国家自然科学基金(30972108)
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：吉林农业大学辽宁医学院吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家科技支撑计划更多>>
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- 牛肌生成抑制素基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
- 2012年
- 采用RT-PCR技术扩增牛肌生成抑制素基因成熟片段,并克隆入质粒pSos中,测序鉴定后获得酵母双杂交诱饵重组质粒pSos-MSTN。将诱饵重组质粒与对照质粒转化入酵母菌cdc25Hα中。结果表明:该段基因表达的蛋白对酵母菌cdc25Hα无毒性和无自激活作用,这说明可以用此酵母双杂交系统对牛肌生成抑制素进行研究。
- 郑海舰王军柴孟龙郑立双窦长友赵静
- 关键词：肌生成抑制素酵母双杂交系统诱饵载体
- 酵母双杂交技术及应用的研究进展被引量：12
- 2013年
- 酵母双杂交技术是研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种非常有效的分子生物学方法,它是一种能直接检测胞内蛋白质相互作用较为简便、快捷、高效、敏感、广泛的方法。作者将主要介绍酵母双杂交技术的基本原理、应用及优缺点,现就酵母双杂交技术及其应用的研究进展作一综述。
- 郑立双李向楠孙城涛刘红羽刘勋贺明吕文发
- 关键词：酵母双杂交技术真核细胞蛋白质
- 牛MSTN蛋白与T-cap蛋白的相互作用验证
- 2014年
- 通过体内和体外试验研究牛MSTN蛋白与T-cap蛋白间的相互作用。构建pLEGFP-MSTN及pcDNA3.0-Flag-T-cap真核表达载体,共转染至293T细胞,利用免疫共沉淀技术检测两者间相互作用。再构建pGEX-4T-1-MSTN表达载体,经IPTG诱导表达并纯化GST-MSTN,将pcDNA3.0-Flag-T-cap载体转至293T细胞,通过GSTpull down检测两者间相互作用。利用各抗标签克隆抗体沉淀细胞裂解液,分别进行Western blotting检测,结果显示,体内和体外试验都可以检测到蛋白的表达。从而证实了MSTN与T-cap之间存在相互作用,本试验为在分子水平上为探索MSTN蛋白的新功能提供思路。
- 郑立双孙城涛李向楠刘红羽贺明刘勋吕文发
- 关键词：免疫共沉淀MSTN
- 牛骨骼肌酵母双杂交cDNA文库构建被引量：1
- 2012年
- 为构建应用于酵母双杂交系统的牛骨骼肌cDNA文库，利用Trizol法提取牛骨骼肌总RNA，采用SMART技术PCR扩增合成cDNA第二链片段，并与文库线性载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187构建酵母双杂交文库。结果显示文库容量达到1．7×10^7cfu／mL，插入片段主要在0．5～3kb范围内，文库重组率为80％。以上结果表明该文库质量好，能够通过筛选文库得到与目的蛋白相互作用的蛋白质。
- 王军王军赵静郑海舰
- 关键词：SMART酵母双杂交CDNA文库
- 不同杂交组合与营养水平对牛肌肉中MSTN基因表达的影响被引量：8
- 2012年
- 以夏洛莱杂交牛(夏杂牛)和利木赞杂交牛(利杂牛)为研究对象,旨在明确营养水平与不同杂交组合对肉牛半腱肌中肌生成抑制素(MSTN)基因表达量的影响及MSTN基因表达量与产肉率的关系。将夏杂牛和利杂牛随机分成3组,分别饲喂以高、中、低3种营养水平的日粮,饲喂10个月后,屠宰采样,利用实时定量荧光PCR技术测定半腱肌中MSTN基因相对表达量,并对半腱肌的产肉率与MSTN mRNA相对表达量作了相关分析。结果表明,低营养和中营养条件下,夏杂牛的半腱肌中MSTN表达量极显著高于利杂牛(P<0.01),而高营养条件下,两者差异不显著(P>0.05)。对于利杂牛,中营养组牛半腱肌中MSTN基因表达量极显著高于低营养组和高营养组(P<0.01),而低营养组和高营养组间差异不显著(P>0.05)。对于夏杂牛,低营养组MSTN基因的表达量显著高于中营养组和高营养组(P<0.01),而中营养组MSTN基因的表达量也显著高于高营养组(P<0.01),且高营养水平下的2种杂交组合牛半腱肌的产肉率都与MSTN mRNA表达量成强负相关。研究结果表明不同杂交组合和营养水平对牛MSTN基因在半腱肌中的表达均有显著影响,对于2个杂交组合,高营养水平下牛半腱肌MSTN基因的表达量均显著低于低营养水平下的各组试验牛,且高营养条件下,MSTN基因表达量和产肉率之间存在着强负相关。
- 吕文发贺实伟王军王军
- 关键词：不同杂交组合营养水平肌生成抑制素荧光定量PCR
- 中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛MSTN基因多态性分析被引量：9
- 2010年
- 分别以20头中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛为研究对象,采用创造酶切位点PCR与降落PCR相结合的方法对3个品种的基因外显子1的突变位点扩增,分析了3个肉牛品种之间的Myostain(MSTN)基因多态性。运用1对特异性引物扩增3个肉牛品种的MSTN基因已知外显1SNP位点,扩增片段大小为217bp。运用CRS-RFLP方法鉴定60头牛MSTN基因在3个群体中的分布情况。结果表明,在西门塔尔群体中等位基因C占优势,等位基因频率为60%,AA基因型频率为0;在夏洛莱群体中等位基因A优势,等位基因频率为57.5%,CC基因型频率为0;而在利木赞群体中未检测到这一突变。
- 吕文发杨连玉贺实伟杨雨江张嘉保
- 关键词：MSTN降落PCR肉牛
- 利用酵母双杂交系统筛选与牛MSTN相互作用蛋白被引量：1
- 2013年
- 本研究利用酵母双杂交系统筛选与牛肌肉生成抑制素(MSTN)相互作用的蛋白,为阐明MSTN生物学功能的调控机制奠定基础。首先,构建诱饵质粒pGBKT7-MSTN转化Y2HGold酵母菌,随后,与构建好的牛肌肉cDNA文库Y187酵母菌杂交配对,涂布接种在SD/-Trp-Leu-His-Ade营养缺陷培养基上筛选与MSTN相互作用的蛋白,并通过免疫共沉淀技术对筛选到的T-cap与MSTN进行相互作用验证。结果表明:经酵母双杂交两轮严格筛选,最终得到一种可能与MSTN特异性相互作用的Tcap蛋白,并且免疫共沉淀验证T-cap与MSTN蛋白在体内可以相互结合。试验表明:为进一步研究MSTN的功能和作用机制提供了新的线索。
- 赵静王军陈洋郑立双孙城涛吕文发
- 关键词：酵母双杂交MSTN相互作用蛋白
