Kana抗性植株Northernblotting检测表明,目的基因已整合进苜蓿基因组中。建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系,为获得其它基因转化苜蓿,奠定基础。
- 金淑梅管清杰罗秋香王涛高野哲夫柳参奎
- 关键词：苜蓿GUS愈伤组织根癌农杆菌
- “植物细胞内pH调控系统”是适应环境逆境的一个耐性机制?被引量：22
- 2004年
- 本研究把“植物细胞内 pH调控系统”与植物抗逆性的关系作为研究对象 ,并探讨了参与植物细胞内pH调控相关的基因在碳酸盐 (Na2 CO3,NaHCO3)等逆境下的表达特性 ,其结果表明 :NADP苹果酸酶(NADP MalicEnzyme,NADP ME)基因、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 (PhosphoenolpyruvateCarboxylase,PEP Case)基因 ,还有细胞膜H+ ATPase (plasmamembraneH+ ATPase ,P H+ ATPase)基因、液泡膜H+ AT Pase (vacuolarmembranceH+ ATPase ,V H+ ATPase)基因、液泡膜H+ PPase (vacuolarmembranceH+ PPase ,V H+ Ppase)基因等的表达与NaCl逆境、碳酸盐逆境、外界环境 pH逆境有应答关系 ,显示了这些基因在逆境下的表达有被强化的趋势。通过对逆境胁迫后植物根活体切片进行的pH变化趋势的观察 ,结果表明 :植物根细胞在组织学水平上 pH有明显的变化。在逆境下水稻根的组织学水平的观察 ,暗示了根组织有被酸性化的趋势 ,从而我们推测在逆境胁迫下细胞内 pH发生了改变 ,不正常的细胞内 pH会抑制细胞的生长发育 ,使植物受害。由此 ,我们提出细胞内 pH调控系统是植物在长期的进化过程中获得的抗逆机制。在逆境下强化“细胞内pH调控系统”的调控能力能够提高植物的抗性。
- 柳参奎张欣欣程玉祥
- 关键词：植物抗逆性调控基因基因表达
- 逆境下水稻(Dryza sativa L.)rHsp90基因的克隆及功能分析被引量：15
- 2006年
- 本研究中,利用差异显示法,在碳酸盐逆境下,从水稻(OryzasativaL.)根的cDNA文库中克隆得到了水稻热激蛋白90基因(rHsp90,GenBankAccessionNo.AB037681)。Northern杂交结果表明,在水稻根中,rHsp90基因的转录水平在包括盐(NaCl,NaHCO3和Na2CO3),PEG,高pH(pH8.0和pH11.0)以及热激(50℃)逆境下,都受到了不同程度的诱导。同时,适量表达rHsp90基因的酵母(Saccharomycescerevisiae)在各种盐逆境以及热激逆境中,生长状态要好于对照。对转水稻rHsp90基因烟草的抗盐(NaCl,NaHCO3)分析表明,转基因烟草的生长势要好于野生型烟草。通过以上研究表明,水稻rHsp90基因与逆境之间具有一定的应答关系,并在植物适应环境逆境过程中起着重要的作用。
- 刘大丽张欣欣程玉祥高野哲夫柳参奎
- 关键词：水稻逆境转基因烟草酵母
- 水稻OsAPX1基因在烟草中的表达及其抗盐性研究被引量：13
- 2007年
- 本研究采用RT-PCR方法克隆得到水稻细胞质抗坏血酸过氧化物酶(OsAPX1)基因全长cDNA(基因登录号:D45423);将该基因构建二元植物表达载体pBI121-OsAPX1;用农杆菌EHA105侵染介导烟草叶盘转化法转基因,获得转基因植株,PCR鉴定遗传转化的烟草植株成功地整合了水稻OsAPX1基因;Northern blot鉴定结果表明转基因T1代植株Ta在mRNA转录水平上表达;对Ta株系进行Kana抗性鉴定,表明转基因T2代株系有抗性;对T2代株系做NaCl、NaHCO3、Na2CO3抗盐性鉴定,结果表明与对照相比表现出转基因植株抗(耐)性提高;取T2代植株的叶片在不同浓度H2O2处理下,抗H2O2毒害的能力显著强于对照,转基因植物的抗性有所提高,有望在抗盐碱性育种上应用。
- 管清杰罗秋香夏德习李耀文梁涵张欣欣西内俊策高野哲夫柳参奎
- 关键词：抗坏血酸过氧化物酶转基因活性氧烟草
- 拟南芥硫氧还蛋白M1型基因(AtTRX m1)与环境逆境之间的关系被引量：18
- 2007年
- 硫氧还蛋白家族是约12 kD的小分子蛋白质,含有高度保守的活性反应位点WCG/PPC,催化硫醇—二硫键相互交换,调节细胞内的氧化还原作用。在本研究中,通过RT-PCR法获得目的基因拟南芥硫氧还蛋白M1型基因 (AtTRX m1, GenBank Accession No. At1g03680)。通过Northern杂交分析拟南芥悬浮细胞系在 100 mmol/L NaCl、10mmol/L NaHCO3、50μmol/L ABA、10mmol/L H2O2 等逆境处理下mRNA表达水平的变化和硫氧还蛋白 M1 型转基因植株对NaCl、NaHCO3盐及ABA逆境的抗性分析,表明硫氧还蛋白M1型基因与生物环境胁迫有一定的相关性,尤其是氧化胁迫,能够增强植物对逆境的耐受力。从而为进一步研究硫氧还蛋白基因家族与逆境之间的相关作用奠定了基础。
- 夏德习管清杰金淑梅李宇佳梁涵张欣欣西内俊策高野哲夫柳参奎
- 关键词：非生物逆境转基因NORTHERN杂交
- 水稻线粒体ATP合成酶小亚基基因的鉴定及解析被引量：14
- 2003年
- 本研究把碳酸盐 (NaHCO3、Na2 CO3)对植物造成的逆境称为“碳酸盐逆境” (Carbonatestress)。从水稻根cDNA文库中筛选出一些与碳酸盐逆境相关的基因 ,水稻线粒体ATP合成酶 6kDa亚基基因 (简称 :RMtATP6基因 )为其中之一。该基因编码的氨基酸序列与Jansch等人 (1996 )从马铃薯(Solanumtuberosum )线粒体中纯化的线粒体ATP合成酶 6kDa亚基氨基酸序列 (F1F0 ATP合成酶的F0部分 )具有同源性 ,但是这个小蛋白的功能尚不清楚 ,其基因也没有被鉴定。本研究克隆了这个基因(Accessionnumber :AB0 5 5 0 76 ) ,并解析了在碳酸盐逆境胁迫下它的表达特性。RMtATP6基因编码的蛋白预测分子量为 6 5 78kDa ,预测的细胞内存在位置为线粒体膜间间隙 ,结果预示了RMtATP6基因编码的蛋白为水稻线粒体ATP合成酶 6kDa亚基基因。Southern杂交结果表明RMtATP6基因是水稻核基因组中的一个单拷贝基因。通过对RMtATP6基因在植物中的表达特性及在碳酸盐逆境下在酵母中的功能解析 ,表明了该基因与碳酸盐逆境有关。
- 张欣欣柳参奎
- 关键词：水稻线粒体基因鉴定
