国家自然科学基金(30972110)
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
- 相关作者：韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹张可心更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 3个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探
- 本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因。将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1(AvBD1)、鹅β-防御...
- 张名岳张可心韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性TOLL样受体信号转导
- 5个新的鸭β-防御素的分离、鉴定及其抗病毒机制的初探
- 本研究采用RT-PCR方法,分别从鸭肺脏和骨髓组织中扩增到5个新的β-防御素基因,将测序结果与已发现的禽β-防御素（AvBD）和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树并进行同源性分析。结果显示,这5个基因分别是鸭...
- 张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性抗病毒活性信号转导
- 鹅β-防御素基因克隆与生物学特性的初步分析被引量：8
- 2011年
- 本试验采用RT-PCR方法,从鹅的骨髓细胞中扩增到禽β-防御素(AvBD)基因。测序结果表明,该基因的cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸。经遗传进化分析发现,该基因推导的氨基酸序列与鸡AvBD5的同源性最高,达84.8%。因此,将其命名为鹅AvBD5。进一步将该基因定向插入到pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建pGEX-AvBD 5重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL 21,于37℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达情况。结果表明,重组鹅AvBD 5融合蛋白的分子量约为32 ku,重组蛋白以包涵体形式存在。采用菌落计数法进行抗菌活性测定,结果表明,重组鹅AvBD 5有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较强抗菌作用。此外,该蛋白对温度和pH有较高的稳定性。
- 周财源蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鹌鹑β-防御素9重组蛋白的原核表达及其生物学特性的初步研究
- 本研究采用RT-PCR法,首次从鹌鹑肺脏和骨髓组织中扩增到一个新的鹌鹑β-防御素基因。经核苷酸序列测定,得到鹌鹑β-防御素cDNA的序列,由204个碱基组成,编码67个氨基酸残基,序列覆盖编码区全长,其中有8个带正电荷的...
- 王瑞琴蔺丽娟周财源韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：鹌鹑Β-防御素重组蛋白抗菌活性
- 文献传递
- 鸭β-防御素16的分离、鉴定及其抗病毒机制被引量：1
- 2012年
- 【研究目的】旨在克隆与表达鸭β-防御素16(AvBD16)基因及测定其生物学特性,监测了鸭肝炎病毒感染后麻鸭不同组织AvBD16与TLR-7的动态变化。【方法】采用RT-PCR方法,从鸭骨髓组织中扩增到鸭AvBD16,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对其重组和合成蛋白进行生物学活性测定。采用荧光定量PCR方法,分别检测了鸭肝炎病毒对鸭AvBD16和TLR-7在不同组织中表达量的影响。【结果】鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性最高,为62%。重组和合成鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响,且溶血活性极低。重组AvBD16蛋白具有体外抗病毒活性。经鸭肝炎病毒诱导后,鸭AvBD16在肝脏及其他组织中被诱导表达或表达量显著上调,且与TLR7的表达量呈正相关。【结论】成功克隆并表达了鸭AvBD16基因,重组和合成AvBD16蛋白具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。重组AvBD16蛋白具有抗鸭肝炎病毒的活性,体内抗病毒作用可能受TLR-7通路调节。
- 张可心张名岳辛胜男韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性抗病毒活性信号传导
- 鹌鹑β- 防御素10基因的克隆与表达及其体内分布的检测被引量：3
- 2011年
- 为测定鹌鹑β-防御素10(AvBD10)体外抗菌活性及检测其在鹌鹑脏器组织的分布,本研究应用RT-PCR方法从鹌鹑肺脏组织中扩增到鹌鹑AvBD10,经序列同源性分析,鹌鹑AvBD10与鸡AvBD10的氨基酸序列同源性最高(83.8%)。将该基因亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中进行原核表达,SDS-PAGE电泳表明,鹌鹑AvBD10重组蛋白分子量约为31ku。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性,结果显示,鹌鹑AvBD10重组蛋白具有广谱的抗菌活性。采用定量RT-PCR法检测到AvBD10在鹌鹑脏器组织中广泛表达。
- 蔺利娟王瑞琴韩宗玺邵昱昊刘胜旺程宝晶孙黎李子瑞马得莹
- 关键词：鹌鹑重组蛋白抗菌活性
- 鹌鹑β-防御素10基因的克隆及其生物学作用的初步研究
- 本研究采用RT-PCR法,从80日龄鹌鹑肺脏组织中扩增到一个新的基因,经测序表明,该基因的cDNA片段为207bp,由68个氨基酸残基组成,分子内含有禽β-防御素的特征性氨基酸结构,经同源性分析,该基因与鸡β-防御素10...
- 蔺丽娟王瑞琴周财源韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 文献传递
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用被引量：4
- 2011年
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基,分别在分子内形成Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6共3对二硫键,与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97%。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 kD,具有良好的抗菌活性,对11种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外,该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。
- 张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定
- 禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因...
- 李子瑞邵昱昊韩宗玺刘晓丽刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌肽单克隆抗体
- 文献传递
- 鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性被引量：5
- 2012年
- 从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(AvBD)基因,在大肠杆菌中高效表达,检测其重组蛋白的抗菌活性。应用RT-PCR方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增AvBD5基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。测序得到这2个基因的cDNA大小均为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现,该基因推导的两组氨基酸序列与鸭AvBD5的同源性最高,分别为87.9%和78.8%,这两组氨基酸序列的同源性为83.3%。因此,将其分别命名为鸽AvBD5α(骨髓)和鸽AvBD5β(肝脏)。进一步将这两个基因分别亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。两个重组融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,及其融合蛋白的溶血活性。结果表明,重组鸽AvBD 5α、AvBD 5β融合蛋白的分子量约为32 kDa。具有明显的抗菌活性,对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性显著影响。此外,这两个重组蛋白对红细胞无显著溶血活性。
- 辛胜男张可心张名岳韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
