吉林省科技发展计划基金(20050549)
- 作品数：6 被引量：10H指数：1
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- 靶向IRES序列的siRNA对口蹄疫病毒体外增殖抑制效果
- 2010年
- 为探讨靶向核糖体进入位点(IRES)区域的siRNA在真核细胞中对FMDV复制的抑制作用,对FMDV WFL株的IRES序列进行了保守性分析和二级结构预测,选择了靶向IRES保守的功能核心区的病毒复制原点附近的2个干扰靶位,设计并构建了shRNA真核表达质粒,转染到IBRS-2细胞后感染FMDV,通过双抗夹心ELISA和real-timeRT-PCR检测FMDV复制情况,结果表明,针对IRES区域的RNAi能够在一定程度上抑制FMDV的复制。
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- 关键词：口蹄疫病毒RNA干扰
- 口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立被引量：1
- 2010年
- 应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。
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- 关键词：口蹄疫病毒SIRNA真核表达系统
- 四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化
- 2010年
- 目的优化四环素及-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件。方法设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件。结果得出的最佳条件是:探针以30pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5h。结论优化出了耐药基因芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法。
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- 关键词：基因芯片
- 基因芯片检测细菌耐药基因
- 2008年
- 根据已知的耐药基因序列设计出检测四环素耐药基因特异探针7条、β-内酰胺类耐药基因特异探针5条,阳性坐标探针1条,长度为18～21 bp。根据探针序列两侧的保守区域设计了耐药基因扩增引物,引物长度17～20 bp。通过荧光聚合酶链式反应,从耐药菌株中获得四环素耐药基因7个,β-内酰胺类耐药基因5个。经过芯片制作过程优化试验和芯片杂交优化试验,结果表明,将探针以终浓度30μmol/L溶于50%DMSO中,在温度为20℃、湿度为70%的条件下点印于Aldehydeslide表面。扩增出的荧光标记产物经纯化后与2×杂交液混合,再与基因芯片在42℃杂交5h可检测到理想的杂交信号。芯片灵敏度试验结果表明,当模板拷贝数大于1×10^3个/μL时,可检测到较强的杂交信号。本试验最终研制出灵敏度高、特异性强的耐药基因检测芯片。
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- 关键词：基因芯片杂交耐药基因
- 靶向口蹄疫病毒IRES区RNA干扰位点的选择及shRNA表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 以口蹄疫病毒WFL株为试验株,对口蹄疫病毒的IRES序列进行了保守性分析和RNA二级结构预测,推测高度保守的FMDV复制原点区域位于容易被siRNA结合的IRESRNA二级结构的环区,因此,在该区选择确定了2个siRNA干扰靶位,设计并合成能表达其小发夹结构shRNA的表达模板,克隆到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫病毒IRES区的siRNA真核表达系统,为进一步研究针对该区的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用打下了基础。
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- 关键词：口蹄疫病毒SIRNA
- 短发夹结构RNA对口蹄疫病毒2B基因瞬时表达的抑制被引量：9
- 2008年
- 为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2B基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2B基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2B融合表达质粒瞬时共转染BHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2B基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2B基因的shRNA表达载体可以在BHK-21细胞中抑制2B基因的瞬时表达。
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- 关键词：FMDVRNA干扰
